高寶輝 祁旦巳 趙志光 謝麗微

子宮內(nèi)膜息肉ras基因p21蛋白和p53的表達(dá)及意義

高寶輝 祁旦巳 趙志光 謝麗微

子宮內(nèi)膜息肉；p21ras基因；p53

子宮內(nèi)膜息肉(EMP)是婦科常見疾病，是引起不規(guī)則陰道出血的重要原因，可導(dǎo)致不孕，甚至癌變，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。現(xiàn)普遍認(rèn)為EMP是一種不能與正常子宮內(nèi)膜同步增生、分化和脫落的失調(diào)性腫瘤。ras基因是一種促進(jìn)細(xì)胞增殖的原癌基因，其家族三個(gè)成員具有相似的結(jié)構(gòu)，其編碼的產(chǎn)物為相對分子量21000的蛋白質(zhì)，故稱為p21蛋白。p21ras基因蛋白的檢測可以反映腫瘤細(xì)胞的生長活性，目前ras已成為卵巢腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的熱點(diǎn)，但有關(guān)子宮內(nèi)膜息肉組織中p21ras的檢測及臨床意義尚未見到報(bào)道，為此，我們檢測了35例EMP和31例EMP伴腺體不典型增生的組織中p21ras的表達(dá)，同時(shí)所有病例檢測p53，以探討EMP形成原因，并探討EMP與子宮內(nèi)膜息肉腺體不典型增生之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 材料 收集本院2006年1月～2009年6月經(jīng)病理確診的存檔EMP石蠟標(biāo)本35例，平均年齡43.7歲，均為增生期EMP；子宮內(nèi)膜息肉伴腺體不典型增生的石蠟標(biāo)本31例，平均年齡45.2歲；對照組30例，取自異常子宮出血行宮腔鏡檢查并診刮者，經(jīng)病理證實(shí)為正常增生期子宮內(nèi)膜。所有病人就診前3個(gè)月均無性激素用藥史。未選絕經(jīng)后病例。

1.2 方法 標(biāo)本用10%福爾馬林固定，石蠟包埋后，連續(xù)切片，厚度4～5um，貼于涂有多聚賴氨酸的載玻片上，常規(guī)烘片脫蠟，梯度酒精到蒸餾水化，切片作免疫組化微波修復(fù)S-P法檢測。鼠抗人p53單克隆抗體和p21ras抗體為DaKo公司產(chǎn)品，SP試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，設(shè)陽性和陰性對照，DAB顯色。

1.3 結(jié)果判斷 采用兩人雙盲法觀察切片，用半定量積分方法判斷結(jié)果，p21ras陽性標(biāo)準(zhǔn)是在細(xì)胞質(zhì)包括核膜特異性出現(xiàn)片狀或顆粒狀棕黃色著色者為陽性細(xì)胞，p53蛋白定位于細(xì)胞核，為棕黃色顆粒。陽性細(xì)胞≤5%為0分，6%～25%為1分(+)，26%～50%為2分(++)，50%以上為3分(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用x2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

p21ras的表達(dá)：30例增生期子宮內(nèi)膜僅一例弱陽性表達(dá)(1/30)；35例EMP中陰性24例，弱陽性5例，陽性6例，陽性表達(dá)率為31.42%(11/35)；EMP伴腺體不典型增生31例中，陰性15例，弱陽性6例，陽性10例，陽性表達(dá)率為51.61%(16/31)。

p53的表達(dá)：30例增生期子宮內(nèi)膜陰性28例，弱陽性2例，表達(dá)率為6.66%(2/30)；35例EMP中陰性23例，弱陽性7例，陽性5例，表達(dá)率為34.28%(12/35)；EMP伴腺體不典型增生31例中，陰性14例，弱陽性8例，陽性9例，表達(dá)率為54.83%(17/31)。

表1 子宮內(nèi)膜組織中p21ras和p53的表達(dá)

3 討論

子宮內(nèi)膜息肉(EMP)是婦科常見病，在青春期后的任何年齡均可發(fā)生，臨床可表現(xiàn)陰道不規(guī)則出血，經(jīng)量增多，不孕，3%的病人可發(fā)生癌變[1]。EMP表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜基底層腺體和間質(zhì)出現(xiàn)局限性增生，息肉中間質(zhì)纖維化甚至膠原化，間質(zhì)中含有成熟的厚壁血管，腺體可呈囊性擴(kuò)張、扭曲，腺上皮可伴有增生、不典型增生、甚至癌變。

