中圖分類號 R965；R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2025）06-0655-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.06.03

摘要 目的 探討當(dāng)歸補(bǔ)血湯調(diào)控中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（NETs）改善卵巢早衰（POF）大鼠骨質(zhì)疏松（OP）的機(jī)制。方法 將雌性SD大鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、骨化三醇組及當(dāng)歸補(bǔ)血湯低、中、高劑量組，每組9 只。除正常組外，其余各組大鼠于第1、8 天以6 mg/kg 的劑量腹腔注射順鉑溶液建立POF并發(fā)OP模型。從造模第5 天開始，各組大鼠灌胃相應(yīng)藥液或生理鹽水，每天1 次，連續(xù)4 周。末次給藥后，檢測各組大鼠血清中雌二醇（E2）、NETs、25-羥維生素D3[25（OH）D3]、核因子κB 受體激活蛋白配體（RANKL）、骨鈣蛋白（BGP）水平，觀察其骨組織病理學(xué)改變，并檢測其骨組織中維生素D受體（VDR）、髓過氧化物酶（MPO）、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（NE）、瓜氨酸化組蛋白H3（CitH3）、25 羥基維生素D-1α-羥化酶（CYP27B1）、1α，25-二羥維生素D3-24-羥化酶（CYP24A1）蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 與正常組相比，模型組大鼠骨組織骨小梁數(shù)量減少、變細(xì)及斷裂且連接不完整，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯受損，骨髓腔增大；血清中NETs、RANKL水平和骨組織中MPO、NE、CitH3、CYP24A1 蛋白的表達(dá)均顯著升高或上調(diào)，血清中E2、25（OH）D3、BGP水平和骨組織中VDR、CYP27B1 蛋白的表達(dá)均顯著降低或下調(diào)（P＜0.05）。與模型組相比，各藥物組大鼠骨組織病理學(xué)改變均有所恢復(fù)，多數(shù)定量指標(biāo)顯著改善（P＜0.05）。結(jié)論 當(dāng)歸補(bǔ)血湯能夠恢復(fù)POF 并發(fā)OP大鼠的E2水平，改善OP，其機(jī)制可能與上調(diào)VD水平、抑制NETs 形成有關(guān)。

關(guān)鍵詞 當(dāng)歸補(bǔ)血湯；卵巢早衰；骨質(zhì)疏松；中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)；維生素D

骨質(zhì)疏松（osteoporosis，OP）是一種因骨形成與骨吸收失衡而導(dǎo)致的代謝性疾病，表現(xiàn)為骨量減少和骨微結(jié)構(gòu)受損，可使患者骨折風(fēng)險增加[1]。卵巢早衰（prematureovarian failure，POF）是指女性在40 歲前卵巢功能異常衰退，主要特征是雌激素水平顯著降低而促性腺激素水平異常升高，表現(xiàn)為閉經(jīng)、不孕等癥狀，嚴(yán)重影響女性生育和整體健康[2]。研究指出，卵巢功能衰退引起的雌激素水平顯著下降會導(dǎo)致骨形成與骨吸收平衡失調(diào)，加速骨質(zhì)受損和骨量流失，促進(jìn)OP的發(fā)生發(fā)展[3]；此外，炎癥反應(yīng)也是OP 的重要致病因素之一，可通過影響骨骼系統(tǒng)來干擾成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞之間的平衡，從而導(dǎo)致骨量流失[4]。中性粒細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中會釋放一種特殊的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，即中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophil extracellulartraps，NETs），其由DNA、組蛋白、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）和中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（neutrophilelastase，NE）等成分構(gòu)成，能夠捕獲并消滅病原微生物，是先天性免疫系統(tǒng)的重要胞外防御屏障[5]。然而，若NETs 過度活化或長期存在則可能會對機(jī)體產(chǎn)生負(fù)面影響，上述過程伴隨大量炎癥介質(zhì)的釋放，可激活破骨細(xì)胞、增加骨吸收，從而破壞骨代謝平衡，導(dǎo)致骨量流失[4，6]。維生素D（vitamin D，VD）作為關(guān)鍵的免疫調(diào)節(jié)因子，不僅可通過促進(jìn)鈣、磷吸收來維持骨骼健康，而且能通過降低MPO、NE、瓜氨酸化組蛋白H3（citrullinatedhistone H3，CitH3）水平來抑制NETs 生成，在多種炎癥性疾病的治療中具有重要作用[7－8]。

