張會(huì)珍，李文麗，馬小順，佘延芬，張麗欣，王鑫國(guó)△，張 闖

（1.河北醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050091；2.河北醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院08級(jí)，河北 石家莊 050017）

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是因腦血管因素所致的具有認(rèn)知功能障礙的臨床綜合征。針灸療法對(duì)VD患者的智能康復(fù)有積極作用，筆者前期工作也已證明電針對(duì)記憶障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力有明顯改善作用［1］。研究證實(shí)，氧自由基引起的組織脂質(zhì)過(guò)氧化損傷在腦缺血再灌注損傷機(jī)理中占有重要地位，而超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是體內(nèi)清除自由基的主要酶，其活性大小反映了機(jī)體對(duì)抗自由基損傷的能力；丙二醛（malonialdehyde，MDA）是自由基對(duì)生物細(xì)胞膜損傷的主要代謝產(chǎn)物，其含量高低可間接反映自由基損傷程度［2、3］。本研究旨在通過(guò)觀察電針對(duì)腦組織及血清SOD活性和MDA含量的影響，探討電針改善VD學(xué)習(xí)記憶功能障礙的作用機(jī)理，為臨床治療VD提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

選用健康雄性昆明小鼠80只，體重28g～32g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（昆明小鼠二級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，合格證號(hào)612159）。

1.2 材料

藥物：尼莫地平片由河北醫(yī)科大學(xué)制藥廠提供，規(guī)格：20mg，批號(hào)H13022049。試劑：SOD試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20061028；MDA試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)20061152；總蛋白測(cè)定試劑盒由保定長(zhǎng)城試劑有限公司提供，批號(hào)20112023。儀器：722型光柵分光光度計(jì)：上海第三分析儀器廠；WQ-1002F韓氏多用電針儀：北京安隆光電有限公司；華佗牌針灸針：蘇州醫(yī)療用品廠；小鼠跳臺(tái)儀：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所。

1.3 模型復(fù)制

將80只小鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組（n=14）、模型組（n=22）、電針組（n=22）、尼莫地平組（n=22）。參照文獻(xiàn)制作腦缺血再灌注擬“血管性癡呆”動(dòng)物模型［3］。將動(dòng)物用10％水合氯醛0.35g/kg腹腔注射麻醉，頸正中部常規(guī)消毒后切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，套“4”號(hào)絲線扣，拉緊絲扣阻斷血流20min，同時(shí)在距尾尖1cm處剪斷放血約0.3ml，熱凝止血。松開(kāi)絲扣使血液灌注10min后，再次阻斷血流20min，第2次再灌后觀察30min，縫合皮膚。其中假手術(shù)組只分離頸總動(dòng)脈，穿線但不結(jié)扎，尾部不放血，觀察時(shí)間與其他組相同。術(shù)后每日肌注青霉素0.2萬(wàn)U，連續(xù)3d。本實(shí)驗(yàn)維持動(dòng)物肛溫36℃ ±0.5℃，防止低溫對(duì)缺血所致腦損傷的保護(hù)作用。

1.4 治療方法

術(shù)后當(dāng)天動(dòng)物蘇醒后開(kāi)始治療。電針組選用“百會(huì)”、“大椎”及雙側(cè)“足三里”、“膈俞”，定位取穴參照全國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》。用0.35mm×13mm毫針，進(jìn)針后接韓氏電針儀，采用疏密波（疏波頻率2Hz，密波頻率80Hz），強(qiáng)度以動(dòng)物肢體輕輕顫動(dòng)，但不掙扎嘶叫為度（約2.0mA），每次10min。尼莫地平組灌服尼莫地平液（30mg/kg體質(zhì)量，用蒸餾水配制成濃度為3mg/ml的混懸液）。除電針組外，其余各組也均采用同一體位固定10min；除尼莫地平組外，其余各組均灌服生理鹽水10ml/kg體質(zhì)量。治療均由同一操作者操作，每日1次，連續(xù)治療15d。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組小鼠摘除眼球取血，將血樣4℃低溫3000r/min離心10min，分離血清，密封，－20℃冷存待檢。斷頭處死小鼠，冰盤(pán)上快速剖取全腦，棄去嗅球及小腦。取小鼠右側(cè)腦組織稱(chēng)重后加入預(yù)冷的生理鹽水，用電動(dòng)勻漿器研磨，鏡檢未見(jiàn)完整細(xì)胞，制成10％的腦組織勻漿，4℃3600r/min離心5min，提取上清液，用雙縮脲法測(cè)定組織蛋白含量，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性，硫代巴比妥酸比色分析法測(cè)定MDA含量，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)用均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析，P＜0.05為差異有顯著性（除外造模及干預(yù)過(guò)程中死亡者，共納入59只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行統(tǒng)計(jì)）。

2 結(jié)果

表1、2顯示，模型組小鼠腦組織和血清中SOD活性均較假手術(shù)組明顯降低（P＜0.01），電針組和尼莫地平組腦組織及血清中SOD活性均顯著高于模型組（P＜0.01），且電針組高于尼莫地平組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組小鼠腦組織及血清中MDA含量較假手術(shù)組明顯增高（P＜0.01），電針組和尼莫地平組腦組織及血清中MDA含量均顯著低于模型組（P＜0.01），且電針組低于尼莫地平組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 電針對(duì)VD小鼠腦組織SOD、MDA的影響±s）