關(guān)于雌、孕激素受體與EMP的關(guān)系已見到較多報(bào)道，普遍認(rèn)為長期持續(xù)的雌激素刺激是EMP發(fā)病原因之一，但近年來有學(xué)者提出細(xì)胞的增殖與EMP關(guān)系密切，現(xiàn)普遍認(rèn)為K-ras突變是子宮內(nèi)膜新生物發(fā)生發(fā)展的早期階段的事件。本研究結(jié)果表明，p21ras染色的陽性率和強(qiáng)度都是隨著子宮內(nèi)膜病變的嚴(yán)重程度的增加而增加，即按照正常增生期內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜息肉、子宮內(nèi)膜息肉伴腺體不典型增生這個(gè)順序，陽性率逐漸增加，表明在子宮內(nèi)膜息肉病變中，ras基因已有表達(dá)，其作為一種促進(jìn)細(xì)胞增殖的原癌基因，可能提示癌變可能始于內(nèi)膜息肉，其在子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)現(xiàn)可能有積極意義。

ras基因點(diǎn)突變是人類腫瘤最常見的基因異常，Yaginuma等[2]發(fā)現(xiàn)p21ras在良性、交界性、惡性漿液性腫瘤過度表達(dá)的比例分別是0%、16%、50%，之后伴隨有p53的出現(xiàn)，p21ras和p53的表達(dá)之間呈穩(wěn)定的正相關(guān)關(guān)系，說明p21ras的過表達(dá)是腫瘤惡變的早期基因改變，這跟我們的結(jié)果也比較相近。

p53蛋白是重要的細(xì)胞生長負(fù)調(diào)節(jié)因子，p53基因突變導(dǎo)致對細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)功能喪失，使細(xì)胞異常增殖。p53基因也是重要的抑癌基因，p53蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子，通過阻止細(xì)胞復(fù)制和發(fā)動(dòng)細(xì)胞凋亡保持基因組的穩(wěn)定性，維持細(xì)胞正常生長，抑制細(xì)胞惡性增殖，對生長起負(fù)調(diào)節(jié)作用，若該基因由于突變、丟失或重排而失活，細(xì)胞可能發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變，其突變與失活在腫瘤生長與浸潤過程中具有重要作用。抑癌基因p53的突變是人類多種惡性腫瘤中較為普遍的遺傳現(xiàn)象，它的失活表現(xiàn)為突變型p53的過度表達(dá)。突變型p53蛋白不僅失去了正常的抑癌作用，而且具有促進(jìn)正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的作用。

Long等[3]應(yīng)用免疫組化方法檢測子宮內(nèi)膜癌ras基因表達(dá)產(chǎn)物p21蛋白的改變，結(jié)果增生期內(nèi)膜、腺囊型增生的子宮內(nèi)膜均無ras癌基因表達(dá)，4例不典型增生者有2例表達(dá)，11例Ⅰ級內(nèi)膜癌中有6例表達(dá)，22例Ⅱ～Ⅲ級內(nèi)膜癌中21例(95%)ras癌基因表達(dá)陽性。

我們的研究表明，在子宮內(nèi)膜息肉中即有ras癌基因p21蛋白的表達(dá)，在EMP伴腺體不典型增生的病變中表達(dá)更為明顯，提示ras癌基因蛋白可能為子宮內(nèi)膜癌變的早期事件，提示子宮內(nèi)膜息肉可能已經(jīng)為子宮內(nèi)膜癌變提供了一個(gè)有利于癌變的組織微環(huán)境，提示癌變可能開始于內(nèi)膜息肉，其對子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)現(xiàn)可能有積極意義。

[1]Schaumberg D A,Snow K K,Dana M R.The epidemic of aeanthamoeba keratit is where do we sdand[J].Cornea,1998,17(3):169-171.

[2]Yaginuma Y,Yamashita K,Kuzumaki N,et al.Ras oncogene produet p21 expression and prognosis of human ovarian tumors[J].Gyneeol Oncol,1992,46(1):45-50.

[3]long CA,Timothy J,Bnien O,et al.Ras oneogene in expression in adnocarcinoma of endometrium[J].Am J OBSTEL Gyneeol,1988,159:1512.

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.13.020

溫州市科技局科研基金資助項(xiàng)目(No Y2007A0075)

325027 溫州醫(yī)學(xué)院附屬二院病理科 (高寶輝 祁旦巳趙志光 謝麗微)