周艷菊,張麗華,王明科,張學(xué)利,孔德新,宋佳音,李薇,李洪宇

(北華大學(xué)藥學(xué)院,吉林 132013)

中藥菟絲子在《中國(guó)藥典》2010年版中收載為旋花科植物菟絲子Cuscuta chinenisis Lam.的干燥成熟種子[1]。味辛、甘性平,歸腎經(jīng),具有補(bǔ)陽(yáng)益陰、固精縮尿、明目止瀉的功效[2]。因應(yīng)用廣泛,全國(guó)銷量頗大。但因其種子種類繁多,個(gè)頭較小,不宜與正品分辨,造成了偽品的摻雜。研究表明,性狀、顯微及理化是菟絲子的主要鑒別方法[3]。

掃描電子顯微鏡簡(jiǎn)稱掃描電鏡,其樣品制備方法簡(jiǎn)單,而且藥材不需要制作切片和染色,放大倍數(shù)可以從20連續(xù)調(diào)節(jié)到20萬(wàn)倍,景深較大,成像富立體感。近年來(lái),于掃描電鏡在立體、清晰、多觀察角度等方面均較普通光顯微鏡有不可比擬的優(yōu)越性,使得其在中藥顯微鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用越來(lái)越受到重視[4]。我們采用掃描電鏡[4-9]對(duì)菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品及抽檢樣品進(jìn)行了檢測(cè),探討其是否能達(dá)到準(zhǔn)確的鑒別目的,以期為保障臨床用藥安全有效提供依據(jù)。

1 材料和方法

菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品(吉林市食品藥品檢驗(yàn)所標(biāo)本室),由吉林省食品藥品檢驗(yàn)所專家鑒定的標(biāo)本;菟絲子市場(chǎng)抽檢樣品1、2為安國(guó)藥材市場(chǎng)抽檢樣品,經(jīng)吉林省藥品使勁檢驗(yàn)所專家鑒定：樣品1為正品菟絲子樣品,樣品2為偽品。QUANPA 200型掃描電子顯微鏡(荷蘭菲利普公司)。

分別洗去菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品及市場(chǎng)抽檢樣品表面污物后干燥,儲(chǔ)于指形管內(nèi)備用。將雙面導(dǎo)電膠帶粘在載物銅臺(tái)上,然后將其觀測(cè)樣品均勻地彈撒在膠帶上,于鍍膜機(jī)中噴鍍純金,置QUANPA 200型掃描電子顯微鏡下觀察其樣品的微觀結(jié)構(gòu)。分別選擇80、300、1000三個(gè)不同放大倍數(shù)進(jìn)行觀測(cè)和攝影,獲取其樣品的電鏡超微指紋特征。

同時(shí),分別采用性狀鑒別法[1]、薄層色譜法[1]、超微指紋鑒定法,對(duì)菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品、樣品1(正品)、樣品2(偽品)各進(jìn)行20次盲檢,進(jìn)行方法對(duì)照。

2 結(jié)果

80倍電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品整體呈天然浮石塊狀,表面有細(xì)小網(wǎng)絡(luò)紋理(圖1A);菟絲子樣品1整體呈天然浮石塊狀,表面有細(xì)小狀網(wǎng)絡(luò)紋理(圖1B);菟絲子樣品2整體呈杏核狀(圖1C),表面較平滑,無(wú)細(xì)小網(wǎng)絡(luò)紋理。

300倍電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品表面呈現(xiàn)明顯蜂窩狀紋理,并有明顯不規(guī)則突起褶皺(圖2A);菟絲子樣品1表面呈現(xiàn)明顯蜂窩狀紋理,并有明顯不規(guī)則突起褶皺(圖2B);菟絲子樣品2表面呈現(xiàn)細(xì)小的疣狀紋理,突起不明顯(圖2C)。

1000倍電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品表面呈現(xiàn)明顯的絮狀紋理,凹陷處有不規(guī)則的顆粒狀分泌物(圖3A);菟絲子樣品1表面呈現(xiàn)明顯的絮狀紋理,凹陷處有不規(guī)則的顆粒狀分泌物(圖3B);菟絲子樣品2表面較平滑,突起不明顯,呈現(xiàn)不規(guī)則疣狀紋理(圖3C)。

性狀鑒別法、薄層色譜法、超微指紋鑒定法3種方法,對(duì)菟絲子標(biāo)準(zhǔn)品、樣品1、樣品2盲檢結(jié)果表明：在菟絲子的真?zhèn)舞b別上,超微指紋特鑒定法準(zhǔn)確率明顯優(yōu)于其他方法,且重現(xiàn)性良好(表1)。

表1 超微指紋特征鑒定法與其他方法的對(duì)比觀察Table 1：The comparison of ultramicrofingerprint featuresand other methods

3 討論

通過(guò)掃描電鏡對(duì)菟絲子進(jìn)行超微指紋研究,樣品1與標(biāo)準(zhǔn)品相似度極高,可鑒定為菟絲子;樣品2與標(biāo)準(zhǔn)品明顯不同,可鑒定為偽品,與專家鑒定結(jié)果一致。結(jié)果表明菟絲子與其偽品掃描電鏡特征區(qū)別明顯,尤其是在1000倍電鏡下,菟絲子表面呈現(xiàn)明顯的絮狀紋理,且凹陷處有不規(guī)則的顆粒狀分泌物,超微顯微特征明顯,可作為該樣品的鑒別方法應(yīng)用。

目前現(xiàn)行的《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版)中對(duì)于菟絲子的鑒別為性狀鑒別,理化鑒別(薄層色譜)[1]。性狀鑒別僅憑鑒定者經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行鑒別,受人為因素影響較大,缺乏可以讓人信服的科學(xué)依據(jù);而薄層色譜法對(duì)摻雜偽品的樣品鑒別效果不理想。掃描電鏡從微觀結(jié)構(gòu)對(duì)中藥材進(jìn)行鑒定,理論依據(jù)更加充分,且準(zhǔn)確率更高。

通過(guò)掃描電鏡方法和性狀鑒別法、薄層鑒別法的對(duì)照實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明掃描電鏡方法準(zhǔn)確率明顯優(yōu)于其他2種方法,完全可以代替目前菟絲子的鑒定方法。此外,本方法操作簡(jiǎn)便易行,結(jié)果可靠,值得推廣。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社作,2010.

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[3] 朱利祥,楊令家,紀(jì)長(zhǎng)龍.一種偽品菟絲子的鑒別[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2003,14(11)：671-672.

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