當(dāng)歸補(bǔ)血湯源于李東垣的《內(nèi)外傷辨惑論》，由當(dāng)歸、黃芪組方而成，具有補(bǔ)氣生血之效。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸補(bǔ)血湯能有效降低POF大鼠血清促卵泡激素和促黃體生成素水平，提升血清雌二醇（estradiol，E2）和抗米勒管激素水平；同時，該方還可恢復(fù)OP 大鼠骨小梁結(jié)構(gòu)，并通過抑制VD限速酶1α，25-二羥維生素D3-24-羥化酶（又稱CYP24A1）的表達(dá)、維持體內(nèi)VD水平來降低骨鈣蛋白（osteocalcin，又稱BGP）的表達(dá)，從而改善POF和OP[9－10]?；诖耍狙芯客ㄟ^建立POF并發(fā)OP大鼠模型，擬從VD調(diào)控NETs 的角度出發(fā)，探討當(dāng)歸補(bǔ)血湯改善POF 大鼠OP的作用機(jī)制，以期為當(dāng)歸補(bǔ)血湯的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括BX53 型正置顯微鏡（日本Olympus 公司）、Multiskan MK3 型全自動酶標(biāo)儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）、DYCZ-24DN 型垂直電泳槽（北京六一生物科技有限公司）、ChemiDoc 型化學(xué)發(fā)光凝膠成像儀（美國Bio-Rad 公司）、RM 2016 型轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)（德國Leica公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

當(dāng)歸、黃芪飲片（產(chǎn)地均為甘肅，批號分別為20230301、20231101）均購自北京同仁堂貴陽藥店有限公司，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院方劑學(xué)教研室蔣志濱副教授鑒定均為真品。

骨化三醇軟膠囊（批號2110051，規(guī)格0.25 μg）購自青島正大制藥有限公司；順鉑對照品（批號HY-17394，純度99.70%）購自美國MCE 公司；免疫組化顯色試劑盒（批號K5007）購自美國Agilent 公司；E2、核因子κB受體激活蛋白配體（receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL）、NETs、25-羥維生素D3[25（OH）D3]、BGP酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號分別為JM-01981R1、JM-01911R1、JM-10980R1、JM-01918R1、JM-02028R1）均購自江蘇晶美生物科技有限公司；鼠抗維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）抗體、兔抗MPO抗體、兔抗β-肌動蛋白（β-actin）抗體（批號分別為67192-1-Ig、22225-1-AP、20536-1-AP）均購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；兔抗25- 羥基維生素D-1α - 羥化酶（又稱CYP27B1）抗體、兔抗CYP24A1 抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔免疫球蛋白G 二抗（批號分別為A1716、A1805、AS014）均購自武漢愛博泰克生物科技有限公司；兔抗NE 抗體（批號AF0010）購自美國Affinity公司；兔抗CitH3 抗體（批號NB100-57135）購自美國Novus Biologicals 公司；HRP 標(biāo)記的羊抗鼠免疫球蛋白G 二抗（批號BS12478）購自美國Bioworld Technology公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

SPF 級雌性SD大鼠54 只，體重190～210 g，8～9 周齡，購自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司[動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2019-0010]。大鼠均飼養(yǎng)于溫度、濕度適宜的動物房內(nèi)，自由攝食、飲水。本實(shí)驗(yàn)已獲得貴州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理審查委員會批準(zhǔn)（倫理號20230100）。

2 方法

2.1 藥液的配制

根據(jù)《內(nèi)外傷辨惑論》原文記載的組方藥材用量“黃芪一兩，當(dāng)歸二錢”（即兩者質(zhì)量比5∶1）稱取黃芪60 g、當(dāng)歸12 g，混合，以水浸泡1 h 后，煎煮30 min×2 次；合并煎煮液，濃縮，得質(zhì)量濃度為0.72 g/mL（以生藥量計(jì)）的當(dāng)歸補(bǔ)血湯藥液。取骨化三醇膠囊內(nèi)容物，以橄欖油為溶劑，制得質(zhì)量濃度為0.025 μg/mL 的骨化三醇藥液，備用。取順鉑對照品適量，以生理鹽水為溶劑，制得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的順鉑溶液，備用。

