龔考玲，許宏偉，劉衛(wèi)平

（1.湖南石門縣人民醫(yī)院神經內科，湖南 常德 415300；2.中南大學湘雅一醫(yī)院神經內科，湖南 長沙 410008）

動脈粥樣硬化（ Atherosclerosis，AS）是心腦血管疾病的共同病理基礎，是危害人類健康的最嚴重疾病之一，其患病率和死亡率均居各類疾病之首。探討AS的發(fā)病機理，從而更有效地防治AS是世界各國共同關注的重大課題。隨著現(xiàn)代醫(yī)學對動脈粥樣硬化的認識不斷深入，抗動脈粥樣硬化的治療方法和治療藥物均取得了較大的進展，但療效滿意的阻止AS進展的藥物尚未發(fā)現(xiàn)。大量研究證明中醫(yī)藥在防治AS方面有明顯的臨床療效，其作用機制通過多靶點而實現(xiàn)。本研究采用食餌性動脈粥樣硬化家兔為受試對象，觀察中藥復方血脈健對血脂及血管病理形態(tài)學的影響。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

健康日本大白耳兔50只，體重1.5～2 kg，雌雄各半，分籠喂養(yǎng)，室溫18～22 ℃，自由攝食、飲水，購于武漢市萬千佳實驗動物養(yǎng)殖有限公司，動物合格證SCXK（鄂）2004-0006。

1.2 主要藥品及試劑

血脈?。河牲S精、山茱萸、澤瀉、三七等組成，藥材購自湖南中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，經鑒定后得水煎液備用；阿托伐他汀鈣：Pfizer Ireland Pharmaceuticals生產，輝瑞制藥有限公司進口分裝，規(guī)格: 20 mg/粒，產品批號：95837030；牛血清白蛋白： Roche公司，批號：20082012；卵血清白蛋白: Sigma公司；膽固醇：北京鼎國生物技術有限責任公司；豬油：由市售新鮮豬板油煉制而成；蛋黃粉：安徽毫州市眾意蛋業(yè)有限責任公司生產；總膽固醇（TC）試劑：Roche公司；甘油三脂（TG）試劑：Roche 公司；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑: Roche公司。

1.3 高脂飼料配方

高脂飼料：按普通飼料79%、膽固醇1%、豬油5%、蛋黃粉15%比例配制，由湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心加工成高脂顆粒飼料備用。普通飼料：玉米20%、麩皮22%、豆粕18%、苜蓿草粉38%、磷酸氫鈣1.5%、食鹽0.5%。

1.4 分組及造模方法

將健康日本大白耳兔50只，隨機分為空白對照組（10只）和造模組（40只）?？瞻讓φ战M予基礎飼料飼養(yǎng)，不進行任何處理；造模方法參照文獻[1]，通過高脂飼料喂養(yǎng)及血管內皮細胞免疫損傷復制兔動脈粥樣硬化模型，以高脂飼料飼養(yǎng)，120 g/d，不足部分補充基礎飼料，自由飲水，在造模的第1天從兔耳緣靜脈注射牛血清白蛋白進行免疫刺激（25 mg/kg，1次/w，共注射3次），同時用卵清白蛋白進行皮下注射（2.5 mg/kg，1次/2d，共注射5次）。模型復制成功的家兔隨機分為3組，即模型組、阿托伐他汀組、血脈健組，每組10只。

1.5 給藥方法

分組后開始灌胃給藥，CG和MG予冷開水灌胃，AG和XG組給予相應的藥物灌胃，1 次/d，灌胃體積5 mL/kg，灌胃療程1月。用藥劑量阿托伐他汀0.45 mg/（kg·d），血脈健劑量0.4 g/（kg·d）。

1.6 觀察指標及測定方法

分別于實驗開始前第1天，實驗開始后第60天和第90天末取血液標本。禁食12 h，不禁水，分別從兔耳中動脈采血2 mL，試管斜放，血液順管壁緩慢流入，防止溶血。待血液完全凝固、血塊收縮釋出血清后，3000 rmp離心15 min，收取上清液（血清）。采用酶比色法在MODULAR P800全自動生化分析儀測定血清總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）由Friedewald公式（LDL-C=TC－HDL-CTG/2.2）計算所得。動物由空氣栓塞法處死，迅速開胸，完整剝離主動脈（從主動脈起始部至髂總動脈分叉處），清除外膜附著組織。主動脈弓部分用生理鹽水沖洗干凈后，平鋪于濾紙上并攝像，用作肉眼觀察主動脈內膜面病變情況及斑塊形成情況，并用4%的多聚甲醛固定。常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚的切片，行蘇木素-伊紅（HE）染色，在光學顯微鏡下觀察。

1.7 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 各組家兔血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平

