何建業(yè) 張秋堂

CD105是內(nèi)皮細(xì)胞表面與增殖相關(guān)的膜抗原，同時(shí)又是調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (Transforming growth factor β，TGF-β)受體復(fù)合物成分之一，其主要作用為抑制TGF-β的生物學(xué)效應(yīng)，促進(jìn)血管新生，是新生血管的標(biāo)志。然而，CD105在腫瘤細(xì)胞，如原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、卵巢的子宮內(nèi)膜樣癌細(xì)胞上弱表達(dá)［1］。國(guó)外研究表明，CD105在部分急性白血病細(xì)胞高表達(dá)［1］，其臨床意義需要進(jìn)一步研究，國(guó)內(nèi)未見報(bào)道。本文應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了急性白血病骨髓細(xì)胞中CD105的表達(dá)，并探討了其臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 初治和復(fù)發(fā)急性白血病患者61例，其中ALL18例，AML43例;患者平均年齡38歲(14～70歲)，男40例，女21例，初治患者52例，復(fù)發(fā)患者9例。均為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科2007年5月至2007年12月住院患者，經(jīng)臨床、血常規(guī)和骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)與細(xì)胞化學(xué)染色，流式細(xì)胞學(xué)分型等檢查后確診，符合1991年FAB分型診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。浸潤(rùn)組定義為有淋巴結(jié)、肝脾腫大及齒齦腫脹的患者。對(duì)照組15例，男9例，女6例，年齡20～50歲(平均35歲)均為患非惡性血液疾病的住院患者，血常規(guī)及骨髓形態(tài)學(xué)正常，無肝、脾及淋巴結(jié)腫大。

誘導(dǎo)緩解治療方案及療效判斷初治AML患者(除M3外)采用標(biāo)準(zhǔn)蒽環(huán)類藥物聯(lián)合阿糖胞苷(3+7)方案進(jìn)行誘導(dǎo)化療。M3患者主要采用全反式維甲酸或全反式維甲酸聯(lián)合亞砷酸誘導(dǎo)治療，直至完全緩解(CR)。ALL患者接受標(biāo)準(zhǔn)VDCP(長(zhǎng)春新堿、柔紅霉素、環(huán)磷酰胺、強(qiáng)的松或地塞米松)方案或VDCLP(VDCP+左旋門冬酰胺酶)作為誘導(dǎo)緩解治療，1個(gè)療程治療結(jié)束3周后，根據(jù)血常規(guī)和骨髓細(xì)胞學(xué)檢查，參照張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(第三版)［2］判斷療效。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 CD105鼠抗人CD105單克隆抗體為美國(guó)Lab Vision公司產(chǎn)品;流式細(xì)胞儀:FAC-Scan型，美國(guó) BECTON DICKINSON(BD)公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 在無菌條件下按照常規(guī)操作穿刺，抽取骨髓1 ml，肝素抗凝，用0.01 mol/L，PBS1∶1 稀釋，以淋巴細(xì)胞分離液(Ficol，l密度1.077)按常規(guī)方法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/L。取2支試管，1管為參照管，加有IgG1;另1管為試驗(yàn)管，加有FITC結(jié)合的CD105單克隆抗體(為美國(guó)Lab Vision公司產(chǎn)品，1∶20稀釋)，各取100μl細(xì)胞懸液加入2管，室溫避光孵育30 min，PBS洗滌3次后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓細(xì)胞CD105的表達(dá)水平。流式結(jié)果判定:以Cell Quest軟件獲取分析數(shù)椐，定量分析每管樣品中10000個(gè)細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞中CD105抗原的表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以樣本均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±sD)表示，首先對(duì)資料進(jìn)行正態(tài)及方差齊性檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以上均取α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 CD105在急性白血病的表達(dá) CD105在急性白血病的表達(dá)率［(30.39±8.69)%］明顯高于在對(duì)照組表達(dá)率［(1.90±0.61)%］(P＜0.05)。ALL患者CD105陽性率為［(49.92±16.71)%］，AML 患者 CD105陽性率為［(22.21±9.95)%］，兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，AML患者CD105表達(dá)率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)果如圖1示。

2.2 CD105在不同類型急性白血病的表達(dá) CD105在急性白血病各亞型中的表達(dá)有差異(表1)，表達(dá)率最高的是B-ALL，其次是AML-M5。在AML-M3中，有2例復(fù)發(fā)患者CD105的表達(dá)率均＞40%，余樣本表達(dá)率在(0～10)%。見表1。

表1 CD105在急性白血病各個(gè)類型中的表達(dá)

