徐耀華，歐 艷，馬 寧，肖方青

（1.湖南省第六工程有限公司建設醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.長沙市中心醫(yī)院，湖南 長沙 410004；3.湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所，湖南 長沙 410014）

普盧利沙星（pmlif l oxacin）是一種新的喹諾酮類廣譜抗菌藥。本品對革蘭陰性菌和陽性菌有廣譜抗菌作用，特別是對綠膿桿菌為首的革蘭氏陰性菌的抗菌力強，可用于全身感染的治療，其作用優(yōu)于環(huán)丙沙星、氧氟沙星和依諾沙星。本品毒副作用小，口服吸收良好，耐受性好。有關普盧利沙星的測定已有報道[1-3]。我們采用HPLC法，在流動相中引入離子對試劑，測定了普盧利沙星膠囊的含量及有關物質(zhì)，方法專屬性強，重現(xiàn)性好，準確度高，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

Waters 510泵，2487雙波長紫外檢測器，HS色譜工作站（杭州英譜科技有限公司）

普盧利沙星對照品（湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所自制）：經(jīng)結(jié)構(gòu)確證圖譜解析與國外文獻報道一致，采用HPLC法進行純度檢查，歸一法計算含量為99.9%，非水滴定法測定含量為99.9%。乙腈為色譜純，水為雙蒸水，十二烷基硫酸鈉為分析純。普盧利沙星膠囊由湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所制劑室提供，理論片重為195 mg，規(guī)格為132 mg（以C21H20FN3O6S計）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 PICO·TAG TM C18 （5μm，3.9 mm×150 mm ），流動相 乙腈-水-十二烷基硫酸鈉（425:500:2.5，用磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0），檢測波長 275 nm，流速 1.0 mL/min，柱溫 室溫，進樣量 20 μL。在上述色譜條件下，理論板數(shù)按普盧利沙星峰計應不低于2000，普盧利沙星與各有關物質(zhì)達到基線分離。

2.2 普盧利沙星與合成中間體的分離檢測

本品原料藥在合成過程中，主要有中間體1：4-乙酰氧基-2-乙硫基-6，7-二氧喹啉-3-羧酸乙酯，2：6，7-二氟-1-甲基-4-氧代-41-1-[1，3]硫氮雜環(huán)丁烷并[3，2-a]喹啉-3-羧酸一酯，3：6，7-二氧-1-甲基-4-氧代-41-1-[1，3]硫氮雜環(huán)丁烷并[3，2-a]喹啉-3-羧酸。依法配制測定溶液，混合后進樣20 μL，記錄色譜圖1-A。

2.3 輔料的干擾性試驗

稱取空白輔料9.5 mg，置于100 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液20 μL進樣，記錄色譜圖1-B，同時取膠囊樣品細粉適量，依法測定，記錄色譜圖1-C。

2.4 強制破壞性試驗降解產(chǎn)物的檢測

取樣品適量，分別置于下述條件下，進行強制破壞性試驗并對降解產(chǎn)物進行檢測。

2.4.1 氧化破壞試驗 取普盧利沙星膠囊內(nèi)容物細粉27.5 mg，置于50 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液4 mL，加雙氧水6 mL，放置1.5 min后，進樣20 μL，記錄色譜圖1-D。

2.4.2 堿性破壞試驗 取普盧利沙星膠囊內(nèi)容物細粉30.2 mg，置于50 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液4 mL加 1 moL/L氫氧化鈉溶液6 mL，放置40 min，用1 moL/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH=7，進樣20 μL，記錄色譜圖1-E。

2.4.3 酸性破壞試驗 取普盧利沙星膠囊內(nèi)容物細粉17.6 mg，置于50 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液4 mL加1 moL/L鹽酸溶液6 mL，放置1.5 h，用1 moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH=7，進樣20 μL，記錄色譜圖1-F。

2.4.4 光照試驗 取普盧利沙星膠囊數(shù)粒，置照度為4500 LX的強光下，放置10 d。取出，傾取內(nèi)容物，研細，稱取細粉17.7 mg，置于100 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液20 μL進樣，記錄色譜圖1-G。

通過對普盧利沙星合成中間體，膠囊主藥、輔料及降解產(chǎn)物進行分析檢測，結(jié)果表明采用高效液相色譜法測定普盧利沙星膠囊的含量及有關物質(zhì)的方法專屬性良好。見圖1。