給藥前，與空白組比較，模型組、阿托伐他汀組和血脈健組TC、HDL-C和LDL-C含量均升高（P＜0.01），但三組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；TG在各組變化不明顯（P＞0.05）；如表1所示。

表1 給藥前各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C

表1 給藥前各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C

注：與空白組比較，▲示P≤0.01。

group n TCmmoL/L TGmmoL/L HDLmmoL/L LDL-CmmoL/L CG 10 1.47±0.47 1.07±0.32 0.42±0.14 0.56±0.21 MG 10 30.97±2.11▲ 1.26±0.39 5.23±1.38▲ 25.17±4.18▲AG 10 30.66±2.71▲ 1.21±0.56 5.42±1.27▲ 24.69±4.27▲XG 10 30.91±2.59▲ 1.18±0.48 5.18±1.34▲ 25.19±3.710▲

經治療1個月后，模型組血脂四項變化差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；而阿托伐他汀組和血脈健組TC、HDL-C和LDL-C均下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），高于空白對照組（P＜0.01）；血脈健組與阿托伐他汀組各項指標變化基本一致，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 治療1月后各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較

表2 治療1月后各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較

注 ：與模型組比較，★示P＜0.01；與空白組比較，▲示P ＜0.01。

groupn TCmmoL/L TGmmoL/L HDLmmoL/L LDL-CmmoL/L CG 10 1.43±0.35 0.99±0.28 0.46±0.16 0.52±0.16 MG 9 30.36±2.9▲ 1.22±0.35 5.21±1.31▲ 24.60±4.47▲AG 9 14.34±2.32★▲ 1.14±0.46 2.46±1.11★▲ 11.36±3.17★▲XG 9 13.28±2.08★▲ 1.15±0.34 2.25±0.95★▲ 10.51±3.62★▲

2.2 主動脈弓病理形態(tài)學變化

空白對照組主動脈弓內膜光滑平整，未見粥樣斑塊及脂質點；血管壁三層結構清晰，血管內皮完整，無增厚及粥樣斑塊形成，中膜可見梭形平滑肌細胞，彈力纖維層結構清晰完整，外膜為薄層疏松結締組織。模型組動脈內膜粗糙、不平，可見大小不等的乳白色斑塊，部分可融合成片的大斑塊，重者整條主動脈內膜見彌散分布脂質斑塊，以主動脈起始部為重；動脈內膜明顯增厚，脂質斑塊彌漫，內有泡沫細胞大量積聚，內皮下大量脂質和泡沫細胞堆積，并可見破裂的斑塊，中層結構紊亂，中膜平滑肌細胞排列紊亂，內彈性纖維斷裂，排列紊亂，并有炎性細胞浸潤。阿托伐他汀組和血脈健組較模型組病變減輕，以小片狀、條索狀斑塊散在于主動脈起始部；血管內膜略增厚，結構基本完整，內皮下僅見少量泡沫細胞，血管平滑肌細胞增生不明顯；中層內彈力纖維膜連續(xù)，有少量炎性細胞浸潤，外膜未見脂肪細胞。見圖1。

圖1 各組家兔主動脈弓HE染色圖（×400）

2.3 主動脈弓斑塊厚度及斑塊面積

正常組血管內膜無斑塊；阿托伐他汀組和血脈健組斑塊面積和斑塊厚度低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與阿托伐他汀組比較，血脈健組斑塊厚度和斑塊面積差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 各組家兔斑塊厚度及斑塊面積情況

表3 各組家兔斑塊厚度及斑塊面積情況

注：與模型組比較，★示P＜0.01。

group n 斑塊厚度(μm)斑塊面積(μm2)CG 10 0 0 MG 9 155.26±33.45 103497.12±36247.65 AG 9 129.05±41.30★ 71511.13±26379.40★XG 9 119.52±33.56★ 69170.82±28143.88★

3 討論

祖國醫(yī)學沒有動脈粥樣硬化這一病名記載，一般認為屬“血瘀”、“真心痛”、“眩暈”、“胸痹”等范疇?！端貑枴け哉摗吩疲骸靶谋哉?，脈不通”，“痹在于骨則重，在于脈則血凝而不流”,《金匱要略》載：“胸痹之病，喘急、咳唾、胸背痛、短氣、寸口脈沉而遲，關上小緊數(shù)……”，以上都符合現(xiàn)代醫(yī)學對高脂血癥和冠心病心絞痛及腦動脈粥樣硬化臨床癥狀的描述。祖國醫(yī)學有關類似動脈粥樣硬化治療的論述也很多，《素問·至真要大論》中提出：“疏其血氣，令其調達”?！督饏T要略》曰：“胸痹不得臥，……瓜蔞薤白半夏湯主之”。朱丹溪重視解郁散結，創(chuàng)氣、血、濕、痰、食、熱六郁之說。王清任創(chuàng)活血化瘀方劑血府逐瘀湯，專治“胸中血瘀證”。

