姚衛(wèi)紅

（長(zhǎng)治市人民醫(yī)院，山西 長(zhǎng)治046000）

研究顯示胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2（insulin-like growth factor binding protein-2，IGFBP2）在腫瘤細(xì)胞形成、生長(zhǎng)等過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，在許多腫瘤患者的血清、腫瘤組織和細(xì)胞株中都有IGFBP2的表達(dá)或表達(dá)水平升高［1］。糖調(diào)節(jié)蛋白-94（glucose-regulated protein，GRP94）在腫瘤免疫中的作用也已成為研究的熱點(diǎn)，已經(jīng)證實(shí)它具有良好的“分子伴侶”和免疫佐劑的效應(yīng)，可在體內(nèi)誘導(dǎo)特異性主動(dòng)免疫［2］。IGFBP2和GRP94在腫瘤組織中如何表達(dá)且是否具有相關(guān)性，目前還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道。因此為探討IGFBP2、GRP94與肝硬化和肝癌（hepatocelluar carcinoma，HCC）的關(guān)系，本研究檢測(cè)了35例HCC患者的癌組織和相應(yīng)的癌旁組織以及20例肝硬化患者肝組織中IGFBP2、GRP94蛋白的表達(dá)，探討IGFBP2、GRP94蛋白與肝癌的關(guān)系及其他們之間的相關(guān)性，以探索IGFBP2、GRP94在肝硬化向肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

35例HCC及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本 （肝癌組）、20例肝硬化組織標(biāo)本 （肝硬化組）均來(lái)自2003年11月-2008年11月我院病理科。肝癌組中，男24例，女 11 例，年齡 38 歲～51 歲，平均（43.22±8.93）歲；肝硬化組中，男12例，女8例，年齡13歲～67歲，平均（43.83±14.44）歲；6例正常肝組織標(biāo)本 （健康對(duì)照組）中，男 3例，女 3例，年齡 25歲～57歲，平均（45.33±5.35）歲。健康對(duì)照組為手術(shù)切除的肝血管瘤外正常肝組織。病理組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。肝癌組腫瘤病理分級(jí)按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為，高分化（G1級(jí)）18 例、中分化（G2級(jí)）10 例、低分化（G3級(jí)）7 例［3］。 肝硬化組中，輕度腹水9例，中度腹水6例，重度腹水5例。

1.2方 法

HCC及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本、肝硬化標(biāo)本、正常肝組織標(biāo)本均行IGFBP2、GRP94（均為單抗，美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品）免疫組織化學(xué)染色，染色方法按SABC說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行 （SABC試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司）。組織微波預(yù)處理，微波抗原修復(fù)液為pH6.0檸檬酸緩沖液，經(jīng)DAB顯色后，蘇木素復(fù)染，中性樹(shù)膠封片。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照，陰性對(duì)照采用磷酸鹽緩沖液代替第一抗體。

1.3 結(jié)果判定

用Image-Pro Plus型全自動(dòng)醫(yī)學(xué)圖象彩色分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象半定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野（×400），測(cè)定肝組織中棕黃色陽(yáng)性表達(dá)顆粒的積分吸光度值，該值越高表達(dá)越強(qiáng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 HE染色結(jié)果

HCC組中，28例呈梁索型，癌細(xì)胞排列成梁狀或竇隙狀結(jié)構(gòu)；7例呈腺樣型，癌細(xì)胞排列成假腺樣及腺泡狀結(jié)構(gòu)。肝硬化組中，厚實(shí)、寬度不等的纖維間隔分割肝小葉形成大小不等、形態(tài)不整齊的假小葉。健康對(duì)照組中肝細(xì)胞排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，僅見(jiàn)少許纖細(xì)纖維分布于血管壁。

