棗莊學(xué)院生命科學(xué)系 劉梅

殼聚糖是甲殼素脫乙酰的產(chǎn)物，在工業(yè)上一般由蟹和蝦殼下腳料加工生產(chǎn)（宮愛艷等，2006）。殼聚糖是一種在節(jié)肢類動物中發(fā)現(xiàn)的纖維類生物高分子（Austine等，1981）。研究表明，在蛋雞日糧中添加殼聚糖可抑制血漿中甘油三酯濃度的上升以及高能日糧誘導(dǎo)的腹部脂肪沉積（Kobayashi和Itoh，1991）。日糧殼聚糖也可降低肉仔雞血漿膽固醇濃度和血漿甘油三酯（Razdan等，1997）。這表明，日糧殼聚糖可能降低肉仔雞的日糧脂肪吸收和沉積。但殼聚糖對肉仔雞脂肪代謝的調(diào)控機理仍不十分清楚。本研究著重探討殼聚糖影響肉仔雞脂肪代謝的機制。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗設(shè)計 選擇96只1日齡AA肉仔雞，隨機分成4個日糧處理組，每個日糧處理組分4個重復(fù)，每個重復(fù)6只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組分別在日糧中添加50、100、150 mg/kg的殼聚糖。試驗期21 d?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.2 飼養(yǎng)管理 各組飼養(yǎng)管理方式一致。試驗期間24 h光照，自由采食，自由飲水。免疫和消毒程序按常規(guī)程序進行。

1.3 樣品采集與測定

1.3.1 血樣采集及測定 在試驗第21天于每個處理每個重復(fù)選取1只接近平均體重的雞，翅靜脈采血5 mL，3000 r/min離心15 min（800型離心機，上海）制備血清，裝于1.5 mL的eppendorf管中，置-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。血清甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）濃度均采用終點法測（Gallaher等，2000；王述柏等，1998）。游離脂肪酸（NEFA）采用比色法測定 （具體操作參照南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說明書）。

1.3.2 腹脂率的測定 雞屠宰后，剝離腹部脂肪和肌胃周圍脂肪，腸脂不易剝離，故不計算在內(nèi)，稱重。計算脂肪占體重的百分比。

腹脂率/%=（腹脂重/活體重）×100。

1.3.3 肝脂率的測定 索氏提取法。

肝脂率/%=脂肪重/肝臟重×100。

1.3.4 腹脂中脂肪酸合成酶（FAS）活性測定 參照 Halestrap和 Denton（1973）的方法。

1.3.5 腹脂中蘋果酸酶 （ME）活性測定 參照Hsu 和 Lardy（1969）方法。

1.3.6 腹脂中脂蛋白脂酶（LPL）mRNA表達的測定 TRIZOL法提取總RNA后，用Oligo（dT）引物和AMV反轉(zhuǎn)錄酶進行反轉(zhuǎn)錄，RT-PCR反應(yīng)體系為SYBR Premix Ex Taq，上下游引物和cDNA模板以GAPDH為內(nèi)參，反應(yīng)程序為：變性95℃，10 s，退火 95 ℃，5 s，延伸 60 ℃，34 s。

1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS（11.5）統(tǒng)計處理軟件進行數(shù)據(jù)方差分析，試驗結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 殼聚糖對肉仔雞腹脂率和肝脂率的影響見表2。殼聚糖可使21日齡肉仔雞肝脂率和腹脂率下降，150 mg/kg組的肝脂率和腹脂率下降了4.92%（P ＜ 0.05）和 16.67%（P ＜ 0.05）。

表2 殼聚糖對肉仔雞肝脂率和腹脂率的影響

2.2 殼聚糖對肉仔雞血液指標(biāo)的影響 見表3。由表3可知，在0～21 d的肉仔雞日糧中添加殼聚糖，可使肉仔雞血清TG含量下降，血清NEFA含量上升，但都差異不顯著（P＞0.05）。而添加殼聚糖150 mg/kg組與對照組相比，其TC含量顯著下降 23.19%（P＜0.05）。

表3 殼聚糖對血液指標(biāo)的影響

2.3 殼聚糖對肉仔雞腹脂中FAS和ME活性的影響 見圖1。由圖1可知，殼聚糖對肉仔雞腹脂F(xiàn)AS和ME活性沒有顯著影響。

2.4 殼聚糖對肉仔雞腹脂中LPL mRNA水平的影響 見圖2。由圖2可知，殼聚糖對肉仔雞腹脂LPL mRNA表達具有顯著性影響，可使LPL mRNA表達上調(diào)。這表明殼聚糖具有增強LPL mRNA表達，通過上調(diào)LPL mRNA表達，催化TG水解成甘油和脂肪酸。