2.2 分組、造模與給藥

將所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d 后隨機(jī)分為正常組、模型組、骨化三醇組（0.1 μg/kg）及當(dāng)歸補(bǔ)血湯低、中、高劑量組（1.8、3.6、7.2 g/kg，以生藥量計(jì)，劑量參考本課題組前期研究設(shè)置[11]），每組9 只。除正常組外，其余各組大鼠均參考相關(guān)文獻(xiàn)[12]的方法于第1、8 天以6 mg/kg 的劑量腹腔注射順鉑溶液以建立POF并發(fā)OP模型。從造模（順鉑首次注射時，下同）第5 天開始，給予骨化三醇組及當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組大鼠灌胃相應(yīng)藥液，正常組及模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水，每天1 次，連續(xù)4 周。

2.3 大鼠動情周期變化觀察

自造模第1 天起，每組隨機(jī)選取3 只大鼠進(jìn)行標(biāo)記，于每天上午9 點(diǎn)進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片檢查，觀察大鼠在整個造模期間的動情周期變化：抓取大鼠，暴露陰道，輕柔地將經(jīng)生理鹽水浸潤的無菌棉簽插入其陰道，旋轉(zhuǎn)2～3 圈以刮取陰道分泌物；將分泌物均勻涂抹在載玻片上，用0.1% 亞甲基藍(lán)染色液染色，隨后使用顯微鏡觀察并拍照。根據(jù)觀察到的細(xì)胞類型和數(shù)量，判斷大鼠所處的動情階段——若存在有核上皮細(xì)胞且偶見無核角化細(xì)胞，記為動情前期；若主要為無核角化細(xì)胞，記為動情期；若同時可見白細(xì)胞、無核角化細(xì)胞、有核上皮細(xì)胞，記為動情后期；若為大量白細(xì)胞伴少量角化細(xì)胞，記為動情間期[13]。如果大鼠在整個觀察期內(nèi)持續(xù)處于某一時期，則判斷其動情周期出現(xiàn)了紊亂，提示POF 模型建立成功。

2.4 標(biāo)本采集與處理

末次給藥后，所有大鼠禁食、不禁水24 h，腹腔注射3% 戊巴比妥鈉（30 mg/kg）進(jìn)行麻醉，從腹主動脈采集血樣，靜置2 h 后以3 000 r/min 離心15 min，得到上層血清，分裝后于－80 ℃下保存，備用。采血后，以頸椎脫臼法將大鼠處死，迅速收集其兩側(cè)股骨并剝離軟組織。將左側(cè)股骨組織放入4% 多聚甲醛溶液中固定保存，右側(cè)股骨組織則于－80 ℃下保存，備用。

2.5 大鼠血清E2、NETs、25（OH）D3、RANKL、BGP 水平檢測

取“2.4”項(xiàng)下凍存的各組大鼠（每組隨機(jī)選取6 只）的血清樣品，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書操作，采用ELISA 法以酶標(biāo)儀檢測其血清E2、NETs、25（OH）D3、RANKL、BGP水平。

2.6 大鼠骨組織病理變化觀察

取“2.4”項(xiàng)下經(jīng)4% 多聚甲醛溶液固定的各組大鼠（每組隨機(jī)選取3 只）股骨組織樣本，放入15% 乙二胺四乙酸脫鈣液中行脫鈣處理；確保骨質(zhì)軟化后，進(jìn)行梯度乙醇脫水、常規(guī)石蠟包埋后切片；取切片，依次進(jìn)行蘇木精、伊紅染色，再經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，以中性樹膠封片，使用顯微鏡觀察其骨組織病理變化。

2.7 大鼠骨組織中VDR、MPO、NE、CitH3 蛋白陽性表達(dá)檢測

采用免疫組化法檢測。取“2.6”項(xiàng)下各組大鼠的骨組織切片，經(jīng)梯度乙醇脫水后，滴加0.01 mmol/L Tris-乙二胺四乙酸修復(fù)液（pH9.0），孵育15 min；以磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗后，滴加3% 過氧化氫以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，于室溫下靜置15 min；以PBS再次漂洗后，加入山羊血清于37 ℃下孵育30 min；滴加VDR、MPO、NE、CitH3 一抗（稀釋比例均為1∶100），在4 ℃下孵育過夜；以PBS 漂洗后，滴加適量二抗（即免疫組化顯色試劑中的A液），室溫孵育30 min；以PBS 漂洗后，滴加DAB顯色液顯色，再以蘇木精復(fù)染10 s，用梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，以中性樹膠封片，使用顯微鏡觀察并采集圖像。采用Image-Pro Plus 6.0 軟件對上述蛋白陽性表達(dá)區(qū)域（呈黃褐色或棕黃色）進(jìn)行光密度分析，用以反映其表達(dá)水平。

