楊曦亮　肖玉秀

(1.武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430065；2.武漢大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430072)お

摘 要：目的：建立連錢(qián)草藥材中總黃酮成分含量的測(cè)定方法。方法：分光光度法。結(jié)果：7個(gè)湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量平均為64.78mg?g^-1，三個(gè)混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg?g^-1?？傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢(qián)草和其混淆品。結(jié)論：連錢(qián)草的總黃酮含量與其栽培方式、采收時(shí)間密切相關(guān)；多數(shù)產(chǎn)地的連錢(qián)草與其混淆品相比，總黃酮含量顯著增加，故總黃酮的含量測(cè)定可作為連錢(qián)草真?zhèn)舞b別的參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：連錢(qián)草；分光光度法；黃酮；含量測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）01-0021-03オ

連錢(qián)草Herba Glechomae，別名活血丹、銅錢(qián)草等，《中國(guó)藥典》收載為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr的干燥地上部分，具有利濕通淋、清熱解毒、散瘀消腫的功能^[1]，主治尿路感染、尿路結(jié)石、胃及十二指腸潰瘍、黃疸性肝炎、肝膽結(jié)石等癥，在治療膽結(jié)石、跌打損傷及斷肢再造方面有獨(dú)特作用^[2-3]。我國(guó)連錢(qián)草資源極為豐富，除新疆、甘肅、青海、西藏以外其它各省均有連錢(qián)草分布^[4]。本實(shí)驗(yàn)^[5-7]測(cè)定了10種不同來(lái)源連錢(qián)草藥材（7種湖北產(chǎn)地連錢(qián)草，3種連錢(qián)草的混淆品種）中總黃酮的含量，并進(jìn)行了比較分析，為連錢(qián)草藥材的質(zhì)量控制提供了評(píng)價(jià)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

UV-2101PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津）；CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)。

1.2 試藥

蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0080-9705）；亞硝酸鈉(分析純，太倉(cāng)化工二廠，批號(hào)20001201)；三氯化鋁（分析純，中國(guó)金山區(qū)興塔美興化工廠，批號(hào)990829）；氫氧化鈉（分析純，威爾昆化學(xué)試劑有限公司上海華美藥房經(jīng)銷(xiāo)，批號(hào)20020130）；連錢(qián)草樣品見(jiàn)表1。

2 方法

2.1 對(duì)照品溶液的配制

精密稱(chēng)取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0.0110g，置于100mL容量瓶中，用60mL 60%乙醇超聲溶解（容量瓶密塞），放冷，用60％乙醇定容，得到0.11mg?mL^-1蘆丁對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的配制

精密稱(chēng)取經(jīng)干燥的連錢(qián)草粉末約0.5g，置100mL具塞容器中，精密加60mL 60%乙醇，密塞，稱(chēng)重，超聲提取30min。放冷，密塞，再稱(chēng)重，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇^[7]

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品5mg，置于25mL容量瓶中，加60%乙醇約15mL，超聲使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2mg?mL^-1）。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液8mL，置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加三氯化鋁試液1mL，搖勻，放置6min，再加5%的氫氧化鈉10mL，加水至刻度，搖勻，于波長(zhǎng)200~800nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在510nm處有一最大吸收峰。精密稱(chēng)取2g連錢(qián)草粗粉，置于具塞錐形瓶中，加50mL 60%乙醇，超聲50min，過(guò)濾，取續(xù)濾液，不顯色，直接于波長(zhǎng)200~800nm范圍內(nèi)掃描；再取續(xù)濾液1mL，照對(duì)照品蘆丁一樣顯色后，于波長(zhǎng)200~800nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在504nm處有一最大吸收峰。見(jiàn)圖1。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取蘆丁對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL，置于10mL容量瓶中，分別加入60%乙醇使成7mL，精密加入5%亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，放置6min；精密加入10%三氯化鋁0.3mL，搖勻，放置6min；加入1mol/L的氫氧化鈉2mL，用60%乙醇定容，搖勻，以不加蘆丁對(duì)照品溶液其它同法操作得到的溶液作為空白對(duì)照，在504nm處測(cè)定吸光度。求得回歸方程為：C(mg?mL^-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996，n=6)；蘆丁對(duì)照品在0.01~0.07mg?mL^-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取蘆丁對(duì)照品溶液適量，配成高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度3份，分別顯色后測(cè)定吸收度。結(jié)果表明，測(cè)定方法的精密度良好（表2）。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液3.0mL，進(jìn)行顯色，每隔5min測(cè)定一次吸收度，共測(cè)定至40min，計(jì)算總黃酮的平均含量為0.0297mg?mL^-1，RSD=0.96%(n=9)，結(jié)果表明顯色后的溶液在40min內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一產(chǎn)地（湖北武漢）的連錢(qián)草粉末5份，每份約0.5g，精密稱(chēng)定，按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密量取供試品溶液0.5mL，顯色后測(cè)定吸收度，測(cè)得總黃酮的平均含量為56.67mg?g^-1，RSD=0.68%(n=5)，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