圖2 殼聚糖對肉仔雞腹脂LPL mRNA表達的影響

3 討論

殼聚糖是少有的帶正電荷的多糖，具有獨特的黏合性質(zhì)。殼聚糖可調(diào)控脂肪代謝，機理是殼聚糖可與膽酸絡(luò)合，而機體對脂肪的消化離不開膽酸的作用，只有在膽酸將脂肪乳化后，脂肪才能被消化液作用，所以當(dāng)殼聚糖與膽酸絡(luò)合后，脂肪就不能被機體吸收，從而降低機體脂肪的沉積（羅贊和賀建華，2008）。殼聚糖還能有效降低膽固醇，主要由于殼聚糖對血液中極低密度脂蛋白（VLDL）能進行選擇性吸收。另外殼聚糖能直接吸附膽固醇，減少它的吸收（黃冠慶等，2006）。研究還認為，殼聚糖影響動物脂類代謝的機理可能是殼聚糖通過吸附飼料中的脂肪，使被吸附的脂肪不能為脂肪酶所分解，最后隨糞便排出體外，阻止脂肪在腸道中的吸收。馬小珍等（2001）認為，殼聚糖能顯著降低肉仔雞的脂肪沉積量，改善胴體品質(zhì)。本試驗表明，150 mg/kg組殼聚糖對肉仔雞脂類代謝的影響效果顯著，能分別降低肉仔雞的肝脂率和腹脂率4.92%（P＜0.05）和 16.67%（P＜0.05）。

研究表明，在肉雞日糧中添加殼聚糖可顯著降低血清中TC和TG含量，促進機體脂類代謝（Kobayashi等，2002）。 吳秋小等（2007）在 0 ～ 3周齡三黃肉仔雞日糧中添加殼聚糖，結(jié)果表明，殼聚糖能提高肉仔雞血液中非必需脂肪酸的含量，抑制脂肪的沉積，但總體對肉仔雞的脂肪代謝的影響效果不顯著。本試驗結(jié)果表明，150 mg/kg組殼聚糖能有效降低血清中TC水平（P＜0.05），而對TG和NEFA的水平?jīng)]有影響。這可能與殼聚糖的來源、脫乙酰度、黏度、添加水平、基礎(chǔ)日糧組成以及肉仔雞的飼養(yǎng)環(huán)境等因素相關(guān)。

從乙酰CoA及丙二酰CoA合成長鏈脂肪酸實際上是一個重復(fù)加成的過程，每次延長2個碳原子。FAS就是催化該加成反應(yīng)的酶，它是由7種酶蛋白聚合在一起構(gòu)成的多酶體系，在高等動物，這7種酶活性都在一條多肽鏈上，屬多功能酶，由一個基因所編碼（宋慶文，2007）。FAS在動物體脂生成、沉積中發(fā)揮重要作用。試驗表明，殼聚糖對肉仔雞腹脂F(xiàn)AS和ME活性沒有影響。這意味著殼聚糖對肉仔雞的脂肪合成影響不大。

血液中的TG要被其他組織重新利用，首先必需水解為游離脂肪酸，而催化這一反應(yīng)的酶就是LPL。LPL是由脂肪細胞、骨骼肌細胞、乳腺細胞等實質(zhì)組織細胞合成的一種蛋白質(zhì)水解酶，廣泛分布于不同組織，其中在脂肪組織和骨骼肌中含量較高 （Goldberg，1996；Olivecrona 和 Bengtsson，1993）。本試驗表明，150 mg/kg組殼聚糖使肉仔雞腹脂LPL mRNA表達顯著性上調(diào) （P＜0.05）。

4 小結(jié)

150 mg/kg組殼聚糖對肉仔雞脂類代謝的影響效果顯著，能降低肉仔雞的肝脂率和腹脂率（P＜0.05），同時能有效降低血清中TC水平 （P＜0.05），對肉仔雞腹脂F(xiàn)AS和ME活性沒有影響，但顯著性上調(diào)肉仔雞腹脂LPL mRNA表達 （P＜0.05）。

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