張燕翔 蘇 波

摘要病理教學(xué)切片的質(zhì)量直接影響著病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)的質(zhì)量,本文簡(jiǎn)要分析病理教學(xué)切片制作的主要環(huán)節(jié)及標(biāo)準(zhǔn)化管理,以便更好的為病理教學(xué)服務(wù)。

關(guān)鍵詞教學(xué)切片制作環(huán)節(jié)質(zhì)量管理

中圖分類號(hào):G427文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

病理學(xué)是醫(yī)學(xué)教育中實(shí)踐性很強(qiáng)的一門基礎(chǔ)學(xué)科。豍觀察常規(guī)HE切片的組織學(xué)改變是病理學(xué)研究和診斷重要的基本方法之一。在病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中學(xué)生通過(guò)對(duì)病理切片的顯微鏡下觀察了解其病變特點(diǎn)、可能產(chǎn)生的臨床癥狀及疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程和機(jī)制,從而對(duì)疾病做出準(zhǔn)確的病理診斷。所以,教學(xué)切片的制作和管理是病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的重要組成部分,也直接影響病理學(xué)實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)效果?，F(xiàn)就教學(xué)切片制作過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)、注意事項(xiàng)以及切片管理做概括介紹。

1 教學(xué)切片的制作

1.1蠟塊的制作

(1)取材。教學(xué)標(biāo)本一般來(lái)自醫(yī)院手術(shù)切及尸體解剖組織,明確病理診斷后選取教學(xué)所需典型病例。取材時(shí)若條件許可,需帶有病灶周邊正常組織;若無(wú)法保證,則單獨(dú)取一小塊正常組織與病變部位共同包埋。這樣在最終制成的切片上既有病變組織,又有正常組織,便于對(duì)比觀察。取材一般厚度以0.2-0.3cm為適,含水量豐富或易脆的組織如腦、甲狀腺、癌組織等可適當(dāng)厚一點(diǎn),而脂肪組織、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應(yīng)取薄一些;淋巴結(jié)應(yīng)修掉兩側(cè)球冠,并盡量剔除周圍的脂肪組織。在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸時(shí),應(yīng)注意纖維及肌肉的走向,取材時(shí)盡可能按與纖維平行走向切取為佳。

(2)固定。新鮮標(biāo)本應(yīng)及時(shí)固定,教學(xué)標(biāo)本制作H.E切片所用固定劑為4%甲醛溶液。根據(jù)標(biāo)本體積大小不同調(diào)整固定時(shí)間,一般4-12小時(shí)或更長(zhǎng)。固定組織時(shí),應(yīng)該使用足量的固定液,多比少好,一般應(yīng)為組織體積的5—10倍,最少也不應(yīng)少于5倍。骨組織及鈣化病灶,經(jīng)過(guò)固定后,必先浸入脫鈣液(濃鹽酸10-15ml,溶于100ml生理鹽水中)脫鈣,才能進(jìn)行常規(guī)切片,如脫鈣不全則切片易碎裂并損傷切片刀刃。

(3)脫水。組織經(jīng)過(guò)取材固定后,一般經(jīng)由70%,80%,90%,95%,以至無(wú)水酒精的脫水程序,各級(jí)濃度酒精內(nèi)處理的最短時(shí)間分別為2-4小時(shí)即可達(dá)到脫水的要求。但因用于制作教學(xué)切片的組織體積一般較大較厚,要求保持液體的濃度以保證脫水的作用,最好是以兩次95%酒精,兩次100%酒精重復(fù)進(jìn)行脫水,以保證組織的水分脫凈。豎脫水時(shí)間應(yīng)視組織種類,組織塊大小,厚薄和固定劑的不同而異。

(4)透明。組織透明時(shí)間長(zhǎng)短應(yīng)根據(jù)組織的性質(zhì)而異。例如腦組織和有血塊的組織,應(yīng)縮短在二甲苯內(nèi)留置時(shí)間,而肌肉組織和胃腸組織則應(yīng)稍延長(zhǎng),最好先投入酒精和透明劑等量混合液半小時(shí),再入透明劑,并更換一次透明劑,待組織完全透明后進(jìn)行浸蠟,一般需要半小時(shí)至1小時(shí)。透明過(guò)久則會(huì)導(dǎo)致組織過(guò)度硬化變脆。

