杜佳新，顧玉紅，張 博，朱小紅(1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，哈爾濱市 150001;.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，哈爾濱市 150081)

1 刺五加皂苷抗腫瘤作用研究

刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms為名貴中草藥刺五加的原植物，屬五加科，別名刺拐棒，為五加科多年生落葉灌木。主產(chǎn)黑龍江小興安嶺，在吉林、遼寧、河北、山西等省也有分布。樹皮為入藥的五加皮，民間多用根及根莖。刺五加具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神、益精壯骨之功效。國(guó)內(nèi)外已將刺五加作為與人參具有相似作用的藥物應(yīng)用于臨床。自20世紀(jì)50年代以來，國(guó)內(nèi)外的研究人員對(duì)刺五加的化學(xué)成分、藥理作用等進(jìn)行了大量的研究，驗(yàn)證了刺五加的活性物質(zhì)及其良好的藥理作用，并分離得到了其中大部分有效成分?？鼓[瘤作用作為刺五加研究中一個(gè)新的結(jié)論已經(jīng)受到人們關(guān)注，為進(jìn)一步推廣其臨床應(yīng)用，現(xiàn)將刺五加的抗腫瘤研究作一綜述。

1.1 刺五加皂苷抗肝癌作用研究

呂冬霞[1]等對(duì)刺五加皂苷ASS與肝癌SMMC－7721細(xì)胞株發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及ASS抗肝癌SMMC－7221細(xì)胞的機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)經(jīng)ASS誘導(dǎo)肝癌SMMC－7721細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞體積縮小，染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核呈新月形、環(huán)狀或碎塊狀，并出現(xiàn)凋亡小體等典型凋亡形態(tài)學(xué)的改變;DNA電泳出現(xiàn)凋亡所特有的梯狀條帶。實(shí)驗(yàn)表明ASS能誘導(dǎo)肝癌SMMC－7721細(xì)胞發(fā)生凋亡，且具有劑量和時(shí)間的依賴性。結(jié)果表明，ASS能夠抑制肝癌SMMC－7721細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對(duì)指導(dǎo)臨床藥物治療肝癌具有重要的意義。馮雪梅[2]等研究了刺五加葉皂苷(ASS)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡和抑制宿主肝癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用。結(jié)果表明當(dāng)ASS劑量為0.25 mg·kg－1和 1 mg· kg－1時(shí)，抑瘤率分別為 45.43% 和72.06%，凋亡小體百分率為20.6% ±3.9%、31.1% ±1.8%。ASS組腹膜、肝、腸系膜和脾的癌轉(zhuǎn)移率顯著低于對(duì)照組。ASS有抑制人肝癌在小鼠體內(nèi)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用，其作用隨劑量增加而遞增，此作用可能與ASS促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡有關(guān)。邸雅南[3]等探討刺五加皂苷(ASS)對(duì)體外培養(yǎng)HepG2肝癌細(xì)胞凋亡的影響。采用透射電鏡及瓊脂糖凝膠電泳觀察ASS作用肝癌細(xì)胞捅亡的形態(tài)學(xué)改變和DNA電泳。電鏡觀察ASS作用肝癌細(xì)胞出現(xiàn)異染色體邊集，線粒體腫脹等捅亡改變。ASS作用肝癌細(xì)胞DNA出現(xiàn)典型梯狀改變。提示ASS促進(jìn)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞捅亡，且隨著時(shí)間的增加和劑量加大，誘發(fā)凋亡程度增高。葉炯賢[4]等研究刺五加葉皂苷(ASS)抑制宿主肝癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。通過給BABL/c小鼠腹腔內(nèi)注射Hep G2肝癌細(xì)胞，10 d后給予ASS腹腔注射，8周后處死小鼠，取瘤稱重。用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ASS對(duì)移植肝癌組織nm23－H1和p53基因蛋白表達(dá)的影響及抑瘤率，觀察ASS對(duì)肝癌細(xì)胞在小鼠腹腔生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用。結(jié)果顯示，當(dāng)ASS劑量為0.25、1.00 mg·kg－1時(shí)，抑瘤率分別為45.43%和72.06%，顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。ASS 1.00 mg·kg－1治療組的nm 23－H1陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組。結(jié)論:ASS有抑制人肝癌在小鼠體內(nèi)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移作用，其作用隨劑量增加而遞增，此作用可能與ASS促進(jìn)肝癌細(xì)胞nm23－H1基因蛋白表達(dá)有關(guān)。

