田志國任進民張好曼麗張曉麗

（1河北賽克藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050021；2河北醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，050000；3河北醫(yī)科大學藥學院，050017；4河北東海藥都醫(yī)藥有限公司，050011）

尼群地平分散片人體生物等效性研究

田志國1任進民2張好曼麗3張曉麗4

（1河北賽克藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050021；2河北醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，050000；3河北醫(yī)科大學藥學院，050017；4河北東海藥都醫(yī)藥有限公司，050011）

目的:研究尼群地平分散片在健康人體內的藥物動力學及相對生物利用度，為臨床合理用藥提供依據(jù)。方法:采用20名健康男性受試者雙周期交叉口服單劑量20 mg尼群地平分散片（受試制劑）和資壽(尼群地平片,參比制劑），用LC-MS/MS法測定血漿中尼群地平濃度，考察兩種制劑的生物等效性。結果:實驗結果表明受試制劑的相對生物利用度為(106.7±25.0)%，兩制劑具有生物等效性。結論:尼群地平分散片與資壽(尼群地平片)具有生物等效性。

尼群地平；液相色譜-串聯(lián)質譜；相對生物利用度；生物等效性

尼群地平(nitrendipine)是第二代二氫吡啶類鈣通道拮抗劑，具有選擇性松弛血管平滑肌，擴張外周血管，降低血壓療效，其特點是作用溫和，維持藥效時間長，不良反應輕。目前國內上市的該藥制劑主要為尼群地平片，是臨床上較為理想的口服抗高血壓藥物[1-2]。但普通片劑有溶出速度慢、首過效應強、半衰期短、生物利用度低等缺點，且由于尼群地平難溶于水，服用劑量小，導致藥物溶出緩慢而影響藥物被充分吸收，降壓作用只能維持6～8小時，每天需要服用2～3次，遠遠達不到尼群地平制劑的應有水平。尼群地平分散片較一般膠囊、片劑有明顯的優(yōu)越性，不僅服用方便，而且崩解與溶出快速，藥效持久，特別適用于老年人和吞咽困難的病人。

本研究采用開放、隨機分組、交叉、單劑量、兩周期試驗設計，篩選20名健康男性受試者按試驗設計口服單劑量參比制劑或受試制劑，使用高效液相色譜－串聯(lián)質譜檢測法測定血漿中尼群地平濃度，用DAS軟件擬合計算藥代動力學參數(shù)及評價生物等效性[3-5]?，F(xiàn)將有關尼群地平分散片人體生物利用度研究報道如下：

1 儀器與試藥

3200 QTRAP型串聯(lián)四極桿線性離子阱質譜儀，配有Turbo V離子源（美國AB公司），AnaLyst 1.4軟件（美國AB公司）。液相色譜儀為Agilent 1200系統(tǒng)，配有四元泵、在線脫氣機、自動進樣器（美國Agilent公司）。

尼群地平分散片[受試制劑（A），河北賽克藥業(yè)有限公司，規(guī)格：10 mg，批號：20090201，含量101.5%]。

尼群地平片[參比制劑（R），石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司，規(guī)格：10 mg，商標名：資壽，批號：08125044，有效期至2011年11月。批準文號：國藥準字H13022629]。

尼群地平對照品，批號：100585-200602；內標為尼莫地平，批號：100270-200002，中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結果

2.1 試驗設計

20名男性健康志愿者，平均年齡（22.3±1.8）a，平均體重（62.2±6.2）kg。試驗前進行病史詢問和體檢，血、尿常規(guī)，心、肝、腎功能，血糖等檢查均正常。受試前兩周及試驗期間未服用其他任何藥物，受試者均無煙酒嗜好，自愿簽署知情同意書，試驗方案經(jīng)倫理委員會批準通過。

采用雙周期交叉試驗設計，20名受試者隨機分為2組。試驗前一日晚8時起禁食，次日晨7時空腹口服藥物A或R制劑20 mg，用200 mL溫開水送服，2 h內禁水，4 h后統(tǒng)一進標準餐一次，8 h后進標準餐一次。試驗期間保持日常輕微活動，不允許長時間臥床，并避免劇烈活動。分別在給藥前取空白血樣，于給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、11、14、24 h各個時刻自上肢靜脈取血4 mL，注入肝素化管中，混勻后離心，轉速3 000 rpm，時間10 min，血漿樣品于－80℃冰箱保存待測。1周后交叉給藥，重復試驗。

