韓 剛,原海忠,董月,翟冠鈺,范 穎

(華北煤炭醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系,河北 唐山 063000)

由于年齡的增長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)磨損以及體內(nèi)激素水平的變化等原因,骨關(guān)節(jié)的活動(dòng)度和靈活性會(huì)不斷降低,從而導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)[1]。骨關(guān)節(jié)炎是一種常見的慢性關(guān)節(jié)疾病,老年人和運(yùn)動(dòng)員多見,嚴(yán)重影響關(guān)節(jié)功能。隨著我國(guó)社會(huì)進(jìn)入老齡化,該病發(fā)病率有增加的趨勢(shì)。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,65歲以上的人群中的OA發(fā)病率男性為60%,女性為70%[2]。

氨基葡萄糖(glucosamine)和硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)是一類天然的氨基葡聚糖,廣泛存在于人和動(dòng)物軟骨、肌鍵和韌帶中,為關(guān)節(jié)軟骨的主要組分[3-4]。氨基葡聚糖和硫酸軟骨素在關(guān)節(jié)軟骨中易與水結(jié)合,保持關(guān)節(jié)腔潤(rùn)滑和緩沖壓力,對(duì)受損的軟骨細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用[5]。近年來(lái)有關(guān)氨基葡聚糖和硫酸軟骨素單獨(dú)與聯(lián)合使用治療骨性關(guān)節(jié)炎的報(bào)道較多[5-6]。本實(shí)驗(yàn)將氨基葡聚糖和硫酸軟骨素制成復(fù)方片劑并觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛效果。

1 材 料

SD大鼠(SPF級(jí),♂,體重150～180 g)、ICR小鼠(SPF級(jí),♂,體重18～22 g),均由華北煤炭醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供,許可證編號(hào):SCXK(京)20060330。

角叉菜膠(遼寧省藥物研究所);阿斯匹林(石家莊康利藥業(yè)有限公司,批號(hào):080724);氨基葡萄糖(純度≥99%,濟(jì)南海得貝生物工程公司);硫酸軟骨素(純度≥90%,上海道豐化工科技有限公司)。羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素(山東海祥生物工程有限公司);硬脂酸鎂(上海協(xié)泰化工有限公司)。

2 方 法

2.1 氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)方片的制備

根據(jù)文獻(xiàn)[7]的研究結(jié)果,將氨基葡萄糖與硫酸軟骨素按質(zhì)量比5∶4的比例混勻,稱取500 g,加入羧甲基淀粉鈉 83.3 g,干淀粉137.4 g,混勻,過(guò)120目篩。加入4%淀粉漿適量,濕法制粒,干燥,加入微晶纖維素66.7 g,硬脂酸鎂適量,混勻,壓片即得。片重0.5 g,每片含氨基葡萄糖166.8mg,硫酸軟骨素133.2mg。

2.2 動(dòng)物分組及造模方法[8]

2.2.1 大鼠足趾腫脹模型 SD大鼠100只隨機(jī)分為10組,每組10只,分別為正常對(duì)照組(灌胃給予等體積1%羧甲基纖維素鈉溶液)、阿斯匹林陽(yáng)性藥物組、復(fù)方片低、中、高劑量組[9],復(fù)方片劑量按片劑中氨基葡萄糖與硫酸軟骨素的質(zhì)量之和計(jì)算。復(fù)方片劑研細(xì)后用1%的羧甲基纖維素鈉制成混懸液灌胃給藥,1次/d,連續(xù)給藥28 d。第28天,各組大鼠均于左后足趾中部皮下注射1%角叉菜膠0.1mL。分別于1,4和6 h用千分卡尺測(cè)量足趾厚度(右后足作為對(duì)照),計(jì)算左右足趾腫脹百分率。

2.2.2 大鼠肉芽腫模型 雄性SD大鼠50只,大鼠乙醚吸入麻醉,在無(wú)菌條件下,將滅菌棉球20mg植入大鼠兩側(cè)腹股溝皮下,縫合皮膚,大鼠飼養(yǎng)于室溫20～24℃、濕度45%～65%的屏蔽環(huán)境。術(shù)后動(dòng)物隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為正常對(duì)照組、阿斯匹林陽(yáng)性藥物組、復(fù)方片低、中、高劑量組。大鼠灌胃給藥,1次/d,連續(xù)給藥28 d,末次給藥禁食不禁水10 h后,麻醉處死動(dòng)物,摘出棉球與肉芽組織,70℃干燥24 h,稱重。稱的重量減去棉球重量即為肉芽腫重量。

2.2.3 小鼠扭體模型 ICR小鼠60只,隨機(jī)分為5組,每組12只,正常對(duì)照組、阿斯匹林陽(yáng)性藥物組、復(fù)方片低、中、高劑量組。灌胃給藥,1次/d,連續(xù)給藥21 d。在第28天,于給藥后30 min,各組動(dòng)物均腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2mL,記錄15 min內(nèi)小鼠“扭體”發(fā)生率及發(fā)生次數(shù)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用SPASS 12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用方差分析及兩兩比較的q檢驗(yàn)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

3 結(jié) 果

3.1 復(fù)方片對(duì)大鼠足趾腫脹的影響

大鼠給藥28 d , 與正常對(duì)照組比, 注射角叉菜膠1,4,6 h,阿司匹林陽(yáng)性藥物組、復(fù)方片低、中、高劑量組均能抑制大鼠因角叉菜膠引起的急性炎癥(P＜0.05)。見表1。