2.8 大鼠骨組織中VDR、CYP27B1、CYP24A1、MPO、NE蛋白表達(dá)檢測

采用Western blot 法檢測。取“2.4”項(xiàng)下凍存的各組大鼠（每組隨機(jī)選取3 只）股骨組織樣本，研磨，置于含有組織蛋白裂解液、蛋白酶抑制劑的1.5 mL 微量離心管中，勻漿，在冰上裂解30 min，再以14 000 r/min 離心15min，收集上清液，并使用BCA 法測定蛋白濃度。向蛋白樣品中加入5×loading buffer 適量，在95 ℃下加熱15min 使蛋白變性。取適量變性蛋白，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離后轉(zhuǎn)膜，用5% 牛血清白蛋白溶液封閉1 h；棄去封閉液，加入VDR、CYP27B1、CYP24A1、MPO、NE、β-actin 一抗（稀釋比例分別為1∶5 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶5 000、1∶2 000、1∶5 000），在4 ℃下孵育過夜；以TBST 緩沖液洗膜后，加入相應(yīng)二抗[稀釋比例分別為1∶2 000（羊抗兔）、1∶5 000（羊抗鼠）]，在室溫下孵育1 h；以TBST 緩沖液洗膜后，使用化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行顯影，并置于化學(xué)發(fā)光凝膠成像儀下成像。使用Image J 軟件分析蛋白條帶的灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）的灰度值比值作為目的蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果以正常組為參照進(jìn)行歸一化處理。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 8.0.2 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對于符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用x±s 表示，多組間比較采用單因素方差分析（方差齊）或Welch 方差分析（方差不齊），進(jìn)一步兩兩比較采用Tukey’s 事后檢驗(yàn)（方差齊）或Tamhane’s T2 事后檢驗(yàn)（方差不齊）。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 大鼠動情周期變化

正常組大鼠動情前期、動情期、動情后期、動情間期循環(huán)可見，動情周期正常（圖1）。與正常組比較，其余各組大鼠動情周期紊亂，多數(shù)處于動情前期，甚至未見完整的動情周期，表明大鼠卵巢受損，其功能受到抑制，提示POF模型復(fù)制成功。

3.2 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對模型大鼠血清E2、NETs、25（OH）D3、RANKL、BGP水平的影響

與正常組相比，模型組大鼠血清NETs、RANKL 水平均顯著升高，而E2、25（OH）D3、BGP 水平均顯著降低（P＜0.05）。與模型組相比，骨化三醇組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組大鼠血清NETs 水平以及骨化三醇組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組大鼠血清RANKL水平均顯著降低，骨化三醇組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組大鼠血清E2、25（OH）D3、BGP水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

3.3 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對模型大鼠骨組織病理特征的影響

正常組大鼠骨組織結(jié)構(gòu)清晰，骨小梁排列緊密，骨干部位骨組織完整、連續(xù)，骨髓腔內(nèi)可見豐富的骨髓細(xì)胞。相比之下，模型組大鼠骨組織內(nèi)可見骨小梁數(shù)量減少、變細(xì)、斷裂且連接不完整；網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯受損，骨髓腔增大且融合明顯，并伴有脂肪細(xì)胞增多。與模型組相比，骨化三醇組和當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組大鼠骨組織的上述病理改變均有不同程度恢復(fù)。結(jié)果見圖2。

3.4 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對模型大鼠骨組織中VDR、MPO、NE、CitH3蛋白陽性表達(dá)的影響

與正常組相比，模型組大鼠骨組織中VDR蛋白陽性表達(dá)顯著減少，MPO、NE、CitH3 蛋白陽性表達(dá)顯著增加（P＜0.05）。與模型組相比，骨化三醇組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組大鼠骨組織中VDR 蛋白陽性表達(dá)均顯著增加，MPO、NE、CitH3 蛋白陽性表達(dá)均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見圖3（以VDR蛋白為例）、表2。