現(xiàn)代中醫(yī)研究認為，高脂血癥、動脈粥樣硬化屬痰、濕、濁阻、血瘀范疇，為肝腎不足，脾失健運，痰瘀同病，主要表現(xiàn)為本虛標實、虛實夾雜。本虛可累及心、脾、肝、腎四臟，為病之本，以痰瘀互阻為病之標。正虛邪實相互影響，致使病變不斷發(fā)展。其病在血脈，根在臟腑。認為腎精虧損，淤血阻絡是本病的基本病機[2]；脾失健運，痰凝瘀停是該病的病機關鍵[3]；亦有認為肝郁氣滯，痰濁內生之病機[4]。對AS防治的辨證論治原則一般歸納為健脾益氣、滋陰養(yǎng)血、補益肝腎以治其本，活血化瘀，軟堅散結，消食化痰，通脈化濁以治其標。張大寧[2]等于70年代末首先提出的補腎活血法治療AS取得一定的療效；趙學軍[3]等運用健脾益氣化痰法在一定程度上阻抑家兔早期AS病變的形成；趙玉霞[5]等注重活血化瘀通絡，以水蛭為主藥活血化瘀，對AS患者有明顯的療效；張柏麗[4]等運用調肝導濁法治療AS取得明顯的療效。筆者認為，隨著人們生活水平的提高，青少年肥胖，高脂血癥越來越多，AS發(fā)病年齡逐漸前移。青少年素體陽盛，加之恣飲酒漿，喜食辛辣厚味，則易形成胃腸積熱，燥熱內結，以致火盛水虧，津液不生，損及脾陰，而胃陽獨旺。滯熱積聚，熏蒸上炎，損及心陰，陰血虧虛，心神失養(yǎng)而致心悸胸悶。加之所食之水谷化生精微過多，脾之運化功能負荷過重，常會引起濕困脾陽，脾失健運，水谷肥甘之物無以化生氣血精微，脾之清氣不能化濁，血中脂質增高，阻遏經行，脈絡不暢，心絡阻于痰濁。胃強脾弱，痰瘀阻絡是其病機關鍵，治宜平胃健脾，化痰祛瘀，乃組建血脈健處方，方中黃精、云苓補脾益氣，黃連、漏蘆瀉胃火，同時黃精與山茱萸配伍補益肝腎，使脾陽得腎陽溫煦而運化水谷精微和水濕，脾土賴腎水之濡養(yǎng)而健運不息。郁金辛散苦泄，能芳香解郁，涼血清心，宣化痰濁；澤瀉消痰、利水、泄熱之效；蒲黃、地龍化痰、祛瘀、通絡的作用，俱藥合用，標本兼治，補瀉并施，行滯通脈。

本研究所用AS模型通過牛血清白蛋白和卵清蛋白免疫刺激損傷血管內皮，再飼以高脂飼料而成，模型家兔主動脈內膜和基層均符合AS病理改變；總膽固醇和HDL-C、LDL-C均顯著升高，并且LDL-C升高幅度顯著高于HDL-C，甘油三酯變化不顯著，以上結果提示，該模型與Ⅱa型高脂血癥相似，符合AS主動脈病理學變化特征[6]，可以用于AS的防治研究。該實驗性AS模型經血脈健治療1月后，對血脂和主動脈斑塊有明顯的改善作用，0.4 g/（kg·d）的作用效果與0.45 mg/（kg·d）阿托伐他汀的作用效果基本一致，提示血脈健是一個治療AS的有效中藥復方，其作用機制有待進一步研究。

[1]郭愛桃,韋立新,李向紅. 冠狀動脈粥樣硬化斑塊組成成分與斑塊破裂的關系[J]. 中國動脈硬化雜志,1999,7: 357-359.

[2]張大寧.中醫(yī)補腎活血法研究第1版[M].北京:中國醫(yī)藥出版社,1997:156-164.

[3]趙學軍,等. 理脾化痰方抗家兔早期食餌性動脈粥樣硬化癥實驗研究[J].山東中醫(yī)藥大學學報,2001,25(6):461-462.

[4]張柏麗.調肝導濁中藥對大鼠主動脈平滑肌細胞增殖及胞內鈣離子影響的實驗研究[J]. 北京中醫(yī)藥大學學報,2002,25 (2):25-27.

[5]趙玉霞. 祛瘀消斑膠囊對動脈粥樣硬化組織學構成的臨床研究[J]. 上海中醫(yī)藥雜志,2001,12:13-14.

[6]王園園,龍民慧.兔動脈粥樣硬化動物模型的建立和評價[J].實驗動物科學,2008, 25(3):18-21.