表1 電針對(duì)VD小鼠腦組織SOD、MDA的影響±s）

注：與模型組比較：△△P＜0.01；與尼莫地平組比較：▲P＜0.05

組別 n SOD（U/mgprot）MDA（nmol/mgprot）假 手 術(shù) 組 13 35.15±4.11△△ 3.22±0.39△△模 型 組 15 13.43±2.44 10.37±2.19電 針 組 16 33.35±4.47△△▲ 3.87±0.57△△▲尼莫地平組 15 30.14±3.06△△ 5.03±0.75△△

表2 電針對(duì)VD小鼠血清SOD、MDA的影響（－x±s）

3 討論

血管性癡呆屬于中醫(yī)“老年呆病”范疇，筆者根據(jù)中醫(yī)對(duì)本病的傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)，結(jié)合現(xiàn)代研究以及臨床研究［5］認(rèn)為，“氣虛血瘀、瘀阻腦絡(luò)”為本病的基本病機(jī)，故制定“益氣活血、提督醒腦”為基本法則，選用百會(huì)、大椎、膈俞、足三里組方，并以電針刺激?！澳X為元神之府”，VD病位在腦，百會(huì)位居巔頂，為“三陽(yáng)五會(huì)”，大椎為“諸陽(yáng)之會(huì)”，二者均為督脈腧穴?！峨y經(jīng)·二十八難》載：“督脈者……上至風(fēng)府，入屬于腦?！迸R床上針刺督脈穴位治療腦血管病療效顯著。在動(dòng)物腦缺血模型上也觀察到針刺督脈穴位在VD治療中起著主導(dǎo)作用［6、7］，故取二穴以疏通督脈，醒腦開(kāi)竅，并帥氣血上榮，益智復(fù)聰；陽(yáng)明乃多氣多血之經(jīng)，以陽(yáng)明經(jīng)穴治療腦血管病為傳統(tǒng)治法，足三里為足陽(yáng)明胃經(jīng)合穴，為扶助正氣要穴，既可益氣以推動(dòng)血行，又生化氣血以充養(yǎng)腦髓；膈俞乃足太陽(yáng)膀胱經(jīng)穴，膀胱經(jīng)“從巔入絡(luò)腦”（《靈樞·經(jīng)脈》），且穴為血會(huì)，針之既可活血以疏通腦絡(luò)，又可醒腦益智。諸穴并用，共奏益氣活血、提督醒腦、益智復(fù)聰之功。

研究證實(shí)，自由基是腦缺氧后神經(jīng)細(xì)胞損傷的重要發(fā)病因素。通常情況下，機(jī)體自由基的生成與清除之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，不發(fā)生自由基連鎖反應(yīng)和組織損傷。本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠體內(nèi)SOD活性明顯下降，MDA含量明顯增高，表明在腦缺血狀態(tài)下，抗氧化酶活性下降，導(dǎo)致機(jī)體清除自由基的能力減弱，這可能是造成該模型小鼠發(fā)生認(rèn)知功能障礙的原因之一。經(jīng)電針治療后，腦組織及血液中SOD活性明顯增高，MDA顯著下降，表明該方法能有效清除腦內(nèi)及血液中的氧自由基，減少自由基對(duì)機(jī)體的損害。尼莫地平也表現(xiàn)出與電針相似的作用，但以電針效果為佳。表明電針能提高機(jī)體的抗氧化損傷能力，有對(duì)抗缺血再灌注時(shí)腦內(nèi)自由基損傷的作用，從而改善VD模型小鼠智力及學(xué)習(xí)記憶功能。

本實(shí)驗(yàn)主要觀察了“益氣活血、提督醒腦”取穴法對(duì)VD模型小鼠 SOD、MDA的影響，至于其他原則取穴對(duì)VD的治療效應(yīng)及其與本穴組的比較研究尚有待今后進(jìn)一步探討。

［1］張會(huì)珍，張麗欣，佘延芬，等.電針對(duì)擬血管性癡呆小鼠腦組織海馬細(xì)胞凋亡的影響［J］.針刺研究，2008，33（6）：377-381.

［2］蔡建偉，吳顥昕，晉光榮，等.雙根清腦煎劑對(duì)血管性癡呆大鼠模型腦海馬組織及血清 SOD MDA的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25（6）：1167-1168.

［3］楊文明，王時(shí)光，洪亮，等.智腦膠囊對(duì)血管性癡呆模型大鼠行為學(xué)及腦組織SOD活性、MDA含量的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2007，5（9）：833-835.

［4］趙建新，田元祥，李國(guó)明，等.擬血管性癡呆小鼠模型皮層及海馬細(xì)胞病理組織學(xué)動(dòng)態(tài)觀察［J］.中國(guó)病理生理雜志，2000，16（11）：1214-1216.

［5］陶根魚(yú)，杜曉泉.益氣活血法在缺血性中風(fēng)病中的地位［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，21（3）：1-2.

［6］劉蘭英，楊 駿.電針督脈經(jīng)穴為主對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及 NPY的影響［J］.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，20（1）：17-20.

［7］吳成舉，劉海英，謝鑫.“提督益腦”針?lè)▽?duì)血管性癡呆大鼠腦組織 SODMDA及 AChE的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（8）：1830-1832.收稿日期：2010-04-23

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