李 成,顏 晗,羅意文,曾繁濤,路 偉,陳連劍*

(1.深圳市福田人民醫(yī)院,廣東 深圳 518033;2.深圳市藥檢所,廣東 深圳 518057)

鹽酸達(dá)克羅寧為局部麻醉藥,對皮膚有止痛、止癢及殺菌作用。復(fù)方達(dá)克羅寧薄荷腦潤膚止癢水是我院制劑室自行研制的一種外用溶液劑,以達(dá)克羅寧和薄荷腦為主藥,酒精和甘油為輔藥,用于治療我院皮膚科門診日益增多的秋冬季節(jié)的皮膚干燥、瘙癢患者,尤其是日益增多的中老年患者?！稄?fù)方達(dá)克羅寧薄荷腦潤膚止癢水的研制》被列為 2009年深圳市科技計劃項(xiàng)目。2010年 4-5月,本研究參考國內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)[1-5],并根據(jù)鹽酸達(dá)克羅寧的理化性質(zhì),建立了高效液相色譜法測定復(fù)方達(dá)克羅寧薄荷腦潤膚止癢水中達(dá)克羅寧的含量,該方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可作為本品的質(zhì)量控制方法。

1 藥物與儀器

1.1 儀器 島津 LC-20ADHPLC儀(SPD-20A UV檢測器,CTO-10ASVP柱溫箱,phenomenex lune色譜柱(4.6 mm×250 mm,5μm),SIL-20AL(自動進(jìn)樣器),UV-2201紫外分光光度計(日本島津),KQ5200DB數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),AG285電子天平(瑞士梅里達(dá))。

1.2 藥物 鹽酸達(dá)克羅寧(杭州良金生物科技,批號:2091203,含量:99.9%),復(fù)方達(dá)克羅寧薄荷腦潤膚止癢水(本院自制),乙腈(色譜純,天津四友)。其他試劑均為分析純。所有試劑和溶液使用前均經(jīng) 0.45μm微孔濾膜過濾。

2 方 法

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備 精密秤取鹽酸達(dá)克羅寧 20.13 mg,置 100 ml量瓶中,用流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,得濃度為 0.2013 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.1.2 樣品溶液制備 精密量取樣品 1 ml,置100 ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。

2.1.3 空白樣品溶液制備 按處方比例秤取除鹽酸達(dá)克羅寧外的其他的藥品和輔料,按該制劑制備工藝制成空白制劑,其余按樣品溶液的制備項(xiàng)下方法進(jìn)行。

2.2 檢測波長 精密量取對照品溶液 3 ml至10 ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,以流動相為空白,在 400-190 nm波長范圍內(nèi)掃描,結(jié)果鹽酸達(dá)克羅寧在 279 nm處有最大吸收(見圖 1),薄荷腦及輔料無干擾,故選擇 279 nm作為檢測波長。

圖1 鹽酸達(dá)克羅寧紫外吸收光譜

2.3 色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱:Phenomenex lune(4.6 mm×250 mm,5μm);流動相:乙睛 -水 -三乙胺 -冰醋酸(55∶43.5∶1.0∶0.5);流速:0.5ml/min;檢測波長:279 nm;進(jìn)樣量:10 μl;柱溫 30℃。理論塔板數(shù)不低于3 000,主峰與相鄰色譜峰的分離度不小于 1.5。色譜圖見圖 2。

圖2 空白洗劑與鹽酸達(dá)克羅寧對照品及樣品色譜圖A.空白洗劑 B.鹽酸達(dá)克羅寧對照品 C.樣品

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密量鹽酸達(dá)克羅寧對照品溶液 1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml,分別置 10 ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。分別取 10μl進(jìn)樣,各濃度進(jìn)樣 3次,以濃度(C)對峰面積(A)進(jìn)行線性回歸。得回歸方程:A=65692.96C—40105.4,r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明,鹽酸達(dá)克羅寧濃度在 20.13-120.78μg/ml范圍內(nèi)與吸收度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣 5次,每次 10μl,記錄峰面積,計算 RSD=1.4%(n=5)表明方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取含量測定項(xiàng)下的樣品溶液,在 12 h內(nèi)每 2 h測定一次,峰面積分別為 3 239 821,3 108 705,3 219 240,3 192 567,3 157 254,3 109 251,平均為 3 171 140,RSD為 1.8%,結(jié)果表明該方法在 12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的同一批供試品溶液 5 ml各 6份,置 10 ml量瓶中,分別加入 60%、100%、140%的鹽酸達(dá)克羅寧,加流動相稀釋至刻度(相當(dāng)于 80%、100%、120%),按“含量測定”項(xiàng)下的方法,依法測定,按上述回歸方程計算含量,計算加樣回收率,結(jié)果見表 1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.8 樣品測定 精密量取1 ml,置 100 ml量瓶中,用流動相溶解并稀釋至刻度,取稀釋液 10μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密秤取鹽酸達(dá)克羅寧對照品適量,用流動相溶解并稀釋成約 50 μg/ml,同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算出樣品中鹽酸達(dá)克羅寧的含量,結(jié)果見表 2。

表2 含量測定結(jié)果(n=2)

2.9 空白試驗(yàn) 按處方秤取除達(dá)克羅寧外的其他成份,依法制成空白洗劑,按“含量測定”項(xiàng)下的方法,依法測定,結(jié)果峰面積為 0,表明其他成份不會對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)色譜條件設(shè)定流速為 0.5 ml/min,保留時間可達(dá)到7.363min,如設(shè)定為.0 ml/min,則保留時間小于 5 min;進(jìn)樣量如為 20μl,則樣品峰太高,進(jìn)樣量為 10 μl,峰高適宜。在本實(shí)驗(yàn)條件下,理論塔板數(shù)為9305,拖尾因子為 1.2(采用峰面積法),滿足分析要求。實(shí)驗(yàn)表明,采用高效液相色譜法測定復(fù)方達(dá)克羅寧薄荷腦潤膚止癢水中達(dá)克羅寧的含量,方法簡便、快速、準(zhǔn)確,適用于制劑的快速分析。

[1] 楊躍龍.RP-HPLC法測定復(fù)方達(dá)克羅寧軟膏中主藥的含量[J].中國藥房,2008,19(4)∶294.

[2] 郭宇鵬,趙 青.HPLC法測定芩寧軟膏中黃芩苷及鹽酸達(dá)克羅寧的含量[J].齊魯藥事,2007,26(10)∶597-599.

[3] 龔士學(xué),王 勇,周 琳.達(dá)克羅寧氯己定硫軟膏中鹽酸達(dá)克羅寧的含量測定[J].中國藥業(yè),2007,16(17)∶20-21.

[4] 郭 珉,李珠華,趙遠(yuǎn)征,等.反相高效液相色譜法測定復(fù)方達(dá)克羅寧搽劑中二組分的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2006,25(5)∶469.

[5] 王澤明.當(dāng)代結(jié)構(gòu)藥物全集[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,1993∶1 777-1 778.