3.6 加樣回收率試驗(yàn)

取3批已知總黃酮含量的連錢(qián)草粉末（恩施）約0.1g，加入蘆丁對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，按“2.2供試品溶液配制” 項(xiàng)下的方法提取。精密量取供試品溶液1mL，按“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該測(cè)定方法準(zhǔn)確性高。

3.7 不同產(chǎn)地連錢(qián)草中總黃酮含量測(cè)定

取不同產(chǎn)地的連錢(qián)草約5g，按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密吸取供試品溶液0.5mL，按“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定不同產(chǎn)地連錢(qián)草中總黃酮的含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

從表4可知，除荊州2外，湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量均高于連錢(qián)草混淆品種的總黃酮含量；7個(gè)湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量平均為64.78mg?g^-1，三個(gè)混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg?g^-1?？傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢(qián)草和其混淆品。

兩種湖北荊州連錢(qián)草的產(chǎn)地相同，栽培方式和采收時(shí)間不同（家種，5月；野生，8月），但在7個(gè)湖北產(chǎn)地連錢(qián)草中，荊州1(92.85mg?g^-1)總黃酮含量最高，而荊州2（36.35mg?g^-1）最低。兩個(gè)采收時(shí)間不同（5月，9月）的湖北恩施野生連錢(qián)草中總黃酮含量也有較大差異。除武漢和丹江產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量比較接近外，其它湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量都有一定差異。這說(shuō)明栽培方式、采收時(shí)間和湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長(zhǎng)環(huán)境均影響連錢(qián)草的總黃酮含量。

4 結(jié)論

七種湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量差異較大。連錢(qián)草的總黃酮含量不僅與栽培方式、采收時(shí)間密切相關(guān)，而且湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)連錢(qián)草的總黃酮含量也有影響。 因此在選用連錢(qián)草時(shí)一定要注意具體產(chǎn)地和用量，以確保療效；同時(shí)要合理栽培、采收連錢(qián)草。多數(shù)產(chǎn)地的連錢(qián)草與其混淆品相比，總黃酮含量顯著增加，故總黃酮的含量測(cè)定可作為連錢(qián)草真?zhèn)舞b別的參考依據(jù)，對(duì)保證其藥材質(zhì)量、指導(dǎo)其栽培生產(chǎn)，以及相關(guān)制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制具有重要意義和應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005：117.

［2］ 曾細(xì)生.用連錢(qián)草斷指(肢)再植30例［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2004,11（2）:125.

［3］ 曹萍,褚小蘭,范崔生.金錢(qián)草類(lèi)中藥的研究概論［J］.江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，45（1）：110-113.

［4］ 宋?唐慎微.證類(lèi)本草［M］.北京：華夏出版社,1993：265.

［5］ 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.分光光度法測(cè)定連錢(qián)草中熊果酸的含量［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究,2003,3(4):268-269.

［6］ 王慶，段金慶，錢(qián)大瑋.不同產(chǎn)地連錢(qián)草中三菇酸類(lèi)及黃酮類(lèi)成分的分析與評(píng)價(jià)［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，2（1）：44-46.

［7］ 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.連錢(qián)草中總黃酮的含量測(cè)定［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2003,3(1):62-63.（責(zé)任編輯：姜付平）