甄 攀,張萬明,王春艷

(1.河北北方學院理學院,河北張家口075000;2.河北北方學院醫(yī)學院,河北張家口075000)

吳茱萸 [Evodiaru taecarpa]又名淡茱萸、吳萸,是蕓香科植物吳茱萸接近成熟的果實,氣味芳香,有小毒,入肝、腎、脾、胃經(jīng).有溫中散寒、疏肝理氣、降逆止嘔、燥濕定痛、抑菌、驅蛔、抗血栓形成、利尿、抗腫瘤、抗缺氧、鎮(zhèn)痛、升高體溫等作用[1].

有文獻報道[2],已經(jīng)發(fā)現(xiàn)吳茱萸中含有多種化學成分,有生物堿類、檸檬苦素類、揮發(fā)油類、還含有花色甙、異戊烯黃酮、吳茱萸啶酮、脂肪酸類化合物、氨基酸類物質等.但吳茱萸中含有綠原酸,一直未見報道.我們在前期進行的色譜研究中發(fā)現(xiàn)吳茱萸中含有大量的綠原酸,并測定了綠原酸的含量[3,4].經(jīng)過廣泛的資料檢索發(fā)現(xiàn),有兩篇碩士論文[5,6]中也提到吳茱萸中含有綠原酸.但這些研究都比較膚淺,不能確證吳茱萸中含有綠原酸.我們利用色譜和光譜相結合的方法,對這一問題進行了深入的研究,證明了吳茱萸中確實含有綠原酸.

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

(1)HP Agilent 1100 Series高效液相色譜儀,YWG-C18(10μm,250 mm×4.6 mm)色譜柱,紫外檢測器,HP HPLC(3D)化學工作站.

(2)Waters 600高效液相色譜儀,Hypersil BDSC18(5μm,250 mm×4.6 mm)色譜柱,2996二極管陣列檢測器,Empower化學工作站.

綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供.

吳茱萸為市售藥材,經(jīng)河北北方學院中醫(yī)學院趙恒成老師鑒定.

乙腈為色譜純,乙醇、甲醇、磷酸為分析純,水為三次蒸餾水.

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

第一種色譜條件：HP Agilent 1100 Series高效液相色譜儀,YWG-C18(10μm,250 mm×4.6 mm)色譜柱,紫外檢測器.檢測波長327 nm,柱溫30℃,梯度洗脫,流動相和流速見表1.

表1 流動相和流速

第二種色譜條件：Waters 600高效液相色譜儀,Hypersil BDS C18(5μm,250mm×4.6mm,Thermo)色譜柱,2996二極管陣列檢測器,檢測波長327nm,柱溫30℃.流動相分別為乙腈-0.5%冰醋酸和甲醇-0.5%冰醋酸,流動相和流速見表2.

表2 流動相和流速

1.2.2 供試品制備

吳茱萸于60℃干燥,粉碎,精密稱定,置于具塞100 m l錐形瓶中,用20 m l 50%乙醇浸泡0.5 h,超聲震蕩提取40 min,過濾.殘渣再用20 m l 50%乙醇超聲提取30 min,過濾.濾液合并,定容為50.0 m l.進樣前用0.45μm濾膜濾過.綠原酸對照品.

2 實驗結果

2.1 第一種色譜條件下的色譜和光譜

在第一種色譜條件下,綠原酸組分的tR=14.4 min,吳茱萸和綠原酸對照品色譜圖見圖1,吳茱萸中綠原酸組分和綠原酸對照品光譜圖見圖2.

圖1 吳茱萸 (A)和綠原酸對照品 (B)色譜圖

圖2 吳茱萸中綠原酸成分 (A)和綠原酸對照品 (B)光譜圖

2.2 第二種色譜條件下的色譜和光譜

在第二種色譜條件下,共有四種流動相或流速,分述如下：

(1)流動相為乙腈-0.5%冰醋酸 (90∶10),流速0.8 m L/min,此條件下綠原酸組分的tR=9.7 m in,吳茱萸和綠原酸對照品色譜圖見圖3,吳茱萸中綠原酸組分和綠原酸對照品光譜圖見圖4.

圖3 吳茱萸 (A)和綠原酸對照品 (B)色譜圖 1—綠原酸

圖4 吳茱萸綠原酸成分 (A)和綠原酸對照品 (B)光譜圖

(2)流動相為甲醇-0.5%冰醋酸 (89∶11),流速0.8mL/min,此條件下綠原酸組分的tR=8.4min,吳茱萸和綠原酸對照品色譜圖見圖5,吳茱萸中綠原酸組分和綠原酸對照品的光譜圖見圖6.