2.2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

2.2.1 IGFBP2在肝組織中的表達(dá) 健康對(duì)照組僅見(jiàn)少數(shù)肝細(xì)胞有陽(yáng)性染色；在肝硬化組可見(jiàn)肝竇內(nèi)和纖維間隔內(nèi)的HSC、成纖維細(xì)胞、枯否細(xì)胞及纖維間隔周?chē)母渭?xì)胞有較強(qiáng)的陽(yáng)性染色；在肝癌組，陽(yáng)性定位于癌細(xì)胞胞質(zhì)，呈灶性分布。圖象分析結(jié)果表明：IGFBP2在肝癌組和肝硬化組肝組織的表達(dá)顯著高于健康對(duì)照組，并且在肝癌組肝組織的表達(dá)顯著高于肝硬化組肝組織。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.2 GRP94蛋白在肝組織中的表達(dá) 35例肝癌組織中30例（85.0%）存在GRP94的表達(dá)，不同癌組織存在胞質(zhì)、胞膜和胞核表達(dá)強(qiáng)度及部位的差異，癌旁組織亦存在較弱的表達(dá)。人肝癌組織存在GRP94的表達(dá)異質(zhì)性，呈現(xiàn)了胞質(zhì)、胞膜和胞核的表達(dá)差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 IGFBP2與GRP94在肝組織中表達(dá)的定量分析結(jié)果 （±s）

表1 IGFBP2與GRP94在肝組織中表達(dá)的定量分析結(jié)果 （±s）

注：與健康對(duì)照組比較，1）P<0.05；與肝硬化組比較，2）P<0.05

組別 例數(shù) IGFBP2 GRP94蛋白健康對(duì)照組 6 580.2±83.5 152.6±41.3肝硬化組 20 8475.6±1556.41） 802.6±389.91）肝癌組 35 17731.2±1932.51）2） 3015.4±1851.11）2）

2.2.3 相關(guān)性分析 肝組織IGFBP2的表達(dá)與肝組織GRP94的表達(dá)呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r值為0.625。

3 討 論

IGFBP是能與胰島素樣生長(zhǎng)因子 （insulin-like growth factor，IGF）結(jié)合的調(diào)節(jié)蛋白，調(diào)節(jié) IGF與其受體的結(jié)合能力，從而影響胰島素樣生長(zhǎng)因子受體（insulin-like growth factor receptor，IGFR） 下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。體外研究顯示，IGFBP可通過(guò)IGF依賴性和非IGF依賴性兩種作用方式，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和存活發(fā)揮作用［3-4］。有研究顯示，肝癌組血清IGFBP-2水平明顯高于肝硬化組和健康對(duì)照組［5］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在肝硬化、肝癌和正常肝組織的免疫組化中，IGFBP2在健康對(duì)照組正常肝組織微弱表達(dá)，在肝硬化組和肝癌組肝組織的表達(dá)明顯增強(qiáng)；在肝癌組織及同一肝癌組織的不同癌細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度和分布部位存在一定的差異，癌組織比鄰近的正常組織表達(dá)水平顯著升高；肝硬化的病例相差較懸殊，有的病例染色程度及范圍與肝癌病例相似；有的病例染色程度與正常肝組織相似，呈低水平表達(dá)。如果以上結(jié)論成立，那么我們可以推測(cè)肝硬化病例相差懸殊的染色程度其實(shí)可能顯示癌變可能性的大小或者說(shuō)標(biāo)志著癌變的進(jìn)程。

正常細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育分化過(guò)程中，GRP94的少量表達(dá)和分布受到細(xì)胞周期的嚴(yán)格調(diào)控，而腫瘤細(xì)胞中由于突變或癌蛋白的存在刺激GRP94的合成，使其呈現(xiàn)持續(xù)的高誘導(dǎo)表達(dá)［6］。本實(shí)驗(yàn)免疫組化染色結(jié)果顯示，GRP94蛋白在肝癌組肝組織的表達(dá)顯著高于肝硬化組和健康對(duì)照組肝組織的表達(dá)。說(shuō)明GRP94蛋白在肝硬化向肝癌的發(fā)展中可能起重要作用，與以往報(bào)道相似。本研究結(jié)果也顯示了肝組織IGFBP2的表達(dá)與肝組織GRP94的表達(dá)呈正相關(guān)，推測(cè)IGFBP2和GRP94可能協(xié)同發(fā)揮作用。IGFBP2、GRP94在肝癌組肝組織表達(dá)水平顯著高于肝硬化組，在肝硬化組中表現(xiàn)形式的多樣性，說(shuō)明它可能是參與肝硬化向肝癌發(fā)展的因素。目前有關(guān)它們相互作用的機(jī)制還不清楚，有待于今后進(jìn)一步研究。

［1］鄧星輝，楊竹林.胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2與腫瘤發(fā)生［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌分冊(cè)，2003，24（1）：5.

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