2.3 CD105與臨床的關(guān)系 在10例AL患者中CD105化療前表達(dá)率［(48.74±16.45)%］，緩解后表達(dá)率為［(3.99 ±1.45)%］，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);浸潤(rùn)組CD105表達(dá)率［(41.39±14.05)%］高于非浸潤(rùn)組表達(dá)率［(21.06±9.14)%］(P＜O.01);初治組［(30.92±9.92)%］和復(fù)發(fā)組［(24.17±10.06)%］的表達(dá)率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，緩解組表達(dá)率［(3.99±1.45)%］與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。進(jìn)一步觀察CD105水平與治療反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過一療程誘導(dǎo)治療達(dá)完全緩解者 CD105表達(dá)率［(25.74±10.50)%］低于未達(dá)到緩解者表達(dá)率 ［(40.73±14.37)%］(P ＜0.05)。

圖1 CD105在急性白血病細(xì)胞的表達(dá)

3 討論

CD105為細(xì)胞膜糖蛋白，是TGF-β受體復(fù)合物的成分之一，能調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)TGF-β的反應(yīng)，是新生血管的標(biāo)志。CD105能調(diào)節(jié)內(nèi)皮-間質(zhì)間的信號(hào)傳遞，參與血管新生過程，而血管新生是腫瘤普遍存在的特征，與腫瘤組織的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在不同組織來源的惡性腫瘤中，CD105在腫瘤組織及其周圍的動(dòng)脈、靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)［4］，并且CD105主要在未成熟的血管表達(dá)，少數(shù)情況下可在腫瘤細(xì)胞弱表達(dá)［5］，由于CD105在惡性腫瘤中的表達(dá)可以反應(yīng)出腫瘤血管新生和內(nèi)皮細(xì)胞活躍情況，所以CD105的高表達(dá)可作為惡性腫瘤患者轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。

近年來CD105在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)也做了大量的研究，其在急性B淋巴細(xì)胞白血病表達(dá)82%，在急性T淋巴細(xì)胞白血病表達(dá)7%。CD105在急性髓系白血病中表達(dá)47%，在急性髓系白血病亞型中表達(dá)陽性率M1為35%，M2為47%，M3為0%，M4為26%，M5為32%［1］。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:CD105在B型急性淋巴白血病中表達(dá)率明顯高于在急性髓系白血病表達(dá)率，且在急性T淋巴白血病中表達(dá)低，與上述報(bào)告一致。而CD105在急性髓系白血病各亞型中表達(dá)情況與文獻(xiàn)對(duì)比各亞型表達(dá)率略有不同，可能與本研究各亞型收集樣本量較小有關(guān)。

文獻(xiàn)報(bào)道:CD105表達(dá)在前-B淋巴細(xì)胞白血病和髓系白血病細(xì)胞上，由于CD105在骨髓腫瘤細(xì)胞上的過表達(dá)抑制了TGF-β對(duì)骨髓的增殖抑制作用，因此CD105間接促進(jìn)了骨髓的過度增殖，考慮這為CD105在急性白血病中發(fā)病機(jī)制［6］。本研究發(fā)現(xiàn)，急性白血病初治組CD105的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組表達(dá)水平，緩解組表達(dá)比初治組顯著降低，而復(fù)發(fā)患者表達(dá)再次升高，可能提示異常表達(dá)的CD105與急性白血病發(fā)病有關(guān)。本研究結(jié)果進(jìn)一步表明，CD105在化療前后表達(dá)水平有顯著差異，且浸潤(rùn)組CD105表達(dá)率顯著高于非浸潤(rùn)組的表達(dá)率，這表明CD105是白血病細(xì)胞生物學(xué)行為重要的影響因素。El-Gohary［7］等發(fā)現(xiàn)CD105與腫瘤的預(yù)后有關(guān)。本研究觀察到CD105表達(dá)水平與治療的反應(yīng)有關(guān)，CD105表達(dá)水平高的緩解率低。提示CD105的表達(dá)可能與白血病預(yù)后有關(guān)。因此，CD105在急性白血病中的高表達(dá)可能與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后以及類型有關(guān)。

［1］Fonsatti E，Del Vecchio L，Altomonte M，et al.Endoglin:An accessory component of the TGF-beta-binding receptor-complex with diagnostic，prognostic，and bioimmunotherapeutic potential in human malignancies.J Cell Physiol，2001，188(1):1-7.

［2］張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn).科學(xué)出版社，2007:131-133.

［4］Li SL，Gao DL，Zhao ZH，et al.Correlation of matrix metalloproteinase suppressor genes RECK，VEGF，and CD105with angiogenesis and biological behavior in esophageal squamous cell carcinoma.World J Gastroenterol，2007，13(45):6076-6081.

［5］Yu D，Zhuang L，Sun X，et al.Particular distribution and expression pattern of endoglin(CD105)in the liver of patients with hepatocellular carcinoma.BMC Cancer，2007，7:122.

［6］Letamendia A，Lastres P，Almendro N，et al.Endoglin a component of the TGF-beta receptor system，is a differentiation marker of human choriocarcinoma cells.Int J Cancer，1998，76(4):541-546.

［7］El-Gohary YM，Silverman JF，Olson PR，et al.Endoglin(CD105)and vascular endothelial growth factor as prognostic markers in prostatic adenocarcinoma.Am J Clin Pathol，2007，127(4):572-579.