圖5 吳茱萸 (A)和綠原酸對照品 (B)色譜圖 1—綠原酸

圖6 吳茱萸中綠原酸成分 (A)和綠原酸對照品 (B)光譜圖

(3)流動相為甲醇-0.5%冰醋酸 (85∶15),流速1.0m L/m in,此條件下綠原酸組分的 tR=11.4min,吳茱萸和綠原酸對照品色譜圖見圖7,吳茱萸中綠原酸組分和綠原酸對照品的光譜圖見圖8.

圖7 吳茱萸 (A)和綠原酸對照品 (B)色譜圖 1—綠原酸

圖8 吳茱萸中綠原酸成分 (A)和綠原酸對照品光譜圖

(4)流動相為甲醇-0.5%冰醋酸 (83∶17),流速1.0m L/min,此條件下綠原酸組分的 tR=14.1min,吳茱萸和綠原酸對照品色譜圖見圖9,吳茱萸中綠原酸組分和綠原酸對照品的光譜圖見圖10.

圖9 吳茱萸 (A)和綠原酸對照品 (B)色譜圖 1—綠原酸

圖10 吳茱萸中綠原酸成分 (A)和綠原酸對照品 (B)光譜圖

3 討論

實驗中使用了兩種色譜儀,分別為 HP Agilent 1100 Series和Waters 600高效液相色譜儀;兩根色譜柱分別為 YWG-C18(10μm,250mm×4.6mm)和 Hypersil BDS C18(5μm,250mm×4.6mm)色譜柱;兩種檢測器分別為紫外和2996二極管陣列檢測器;兩種化學工作站分別為Empower和 HP HPLC(3D)化學工作站;多種流動相分別為乙腈-0.4%磷酸、乙腈-0.5%冰醋酸和甲醇-0.5%冰醋酸,在甲醇-0.5%冰醋酸為流動相時又改變了多種配比或流速.在以上各種條件下得到的吳茱萸色譜圖中綠原酸成分的保留時間與綠原酸對照品的保留時間一致,峰形相似;光譜圖的形狀一致,最大波長一致,充分說明吳茱萸中含有綠原酸成分.

長期以來中草藥中化學成分的定性分析,是經(jīng)過分離純化,得到單體,再用四大光譜 (UV、IR、M S、NMR)聯(lián)合解析,確定其結構和名稱.不但需要昂貴的儀器,而且需要預先分離純化,操作繁瑣,耗費時間很長.隨著計算機水平的提高,現(xiàn)在隨色譜而建立的化學工作站功能十分強大,應充分發(fā)揮其在定性分析方面的作用.本文僅使用色譜儀,利用色譜圖和光譜圖相結合,就完成了綠原酸成分定性分析,過程簡單,儀器簡單,費用較低.

在前期對吳茱萸的研究中,偶然發(fā)現(xiàn)吳茱萸的色譜圖中有一個色譜峰的形狀和保留時間與綠原酸標準對照品的非常相近.經(jīng)過廣泛的資料檢索,沒有發(fā)現(xiàn)吳茱萸中含有綠原酸的相關報道.但僅憑色譜圖和保留時間就確定吳茱萸中含有綠原酸,顯然是不夠的.將色譜圖中相應組分的譜峰形狀、保留時間、以及其光譜圖的譜峰形狀、最大吸收波長與標準對照品的相應指標對照,應是一種簡單而實用的定性分析方法.我們利用此方法,首次確證了吳茱萸中存在綠原酸.

[1] 李時珍著,良石編譯.本草綱目 [M].赤峰：內(nèi)蒙古科學技術出版社,2008：362

[2] 張恒斌.吳茱萸化學成分及測定方法研究進展 [J].中國現(xiàn)代中藥,2008,10(11)：9-13

[3] 甄攀,張萬明,白雪梅,等.吳茱萸水溶性成分指紋圖譜的研究 [J].中國藥學雜志,2005,40(06)：411-414

[4] 張萬明,甄攀,白雪梅,等.RP-HPLC測定吳茱萸綠原酸的含量 [J].中成藥,2006,28(01)：130-132

[5] 張起輝.吳茱萸化學成分的研究 [D].沈陽：沈陽藥科大學,2006

[6] 雷培海.吳茱萸指紋圖譜的研究 [D].貴州：貴州大學,2006