王德才 鄂春華

[摘要] 建立注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉細菌內毒素檢查方法研究.參照《中國藥典》2005年版二部附錄"細菌內毒素檢查法"進行干擾試驗和結果判斷.樣品最大無干擾濃度為10mg/ml。注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉可采用細菌內毒素檢查法進行質量控制。

[關鍵詞] 注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉;細菌內毒素檢查法;凝膠法;稀釋倍數(shù);限值;干擾試驗

[中圖分類號] R978.1+1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1004-8650(2009)05-115-02

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉是一種廣譜抗菌新藥,活性強。現(xiàn)參照《中國藥典》2005年版二部附錄XIE細菌內毒素檢查法和附錄XLXF細菌內毒素檢查法應用指導原則,研究注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉中細菌內毒素試驗的干擾情況,建立其細菌內毒素檢查方法。

1試藥與儀器

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉供試品(批號:20080106,20080107,20080108。規(guī)格,1.0g/瓶,×××藥業(yè)有限公司)。細菌內毒素工作標準品(WSE,批號:2008-2。效價:180EU/支。中國藥品生物制品檢定所。鱟試劑TALA(批號:20080414,λ=0.25 EU/ml,規(guī)格:0.1ml/支,廈門鱟試劑廠);TALB(批號:20080205,λ=0.25 EU/ml,規(guī)格:0.1ml/支,湛江博康海洋生物制品有限公司);細菌內毒素檢查用水(批號:20080301,內毒素含量低于0.015 EU/ml,規(guī)格:10ml/支,上海信誼制藥廠)。超凈工作臺(蘇州凈化設備有限公司)。ZH-2型漩渦混合器(上海精科實業(yè)有限公司)。試驗所用玻璃器皿均經(jīng)250℃干烤1小時以清除可能存在的內毒素。

2方法與結果

2.1鱟試劑靈敏度復核

按《中國藥典》2005年版二部附錄XIE細菌內毒素檢查法進行。結果見表1,兩批鱟試劑的靈敏度測定值λc均在0.5λ-2.0λ之間,符合規(guī)定。

2.2供試品細菌內毒素限值(L)確定

L=K/M。式中K為按規(guī)定的給藥途徑不同,人每千克體重每小時可接受的內毒素最大劑量,注射劑的K=5EU/(kg·h)。M為人體每千克體重每小時給藥的最大劑量。參考使用說明書以頭孢哌酮鈉計。人用最大劑量為3g/(kg·h)。人體重按60kg計,M=3g/(kg·h)/60kg=50mg/(kg·h),L=K/M=5EU/(kg·h)/50mg/(kg·h)=0.1 EU/mg。所以從嚴確定為L=0.025 EU/mg(以頭孢哌酮鈉計)。

2.3最大有效稀釋倍數(shù)

供試品稀釋倍數(shù)計算;按公式MVD=CL/λ計算,其中L為細菌內毒素限值0.025 EU/mg,λ為鱟試劑的標示靈敏度,目前市售鱟試劑靈敏度在0.5-0.03 EU/ml,MVD在20.0-1.5 mg/ml之間。

2.4供試品干擾試驗

2.4.1供試品干擾試驗取供試品,加細菌內毒素檢查用水使溶解,分別制成含頭孢哌酮鈉80、40、20、10、5、2.5mg/ml的溶液(記此系列溶液為NPC),并用其分別將細菌內毒素標準品制成含0.5 EU/ml的系列濃度(記此系列溶液為PPC),用兩批鱟試劑(λ=0.25EU/ml)考察每個供試品濃度下的干擾情況,并設陰性對照和陽性對照。結果見表2。預試驗結果表明頭孢哌酮鈉在20mg/ml以下濃度時,對鱟試劑的凝集反應無增強或抑制作用。

2.4.2供試品干擾試驗根據(jù)預試驗的結果,用細菌內毒素檢查用水和10mg/ml供試品(以頭孢哌酮鈉計)分別將內毒素工作標準品制成0.5、0.25、0.125、0.0625 EU/ml的一系列濃度,分別用2個廠家的鱟試劑同時考察3批供試品每個濃度下的干擾情況,每一濃度做4管,同時作陰性對照和供試品陰性對照,結果見表3、表4,干擾試驗結果表明;注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉10mg/ml(以頭孢哌酮鈉計)對鱟試劑的凝集反應無增強或抑制作用。

3討論

TAL用于細菌內毒素的檢測具有操作簡單,靈敏度高,重現(xiàn)性好,實用性強等優(yōu)點。一種新藥是否可用細菌內毒素檢查法替代熱原檢查法進行細菌內毒素的檢測,首先要證實該樣品本身是否存在干擾因素,進行干擾試驗的目的就是要確定該品種在何種有效濃度范圍內進行細菌內毒素檢查時既可克服干擾因素,又能客觀反映其所含的細菌內毒素量是否符合規(guī)定限值。

本試驗用2個廠家的TAL對3批注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉供試品溶液進行干擾試驗,結果表明其最大不干擾濃度為10mg/ml,其內毒素限值為以頭孢哌酮鈉計每1mg含內毒素量應小于0.025 EU/mg。試驗中3批供試品進行細菌內毒素檢查結果符合規(guī)定。

因此我認為注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉可以用細菌內毒素法進行細菌內毒素檢測。

參考文獻:

[1] 中國藥典[s]二部.2005:附錄XIE

[2] 中國藥典[s]二部.2005:附錄XIXF

(收稿日期2009-03-20)