1.2 刺五加皂苷抗肺癌作用研究

張曼穎[5]等研究了刺五加葉皂苷(ASS)誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。通過流式細(xì)胞儀和透射電鏡觀察ASS對(duì)Spc－A1肺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)的影響和形態(tài)改變。發(fā)現(xiàn)ASS可誘發(fā)肺癌細(xì)胞凋亡，電鏡觀察肺癌細(xì)胞呈凋亡改變，其效應(yīng)與其作用的劑量成正比。

1.3 刺五加皂苷抗胃癌作用研究

葉紅軍[6]本研究表明，Ass通過促使胃癌細(xì)胞的Ca2+內(nèi)流，誘導(dǎo)人SGC790I胃癌細(xì)胞凋亡。隨著時(shí)間的增加和劑量的加大，誘發(fā)凋凋亡作用增強(qiáng)。葉紅軍[7]研究刺五加(ASS)皂苷在體外對(duì)胃癌細(xì)胞凋的誘導(dǎo)作用，在細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入ASS誘導(dǎo)，并用維A酸(RA)作為對(duì)照藥物，用瓊脂糖凝膠電泳和透射電鏡觀察ASS和RA對(duì)7901胃癌細(xì)胞凋亡的DNA電泳和形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果表明，瓊脂糖凝腔DNA電泳顯示 RAl×10－4mmol·mL－1作用的癌細(xì)胞，因凋亡細(xì)胞較少，呈模糊梯狀改變。ASS 0.5 mg·mL－1和 1.0 mg·mL－1作用的胃癌細(xì)胞呈多個(gè)典型DNA電泳的梯壯片段，提示ASS和RA均有促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡作用;電鏡觀察ASS作用細(xì)胞24 h后，異染色質(zhì)邊集，線粒體腫脹呈圓型伴部分線粒體嵴消失。48 h后細(xì)胞膜破壞，胞內(nèi)細(xì)胞器減少，核腫脹RA作用24 h和48 h后，細(xì)胞核固縮，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)較多空泡和脂滴。結(jié)論:ASS和RA均可誘導(dǎo)7901胃癌細(xì)胞凋亡，且呈是和劑量依賴性 ASS作用于胃癌細(xì)胞可有效地介導(dǎo)靶細(xì)胞的凋亡。