(5)浸蠟。在整個(gè)浸蠟過(guò)程中,骨、皮膚和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等致密組織需要較長(zhǎng)時(shí)間。含血多的組織,肌肉和纖維束在蠟內(nèi)易過(guò)硬而發(fā)脆,故浸蠟時(shí)間應(yīng)縮短。浸蠟可以分兩級(jí)或三級(jí)進(jìn)行,以排除透明劑,浸蠟時(shí)間1-4小時(shí)或更長(zhǎng)。

(6)包埋。組織包埋時(shí)應(yīng)保持平整,用組織的最大面包理,囊壁、管腔組織還要注意方位,應(yīng)豎直包埋。病變區(qū)域與正常區(qū)域分開(kāi)取材的組織應(yīng)間隔包埋在一起,以便于對(duì)比觀察。零碎組織也應(yīng)包埋在一起,并使之保持在同一水平面上。

1.2 切片

切片時(shí)刀口應(yīng)鋒利,防止出現(xiàn)刀痕和皺褶現(xiàn)象; 厚度一般為4-6微米,切片的要求是完整、均勻、完整。較難切的部分應(yīng)放上面,如皮膚的表皮,胃腸適的漿膜等,以減少組織的斷裂現(xiàn)象。展片水溫應(yīng)在40℃一45℃之間,水溫過(guò)高,會(huì)引起組織細(xì)胞散開(kāi),水溫過(guò)低,切片皺褶無(wú)法攤平。

1.3 染色

H.E染色的關(guān)鍵在于深淺適度,對(duì)比鮮明,蘇木素內(nèi)染色時(shí)間要根據(jù)染料的新舊、切片的類型而定,一般為5- 10min。鹽酸酒精分化后水洗必須充分,一般應(yīng)流水沖洗10-15分鐘,以防鹽酸殘留份致切片褪色并有促進(jìn)藍(lán)化作用。不可用堿性溶液促進(jìn)藍(lán)化,這樣處理切片易褪色,無(wú)法長(zhǎng)期保存。最后伊紅復(fù)染30秒。染色理想的切片顯微鏡下觀察應(yīng)是:細(xì)胞核與細(xì)胞漿應(yīng)藍(lán)紅相映,核漿對(duì)比良好,核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見(jiàn)。豏

1.4 封片

使用中性樹膠濕封切片,不可干封,以免細(xì)胞收縮、龜裂或出現(xiàn)黑色結(jié)晶樣小點(diǎn)。豐中性樹膠稀釋度應(yīng)適當(dāng),以均勻充滿蓋玻片不產(chǎn)生氣泡且樹膠不及外溢為佳。

2 教學(xué)切片的日常保存及管理

2.1教學(xué)切片的日常保存

教學(xué)切片制作完畢應(yīng)記錄制作時(shí)間、制作數(shù)量、病理診斷名稱,并統(tǒng)一編號(hào)后放入切片盒,置于切片柜中。切片柜應(yīng)保持清涼干燥,避免與化學(xué)試劑同放一室。由于(下轉(zhuǎn)第77頁(yè))(上接第70頁(yè))切片久置褪色,加上實(shí)驗(yàn)課的破損,每次使用后應(yīng)及時(shí)清理,更換褪色及破損切片,并記錄需繼續(xù)補(bǔ)充的教學(xué)切片種類,及時(shí)增補(bǔ)。

2.2切片的教學(xué)管理

教學(xué)切片主要在平常實(shí)習(xí)課中使用,其丟失與破損大多也在課堂,因此,切片的課堂管理就顯得尤為重要。筆者所在單位在上課前即向?qū)W生介紹完整的切片制作流程,告之典型標(biāo)本取得的困難,增強(qiáng)學(xué)生愛(ài)惜切片的意識(shí),同時(shí)加強(qiáng)顯微鏡規(guī)范操作的培訓(xùn),從而有效地減少了切片的損失。

病理教學(xué)切片的使用者主要是二年級(jí)的醫(yī)學(xué)生,其制作從標(biāo)本從取材到封固都有十分嚴(yán)格的要求。每一項(xiàng)處理都直接影響切片質(zhì)量,而教學(xué)切片的質(zhì)量又直接影響到整個(gè)病理學(xué)的教學(xué)質(zhì)量和水平。應(yīng)把好每一關(guān),加強(qiáng)學(xué)習(xí),通過(guò)實(shí)踐不斷探索總結(jié)、積累經(jīng)驗(yàn),以更好地為教學(xué)服務(wù)。