宋賢勇，王 文，孫統(tǒng)慶

（江蘇中江種業(yè)股份有限公司，江蘇南京 210036）

秦優(yōu)11號(hào)屬半冬性甘藍(lán)型三系雜交油菜品種，由咸陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院和三原縣種子公司育成，不育系2168A為細(xì)胞質(zhì)雄性不育系，商品油菜籽含油量44.6%～45.3%，芥酸含量0.0%～0.1%，硫苷含量25.68～25.73μmol/g，為高含油率的“雙低”雜交油菜。2008年通過陜西省、江蘇省和國家農(nóng)作物品種審定委員會(huì)審定，適宜在長江中下游地區(qū)和江蘇全省種植。但是，由于自身特性和許多不良因素的影響，對(duì)該品種純度產(chǎn)生一定的影響，因而制種過程中去雜保純以及種子成熟收獲后純度鑒定工作尤為重要，并且必須建立嚴(yán)格的質(zhì)量跟蹤檔案?，F(xiàn)將秦優(yōu)11號(hào)去雜保純和純度鑒定技術(shù)措施介紹如下。

1 秦優(yōu)11號(hào)制種去雜保純技術(shù)

1.1 嚴(yán)把親本種子純度關(guān)

秦優(yōu)11號(hào)親本種子不育系為2168A，恢復(fù)系為5012C，由陜西省咸陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所和三原縣種子公司提供，實(shí)行了嚴(yán)格的植物檢疫，2008年和2009年正季純度鑒定都在99%以上。

1.2 確保基地隔離安全

秦優(yōu)11號(hào)制種基地位于陜西省三原縣，四季分明，土層深厚，土壤肥沃，灌溉條件好，同時(shí)擁有天然的隔離屏障，是雜交油菜理想制種基地。為杜絕周邊其他十字花科作物（白菜、自生油菜等）的影響，要在秦優(yōu)11號(hào)親本抽薹前連根帶蔸徹底清除。

1.3 加強(qiáng)生育期去雜除劣工作

秦優(yōu)11號(hào)每年制種面積均達(dá)1 000畝，涉及農(nóng)戶多，去雜除劣工作貫穿于生育期的整個(gè)過程，公司專門安排技術(shù)員進(jìn)行指導(dǎo)監(jiān)督。苗期和蕾薹期根據(jù)親本生長形態(tài)特征拔除母本行中的白菜型株，多頭株，葉色差異明顯株，長相高大、株形松散、花蕾飽滿的植株，父本行中的變異株。在初花前5～7天，主花序花蕾明顯時(shí)進(jìn)行打頂保純工作，避免微量花粉對(duì)純度的影響。2008年和2009年制種基地都遭遇了“初春低溫”，造成不育系轉(zhuǎn)育嚴(yán)重，對(duì)花蕾飽滿、肥大的植株采取重打頂甚至二次打頂措施?；ㄆ谥厝コ副拘欣锏谋３窒抵辍⑽⒘炕ǚ?、優(yōu)勢株及其他雜株，拔除父本行里的異品株和變異株。成熟期全面清理前期遺留的各種雜株、異常蘿卜角果株及開反花的種間雜株。

1.4 抓好收獲管理工作

收獲時(shí)避免機(jī)械混雜，父本終花后及時(shí)砍去，清理出田，并檢查一二次。2008年正是由于宣傳不夠，管理不嚴(yán)，監(jiān)督不力，出現(xiàn)了少量恢復(fù)系混入雜交種的現(xiàn)象。當(dāng)母本田塊有80%左右的角果黃熟時(shí)進(jìn)行收獲，各田塊單獨(dú)堆放，分場脫粒，避免機(jī)械混雜。

2 秦優(yōu)11號(hào)純度鑒定技術(shù)

2.1 青海鑒定

5月10日左右，在制種基地按片區(qū)差異，采用5點(diǎn)取樣法選定取樣田塊，每塊田取5點(diǎn)，每點(diǎn)取5株，隨機(jī)分上中下部位采取黃熟角果，曬干，脫粒，混合均勻，在青海省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)地進(jìn)行種植鑒定。搶早播種，確保通過春化。每個(gè)樣品播1 000粒左右，不間苗，少施或不施基肥，不追氮肥，促使早開花，植株瘦弱有利于鑒定。在蕾期和花期根據(jù)秦優(yōu)11號(hào)品種特征特性進(jìn)行純度鑒定。

2.2 正季鑒定

正季鑒定在我公司六合基地于當(dāng)年9月份到來年4月進(jìn)行，每個(gè)樣品播1 000粒左右，不間苗，少施或不施基肥，不追氮肥。對(duì)入庫樣品同時(shí)進(jìn)行直播和移栽鑒定，同時(shí)不育系和恢復(fù)系各播一小區(qū)用于對(duì)比，在苗期至盛花期根據(jù)雜交種的特征和育性表現(xiàn)進(jìn)行純度鑒定。

2.3 SSR鑒定

本公司利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)秦優(yōu)11號(hào)的雙親及F1進(jìn)行了引物篩選和純度檢測技術(shù)的研究，篩選出引物BN12和BN1表現(xiàn)為穩(wěn)定的共顯性 （見圖1），經(jīng)過兩年與田間種植鑒定結(jié)果的對(duì)比，誤差均在容許誤差范圍內(nèi)，這表明篩選的SSR標(biāo)記完全可以用于秦優(yōu)11號(hào)雜交種純度的快速、準(zhǔn)確鑒定。

圖1 引物BN12(A)和BN1(B)的篩選結(jié)果

2.4 三種鑒定方法比較分析

以本公司正季純度鑒定結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)參考值，分析發(fā)現(xiàn)青海鑒定結(jié)果及200株幼苗SSR分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)參考值之間的差值均在允許誤差范圍內(nèi) （見表1）。青海鑒定周期長，費(fèi)用高，樣品質(zhì)量不能代表最終收購樣品質(zhì)量；正季鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，但結(jié)果滯后于銷售；而SSR技術(shù)穩(wěn)定可靠，對(duì)DNA質(zhì)量要求不高，時(shí)間短效率高，最大優(yōu)點(diǎn)在于可以將恢復(fù)系鑒定開來，避免了產(chǎn)量上的損失，具有很大的應(yīng)用潛力。

表1 秦優(yōu)11號(hào)純度青海、江蘇與SSR鑒定結(jié)果比較

秦優(yōu)11號(hào)純度的保證以田間控制為重中之重，嚴(yán)把親本關(guān)，安全隔離，嚴(yán)格去雜除劣，避免機(jī)械混雜，后期借助于異地鑒定、正季鑒定及SSR鑒定技術(shù)，做到心中有數(shù)，將優(yōu)質(zhì)種子投放到市場中去，增強(qiáng)企業(yè)的社會(huì)責(zé)任心。