圖1 HPLC方法專屬性考察圖普

2.5 線性試驗

取在五氧化二磷干燥劑60℃干燥至恒重的普盧利沙星對照品適量，用乙腈溶解并配成溶液C=0.241 mg/mL的溶液，分別精密吸取5.0，7.5，10.0，12.5，15 mL分別置5個100 mL量瓶中，用乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，分別取20 μL注入HPLC儀，記錄色譜圖。以峰面積S對濃度C進行線性回歸，得回歸方程為：S=282719+37932C （ r=0.9999 ）。表明普盧利沙星在12～36 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關系良好。

2.6 精密度實驗和溶液穩(wěn)定性試驗

取“2.5”項下普盧利沙星濃度為25 μg/mL的溶液，連續(xù)進樣6次，以峰面積考察其精密度，RSD為0.51 % 。

另取“2.5”項下普盧利沙星濃度為25 μg/mL的溶液，分別于室溫放置0、2、4、6、8、12、24 h后進樣測定，計算得峰面積 RSD=0.41% 。表明室溫下溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗

按普盧利沙星膠囊的處方配比組成制成不含主藥的空白輔料，根據(jù)膠囊中藥物與輔料的比例，在空白輔料中精密加入普盧利沙星對照品，按含量測定方法測定，結(jié)果平均回收率為99.7%；RSD分別為0.3%，測定結(jié)果符合要求。

2.8 樣品測定

含量測定 取裝量差異項下普盧利沙星的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于含普盧利沙星12.5 mg），置于100 mL量瓶中，用乙腈溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5 mL置于25 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度搖勻，作為供試品溶液，取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取經(jīng)五氧化二磷60℃減壓干燥至恒重的普盧利沙星對照品適量，用乙腈溶解并稀釋成每1 mL中約含普盧利沙星25 μg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算含量。見表1。

有關物質(zhì)測定 精密稱取供試品細粉適量（約相當于普盧利沙星10 mg），置于100 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。量取1.0 mL置于100 mLl量瓶中，同法稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。量取20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使普盧利沙星色譜峰的峰高為滿量程的15%～30%。再量取供試品溶液和對照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰（除去溶劑峰），各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對照溶液主峰面積（1.0%）。

測定結(jié)果 對3批普盧利沙星膠囊分別進行含量測定和有關物質(zhì)檢查，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果/%（n=3）

2.10 重復性實驗

取同一供試品，分別取樣6次，按含量測定項下方法測定含量，結(jié)果普盧利沙星的含量RSD為0.25 %，表明重復性良好。

3 討論

在色譜系統(tǒng)建立過程中，我們參考文獻[4]在流動相中引入離子對試劑。在方法學考察中，發(fā)現(xiàn)離子對試劑的濃度對色譜峰影響很大。分別取用十二烷基硫酸鈉0.5 g，1 g，2 g，2.5 g，3.0 g，3.5 g，配制流動相進行試驗，結(jié)果表明:（1）十二烷基硫酸鈉濃度越高，色譜峰峰形越好，雜質(zhì)分離度及柱效越高。（2）十二烷基硫酸鈉在1 000 mL乙腈-水中溶解度有限，多于3 g開始出現(xiàn)渾濁，而按文獻報道[4]十二烷基硫酸鈉取用量為3.5 g時，溶液呈半透明的膠體，說明濃度過高，而我們采用在1 000 mL溶劑加2.5 g十二烷基硫酸鈉，配成的流動相分離效能高，穩(wěn)定性良好。

[1]NAKASIIIMA M,UEMATSU T,KQSUGE K,et al.Phammcokinetics and safety of NM441,a new quinolone,in healthy male volunteers [J].J Clin Pharmacol,1994,34(9):930-937.

[2]PIC0LLO R,BRI0N N,GUALANO V,et a1.Pharmacokinetics and tolerability of prulifloxacin after single oral administration [J].Arzneimittelforschung,2003,53(3):20l-205.

[3]封宇飛,李可欣,呂允鳳,等,HPLC測定普盧利沙星膠囊的含量和有關物質(zhì)[J].中國藥學雜志,2006,41(2):308-310.

[4]陳玉龍,李立威.加替沙星的HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2001,32(12):553.