2 刺五加多糖抗腫瘤作用研究

趙俊霞[8]采用MTT法檢測(cè)ASPS對(duì)小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33258染色和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)經(jīng)ASPS處理后H446細(xì)胞凋亡的形態(tài)特征及凋亡率的變化;Western印跡方法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因bax、bcl－2、p53表達(dá)的變化。MTT分析表明，ASPS作用48 h后可明顯抑制H446細(xì)胞的增殖，半數(shù)抑制濃度(IC50值)為476.36 mg·mL－1;Hoechst染色結(jié)果:H446細(xì)胞在ASPS誘導(dǎo)下出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:對(duì)照組及濃度為240、480、960 mg·mL－1藥物處理組凋亡率分別是5.02% ±0.4%、11.12% ±1.8%、19.89% ±2.5%、22.54% ±1.8%;Western印跡顯示:在ASPS的誘導(dǎo)下bax、p53的表達(dá)量提高，而bcl－2的表達(dá)量下降。研究表明，ASPS對(duì)H446細(xì)胞增殖有抑制作用，并能促進(jìn)其凋亡;ASPS通過上調(diào)bax、p53表達(dá)，下調(diào)bcl－2表達(dá)促進(jìn)H446細(xì)胞凋亡。程秀娟[9]研究表明，ASPS用最大濃度靜注1.8 g·kg－1尚不引起小鼠死亡，故毒性很低。ASPS體外實(shí)驗(yàn)，對(duì)瘤細(xì)胞無直接殺滅作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，0.34 g·kg－1對(duì)小鼠 S37、S108、HBPA 都有顯著抑制作用(P<0.01)，對(duì)L816白血病小鼠存活時(shí)間無影響，劑量增大為0.5 g·kg－1時(shí)，對(duì)HEPA反而無抑制作用。ASPS抑制動(dòng)物腫瘤時(shí)，對(duì)荷瘤動(dòng)物的脾臟較對(duì)照組顯著增大。根據(jù)以上結(jié)果，ASPA可能是通過調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能而抑制腫瘤的生長(zhǎng)。袁學(xué)千[10]用刺五加多糖亦明顯增加小鼠脾臟和腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞數(shù)目，脾臟白髓總體積和淋巴結(jié)皮質(zhì)總體積也增加。表明刺五加多糖確能使免疫器官的免疫細(xì)胞數(shù)目增加，也為刺五加多糖促進(jìn)抗體形成的作用提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)。作為免疫調(diào)節(jié)劑，刺五加多糖可促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，使之代謝活躍，功能增強(qiáng)，以此形態(tài)學(xué)改變?yōu)榛A(chǔ)，促進(jìn)了機(jī)體的免疫功能。曹廣文[11]研究表明，刺五加多糖在體內(nèi)均可促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增生，對(duì)老齡小鼠脾細(xì)胞有顯著的促增殖作用，這些新增殖的淋巴細(xì)胞中LAK前體細(xì)胞占有一定的比例，在體外經(jīng)IL－2刺激分化成LAK細(xì)胞。我們知道IL－2活化淋巴細(xì)胞的同時(shí)也刺激抑制性T細(xì)胞增殖，可抑制Ts亞群。刺五加多糖對(duì)LAK活性的作用是多方面的，有待于進(jìn)一步探討。佟麗[12]等采用毛細(xì)管柱氣相色譜法分析了刺五加多糖與S108細(xì)胞一同溫育24 h后，細(xì)胞膜磷脂和中性脂的脂肪酸組成變化，發(fā)現(xiàn)中性脂的脂肪酸組成和不飽和性不受影響，磷脂的脂肪酸組成發(fā)生明顯改變，花生四烯酸(C20;4)和豆蔻酸(C14;0)降低(P<0.05或P<0.01)，與用作陽性藥物對(duì)照的氨甲喋吟作用相似。對(duì)膜磷脂脂肪酸組成變化的意義進(jìn)行討論，認(rèn)為在刺五加多糖的抗腫瘤機(jī)制中，細(xì)胞膜磷脂生化特性的改變是重要環(huán)節(jié)。

3 黃芩刺五加共同作用研究

馬丁[13]觀察44例卵巢惡性腫瘤患者在化療間歇期服黃芩刺五加，并測(cè)定其免疫功能結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用藥后α干擾素(IFN－α)和自然殺傷細(xì)胞(NK)活性水平逐漸增高。提示黃茂刺五加具有明顯促進(jìn)產(chǎn)生內(nèi)源性IFN的作用，可對(duì)抗癌細(xì)胞和化療藥物的免疫抑制作用。采用3H－TdR摻入實(shí)驗(yàn)，測(cè)定黃茂刺五加對(duì)人卵巢癌細(xì)胞合成的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該藥能直接抑制癌細(xì)胞的合成，并隨用藥劑量的增加、用藥時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用增強(qiáng)。