表1 復(fù)方片對(duì)大鼠足趾腫脹百分率的影響(±s,n=10)Tab.1 Effect of compound tablets on a percentage of paw edemain rats(±s,n=10)

表1 復(fù)方片對(duì)大鼠足趾腫脹百分率的影響(±s,n=10)Tab.1 Effect of compound tablets on a percentage of paw edemain rats(±s,n=10)

與正常對(duì)照組比較:1P＜0.05Compared with control group:1 P＜0.05

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3.2 復(fù)方片對(duì)大鼠肉芽腫的影響

大鼠給藥28 d,與正常對(duì)照組比,阿司匹林陽(yáng)性藥物組、復(fù)方片低、中、高劑量組均能抑制大鼠肉芽腫,對(duì)慢性炎癥有明顯抑制作用(P＜0.01)。見表2。

表2 復(fù)方片對(duì)大鼠肉芽腫的影響(±s,n=10)Tab.2 Effect of compound tablets on granuloma in rats(±s,n=10)

表2 復(fù)方片對(duì)大鼠肉芽腫的影響(±s,n=10)Tab.2 Effect of compound tablets on granuloma in rats(±s,n=10)

與正常對(duì)照組比較:1P＜0.01Compared with control group:1 P＜0.01

阿司匹林組復(fù)方片低劑量組復(fù)方片中劑量組復(fù)方片高劑量組200 250 500 800 30.25±5.12 40.02±6.281 36.00±6.501 32.50±3.281

3.3 復(fù)方片對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

小鼠給藥28 d,與正常對(duì)照組比較,阿司匹林陽(yáng)性藥物組、復(fù)方片低、中、高劑量組均能對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)產(chǎn)生明顯的抑制作用(P＜0.05),具有明顯鎮(zhèn)痛作用。見表3。

與正常對(duì)照組比較:1P＜0.05Compared with control group:1 P＜0.05

4 討 論

氨基葡萄糖是以甲殼素為原料,經(jīng)酸充分水解制得到的一種小分子氨基多糖。硫酸軟骨素在自然界中,主要存在于動(dòng)物的軟骨、喉骨、鼻骨和氣管中,肌腱、韌帶、皮膚、椎間盤等組織中。兩者易溶于水,易被腸黏膜吸收,可以通過(guò)血液-滑膜屏障覆蓋并分散至關(guān)節(jié)軟骨內(nèi),能夠被軟骨細(xì)胞吸收。

研究證明氨基葡萄糖和硫酸軟骨素能刺激軟骨細(xì)胞合成膠原蛋白和蛋白多糖,促進(jìn)軟骨基質(zhì)的合成,抑制軟骨的降解[10]。這類物質(zhì)屬于關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)劑,不僅能延緩骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展,而且還能修復(fù)軟骨組織。并且聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,將氨基葡萄糖與硫酸軟骨素按5∶4的比例制成的復(fù)方片對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹急性炎癥及大鼠肉芽腫慢性炎癥有明顯的抗炎作用;對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)有明顯減少,提高了小鼠痛閾值,有鎮(zhèn)痛作用。

氨基葡萄糖和硫酸軟骨素目前國(guó)內(nèi)外對(duì)其藥理作用的文獻(xiàn)報(bào)道雖多,但其抗炎鎮(zhèn)痛作用仍處于研究探索階段。本實(shí)驗(yàn)制備的氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)方片具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用,可用于緩解骨性關(guān)節(jié)炎和各種組織炎癥引起的疼痛,提高中老年骨性關(guān)節(jié)炎患者的生活質(zhì)量。

[1]陳磊,凌沛學(xué),賀艷麗,等.硫酸軟骨素和玻璃酸鈉聯(lián)合應(yīng)用治療木瓜酶致兔膝關(guān)節(jié)炎[J].中國(guó)生化藥物雜志,2009,30(1):33-36.

[2]左川,楊南萍,陳詠濤.硫酸氨基葡萄糖與雙氯芬酸治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床對(duì)照研究[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2003,7(5):306-308.

[3]王鳳琴.用龍蝦殼制備D-氨基葡萄糖鹽酸鹽[J].中國(guó)生化藥物雜志,2002,23(3):129-131.

[4]王亞,陳彥,夏樹開,等.硫酸軟骨素制備工藝的優(yōu)化[J].中國(guó)生化藥物雜志,2008,19(2):137-139.

[5]Bruyere O,Reginster JY.Glucosamine and chondroitin sulfateastherapeutic agents for knee and hip osteoarthritis[J].Drugs Aging,2007,24(7):573-80.

[6]陳磊,凌沛學(xué),張?zhí)烀?硫酸軟骨素在關(guān)節(jié)炎防治中的作用[J].中國(guó)生化藥物雜志,2008,29(2):137-139.

[7]傅欣,林霖,魏學(xué)磊,等.氨基葡萄糖和硫酸軟骨素聯(lián)合用藥對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎治療作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志,2008,27(5):588-592.

[8]徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:911-913.

[9]肖萍,董妙珠,洪新宇,等.氨基葡萄糖及硫酸軟骨素對(duì)嚙齒類動(dòng)物的鎮(zhèn)痛抗炎作用[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué),2007,24(4):372-374.

[10]Delafuente J C.Glucosamine in the treatment of osteoarthritis.Rheum[J].Clin North Am,2000,26(1):1-11.