2.2 血漿樣品檢測

2.2.1 色譜、質譜條件

色譜柱：Eclipse C18，5 mm,150×4.6 m（Agilent公司）；流動相為乙腈∶水梯度洗脫。梯度洗脫程序：0～0.5 min，乙腈∶水比例70/30（v/v)→95/5；0.5～5.0 min，乙腈∶水比例維持95/5；5.0～5.1 min，乙腈∶水比例95/5→70/30；每次進樣前預平衡3 min。流速：0.7 mL/min，進樣體積為5 μL，柱溫為室溫。

質譜條件：離子源為電噴霧離子化源（ESI）；源噴射電壓（IS）為－4500V；霧化溫度為600℃；霧化氣（GS1，N2）壓力為60 psi；輔助氣（GS2，N2）壓力為60 psi；氣簾氣（N2）壓力為30 psi；負離子方式檢測；掃描方式為多反應監(jiān)測（MRM）；用于定量分析的離子反應分別為：m/z 359.2→m/z 121.9（尼群地平），解簇電壓（DP）為－41 V，碰撞能量（CE）－25 eV；m/z 417.3→m/z 122.0（內標，尼莫地平），解簇電壓（DP）為－45 V，碰撞能量（CE）－30 eV；駐留時間均為200 ms。

2.2.2 樣品處理

取血漿樣品1 mL，加入50 μL內標溶液（85.2 μg/mL尼莫地平的乙腈溶液），渦流混合30 s，加入乙醚3 mL，渦流混旋2 min，離心（4 000 rpm）5 min，－20℃冷凍30 min，取上清液至5 mL離心管中，40℃氮氣流下吹干。加入100 μL 70%乙腈溶液，渦流混旋1 min，溶液轉移至2 mL離心管中，離心（12 000 rpm）5 min，取上清液70 μL至自動進樣小瓶，進樣5 μL進行LC-MS/MS分析，記錄主峰和內標峰面積，用標準曲線法計算出血漿樣品的尼群地平濃度(ng/mL)。

2.2.3 標準曲線和方法學研究

取空白血漿1 mL置離心試管中，加入50 μL含尼群地平系列標準溶液，配制成相當于尼群地平濃度為0.100，0.250，0.501，2.50，5.01，10.0，25.0，50.1 ng/mL的標準血漿樣品。按血漿樣品處理方法“2.2.2”項下方法操作處理后進行測定。以尼群地平與內標峰峰面積比(Y)對尼群地平濃度(X)作加權回歸（1/C2），得回歸方程Y=0.806 5X +0.012 70，r=0.998 5(n=8)。表明尼群地平的血漿濃度在0.100～ 50.1 ng/mL范圍內線性關系良好。定量限為0.100 ng/mL。低、中、高3個濃度（0.250、5.01、40.1 ng/mL）血漿樣品，日內精密度RSD≤5.9%、日間精密度RSD≤14.0%，RE≤6.9%。提取回收率分別為84.1%，94.1%和87.0%（n=18）。內標的提取回收率為 85.2%，RSD為10.7%（n=9）。

2.3 藥動學參數(shù)和生物等效性評價

20名健康受試者口服單劑量20 mg受試制劑A和參比制劑R后的平均藥－時曲線見圖1。由DAS 2.0統(tǒng)計軟件，計算各藥代動力學參數(shù)，并進行生物等效性統(tǒng)計分析。

圖1 平均藥－時曲線（n=20）

用受試者的血藥濃度－時間數(shù)據(jù)作曲線擬合，求得個體參數(shù)后計算平均值。tmax、Cmax取實測值，藥時曲線下面積（AUC）由梯形法求得，消除半衰期按t1/2=－0.693/Zeta計算，相對生物利用度F＝AUCA／AUCR×100%。（AUCA：受試制劑的AUC值；AUCR：參比制劑的AUC值。）采用DAS 2.0統(tǒng)計軟件對各制劑所得的主要藥代動力學參數(shù)，Cmax及AUC值經(jīng)對數(shù)轉換后作方差分析，雙單側t檢驗和90%置信區(qū)間檢驗，tmax用非參數(shù)法分析，評價兩制劑的生物等效性。受試制劑和參比制劑生物等效性統(tǒng)計分析結果分別見表1～4。