4 其他研究

張敬一[14]探討刺五加對(duì)小鼠Lewis肺癌侵襲轉(zhuǎn)移干預(yù)作用的效果。發(fā)現(xiàn)刺五加有抑制腫瘤生長(zhǎng)、在實(shí)驗(yàn)性肺癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中顯示出了一定的干預(yù)作用。適于被開發(fā)為常規(guī)抗癌輔助藥物。蔡宇[15]研究超濾膜對(duì)刺五加水煎液分離藥效部位及抗腫瘤的活性。采用含藥血清方法處理培養(yǎng)的小鼠腫瘤細(xì)胞HT29、U937和A549，觀察腫瘤抑制作用同給藥量和給藥時(shí)間的關(guān)系。結(jié)果顯示，5～80 g·kg－1含藥血清對(duì)各腫瘤株細(xì)胞均有明顯抑制作用，且與劑量成正相關(guān)。藥物血清在不同時(shí)間對(duì)各腫瘤株細(xì)胞均有明顯抑制作用，與藥物劑量成正相關(guān)。提示超濾膜分離的刺五加水煎液藥效部位在體外有抗腫瘤活性。梁麗堅(jiān)[16]評(píng)價(jià)了不同提取方法所得的刺五加提取物的抗腫瘤作用，采用S180移植瘤動(dòng)物模型，對(duì)刺五加水煎液、甲醇提取液、甲醇提后再經(jīng)水提醇沉后的提取部分Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ從抑瘤率、NK細(xì)胞活性兩方面評(píng)價(jià)其抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功效。結(jié)果樣品Ⅱ的不同劑量組對(duì)S180肉瘤小鼠抑瘤率為19.47% ～35.67%，樣品Ⅲ的不同劑量組對(duì)S180肉瘤小鼠抑瘤率32.27% ～48.17%，樣品Ⅲ用藥各劑量與空白比較差異顯著，P<0.05，樣品Ⅱ和樣品Ⅲ藥物用量與抑瘤率成正相關(guān)。結(jié)論:刺五加提取物Ⅲ能體現(xiàn)明確的抗腫瘤活性功效。

5 刺五加制劑的研究進(jìn)展

蔡宇[17]等評(píng)價(jià)了膜分離刺五加水煎液不同藥效部位的體外抗腫瘤對(duì)腫瘤細(xì)胞株HT29、U937和A549生長(zhǎng)的抑制的藥效作用，結(jié)果表明抑制作用與濃度呈現(xiàn)正相關(guān)。刺五加腦靈液是臨床治療失眠多夢(mèng)、健忘、倦怠乏力、食欲不振等癥的有效藥物，為了克服其不便攜帶和儲(chǔ)存，制備工藝復(fù)雜，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制等缺點(diǎn)，杜小英[18]等研究將其劑型改變，制成刺五加腦靈泡騰片。目前已有片劑、膠囊劑、注射劑、口服液劑等劑型。王麗云[19]在刺五加片的基礎(chǔ)上，經(jīng)提取純化工藝的改進(jìn)優(yōu)化，制成滴丸劑，并按照新藥申報(bào)資料的要求，進(jìn)行了藥學(xué)及初步藥效學(xué)研究。張瀟月[20]對(duì)復(fù)方刺五加注射液的抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用及其機(jī)制研究，結(jié)果表明復(fù)方刺五加注射液具有抗心律失常作用，值得進(jìn)一步深入研究其藥理作用和應(yīng)用前景，該研究具有重要的理論意義和廣闊的臨床應(yīng)用前景。張旭東[21]等對(duì)刺五加制劑的臨床應(yīng)用進(jìn)行了總結(jié)，臨床主要用于治療脾肺氣虛、腎虛腰膝酸痛、心脾不足、失眠健忘等癥。近年來，刺五加制劑類型不斷增加，在臨床應(yīng)用上取得了可喜進(jìn)展。例如，刺五加注射液具有擴(kuò)張心腦血管、降低心肌耗氧量、改善微循環(huán)、清除氧自由基等作用，在心腦血管疾病防治方面發(fā)揮著中醫(yī)中藥獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