非參數(shù)秩和檢驗結果表明，A和R制劑tmax無顯著性差異（P＞0.05）。方差分析結果顯示，A制劑和R制劑Cmax及AUC值均無顯著性差異（P＞0.05）。雙單側t檢驗結果表明，A制劑的AUC 90%置信區(qū)間落在R制劑的80.0% ～125.0%之間，Cmax落在70.0%～143.0%之間，證明受試制劑尼群地平分散片與市售參比制劑資壽(尼群地平片)具有生物等效性，A制劑相對于R制劑的相對生物利用度為（106.7±25.0）%。

表1 20名健康受試者口服單劑量受試制劑和參比制劑20 mg后尼群地平主要藥動學參數(shù)方差分析結果

表2 20名健康受試者口服單劑量受試制劑和參比制劑20 mg后尼群地平主要藥動學參數(shù)雙向單側t檢驗結果(α=0.05)

表3 20名健康受試者口服單劑量受試制劑和參比制劑10 mg后尼群地平 tmax非參數(shù)檢驗結果 (α=0.05)

表4 主要藥動學參數(shù)結果（±s,n=20）

表4 主要藥動學參數(shù)結果（±s,n=20）

參數(shù) A制劑 R制劑Cmax（ng/mL）Tmax（h）T1/2(ke)（h）AUC(0～24h)（ng/h·mL）AUC(0～∞)（ng/h·mL）13.80 11.40 2.00 0.84 5.44 2.59 77.0 60.2 79.8 61.8±±±±± 13.50±9.61 1.79±0.66 5.25±1.77 71.0±49.2 74.0±52.3

3 討論

本試驗建立的色譜條件分離較好，回收率高，精密度好，方法簡便、快捷，適用于尼群地平制劑的人體藥動學和尼群地平片（R）的雙交叉試驗，證明兩制劑具有生物等效性；A制劑吸收速度相對較快，與兩制劑的劑型不同有關；分散片遇水后可迅速崩解形成均勻的黏性混合液，崩解時間在3min內[6]，崩解、吸收、起效均比普通片劑快，可吞服或在水中分散后口服，尤其適合兒童、老年人和吞服困難的患者。

[1] 路西明，王學廷，李麗.尼群地平的藥理與臨床應用[J].洛陽醫(yī)專學報，1994，13（3）：186-188.

[2]常錦榮.尼莫地平、尼群地平、尼卡地平臨床應用與評價[J].藥學實踐雜志，1996，14（5）：271-272.

[3]黨愛民，杜江波，明廣華，等.中國資壽尼群地平和德國拜爾－尼群地平藥代、藥效學交叉比較研究[J].中國心血管雜志，1998，3(5)：308-311.

[4]林振禮，趙香蘭.尼群地平在正常人及腎功能不全的高血壓病人的體內消除及藥效學比較[J].中國臨床藥理學雜志，1995，11(3)：146-151.

[5]Ying L,Fengguo X,Zunjian Z,et al.Quantitative determination of nitrendipine in human plasma using high-performance liquid chromatography-mass spectrometry[J].Arzneim Forsch Drug Res.2008,58(3):111

[6]崔德福.藥劑學[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004:112.

Study on Human Bioequivalence of Nitrendipine Dispersible Tablets

Tian Zhiguo1,Ren Jinmin2,Zhang Manli3,Zhang Xiaoli4(1 Hebei Saike Pharmaceutical Co.,Ltd.Shijiazhuang 050021,China;2 The Second Hospital attached Hebei Medical University,050000;3 Department of Natural Product Chemistry,School of Pharmaceutical Sciences,Hebei Medical University,050017；4 Hebei Donghai Yaodu Pharmaceuticals Co.,Ltd.,050011)

Objective:To study the pharmacokinetics and relative bioavailability of nitrendipine dispersible tablets.Methods:Nitrendipine dispersible tablets were compared with Zishou nitrendipine tablets by a randomized crossover design at a single oral dose of 20 mg in 20 healthy male volunteers.The concentration of nitrendipine was determined by LC-MS/MS.Results:The relative bioavailability of dispersible tablets was(106.7±25.0)%.Conclusion:According to the results,nitrendipine dispersible tablets and nitrendipine tablets were bioequivalent.

Nitrendipine；LC-MS/MS；Relative Bioavailability；Bioequivalence

田志國，男，工程師。主要從事藥物制劑生產(chǎn)、開發(fā)研究工作。E-mail：hbskscb@163.com