6 問題與展望

目前刺五加的抗癌研究主要集中在刺五加皂苷、刺五加多糖和黃芩、五加復(fù)方方面，對(duì)刺五加其他有效成分的研究尚未有深入進(jìn)展，在今后的研究中要結(jié)合臨床癥狀表現(xiàn)，開發(fā)利用更多有效成分，加強(qiáng)刺五加在抗腫瘤方面的作用。

[1]呂冬霞，杜愛林，呂學(xué)詵，等.刺五加皂甙對(duì)肝癌SMMC－7721細(xì)胞凋亡的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2005，25(7):822.

[2]馮雪梅，葉紅軍，韓登春，等.刺五加葉皂甙對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性肝癌抑制作用的研究[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，1999，19(5):298.

[3]邸雅楠，葉紅軍，王陸藜，等.刺五加皂甙對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響[J].臨床肝膽病雜志，2000，16(2):104.

[4]葉炯賢，葉紅軍，杜意平，等.刺五加葉皂苷對(duì)肝癌癌基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2000，17(5):426.

[5]張曼穎，安繼紅，李昌輝.刺五加葉皂甙誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的研究[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，28(1):37.

[6]葉紅軍，吳 遠(yuǎn)，房家智，等.刺五加皂甙對(duì)胃癌細(xì)胞膜電位和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響[J].中華消化雜志，2002，22(1):48.

[7]葉紅軍，王俊萍，劉 建.刺五加皂甙和維甲酸誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的研究[J].胃腸病學(xué)，2001，6(增刊):19.

[8]趙俊霞，閆永鑫，趙 娟，等.刺五加多糖誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞凋亡[J].細(xì)胞生物學(xué)雜志，2008，30(2):239.

[9]程秀娟，李佩珍，商曉華，等.刺五加多糖的抗腫瘤作用及免疫作用[J]. 癌癥，1984，3:191.

[10]袁學(xué)千，王淑梅，高權(quán)國(guó).刺五加多糖增強(qiáng)小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，32(4):48.

[11]曹廣文，杜 平，黃芪多糖、刺五加多糖和枸杞多糖在體內(nèi)對(duì)LAK細(xì)胞抗腫瘤活性的調(diào)節(jié)作用[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，14(1):10.

[12]佟 麗，黃添友，吳 波，等.植物多糖抗腫瘤作用與機(jī)理研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1995，7(1):5.

[13]馬 丁，蔡桂茹.黃芪刺五加治療卵巢惡性腫瘤的免疫學(xué)研究[J].同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，22(S1):45.

[14]張敬一，許順江，楊慧敏，等.刺五加抗癌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2004，18(6):422.

[15]蔡 宇，陳 冰，余紹蕾，等.刺五加提取物含藥血清抗腫瘤作用的研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2006，40(1):5.

[16]梁麗堅(jiān)，蔡 宇，梁少玲.刺五加提取物抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(7):1 187.

[17]蔡 宇，余紹蕾，楊燕霞.膜分離刺五加水煎液的體外抗腫瘤作用研究[J].四川中醫(yī)，2005，23(5):27.

[18]杜小英.刺五加腦靈泡騰片生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].碩士學(xué)位論文.天津大學(xué)，2007.

[19]王麗云.刺五加滴丸藥學(xué)及初步藥效學(xué)研究[D].碩士學(xué)位論文.山東中醫(yī)藥大學(xué)，2006.

[20]張瀟月.復(fù)方刺五加注射液的抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用及其機(jī)制研究[D].碩士學(xué)位論文.吉林大學(xué)，2007.

[21]張旭東，馬 杰，張淑慧.刺五加制劑的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2008，19(3):231.