3.5 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對模型大鼠骨組織中VDR、CYP27B1、CYP24A1、MPO、NE蛋白表達(dá)的影響

與正常組相比，模型組大鼠骨組織中VDR、CYP27B1 蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)，而CYP24A1、MPO、NE 蛋白的表達(dá)則顯著上調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，骨化三醇組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組大鼠骨組織中VDR、CYP27B1 蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)，而CYP24A1、MPO、NE 蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.05）。結(jié)果見圖4、表3。

4 討論

破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收和成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成是骨代謝的基本過程，正常狀態(tài)下兩者保持著動態(tài)平衡的狀態(tài)。POF具有低雌激素水平的特征，雌激素水平異常降低可促使骨細(xì)胞凋亡，凋亡的骨細(xì)胞可引起RANKL表達(dá)上調(diào)，從而使破骨細(xì)胞活性有所增強(qiáng)，而成骨細(xì)胞功能受到抑制，導(dǎo)致骨吸收大于骨形成，最終引發(fā)骨量流失[14－15]。BGP由成骨細(xì)胞合成后釋放入血，其水平高低反映了成骨細(xì)胞的活動狀態(tài)與骨更新的速率[16]。研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯能有效調(diào)節(jié)體內(nèi)骨代謝平衡，修復(fù)骨小梁破碎情況，對OP 具有顯著的改善作用[17]。本研究通過觀察大鼠骨組織切片發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，模型組大鼠骨小梁數(shù)量減少，甚至變細(xì)、斷裂，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯受損，骨髓腔增大且融合明顯，符合OP的經(jīng)典病理表現(xiàn)；用骨化三醇及當(dāng)歸補(bǔ)血湯干預(yù)后，大鼠骨組織中骨小梁數(shù)量增多、結(jié)構(gòu)完整，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯恢復(fù)，表明骨化三醇和當(dāng)歸補(bǔ)血湯對OP 均有改善作用。此外，低、中、高劑量當(dāng)歸補(bǔ)血湯均能顯著升高模型組大鼠血清E2和BGP水平，并且高劑量當(dāng)歸補(bǔ)血湯能顯著降低血清RANKL水平，提示其對OP的改善作用可能是通過恢復(fù)雌激素水平，調(diào)節(jié)RANKL介導(dǎo)的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化，加速骨形成而實(shí)現(xiàn)的。然而，低、中劑量當(dāng)歸補(bǔ)血湯對RANKL水平的影響并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故其量效關(guān)系尚有待進(jìn)一步探索。

炎癥是引起OP 的重要因素之一，與骨生成和骨吸收失衡密切相關(guān)[5]。NETs 是中性粒細(xì)胞受到炎癥刺激時所釋放的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，依賴肽?；彼崦搧啺泵?（peptidylarginine deiminase 4，PAD4）活化及組蛋白H3瓜氨酸化形成[18]。其中，組蛋白H3 瓜氨酸化的產(chǎn)物CitH3 是NETs 的標(biāo)志物之一，可參與調(diào)節(jié)炎癥的發(fā)生及嚴(yán)重程度[18]。研究指出，NETs 可顯著抑制RANKL介導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化，從而參與骨穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)[19]；而使用PAD4 抑制劑則可顯著減少NETs 的形成，進(jìn)而減弱RANKL 誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞生成和骨侵蝕[20]。研究表明，NETs 的主要成分MPO可通過調(diào)節(jié)活性氧水平來抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收，而敲除MPO編碼基因則可導(dǎo)致小鼠OP 表型增加、骨吸收增強(qiáng)[21]；NE 可通過降解骨保護(hù)素來促進(jìn)由VD3誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化，參與炎癥部位破骨細(xì)胞的生成和骨吸收[22]。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清NETs 水平及骨組織中CitH3、MPO、NE蛋白的表達(dá)水平均顯著高于正常組；經(jīng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯干預(yù)后，上述指標(biāo)的表達(dá)受到顯著抑制，提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯均能夠減少NETs 形成，這可能是該方改善OP的潛在機(jī)制。

VD是一種脂溶性類固醇激素，有VD2和VD3兩種主要形式。人體所需的VD3主要借助紫外線照射在皮膚內(nèi)合成，在體內(nèi)經(jīng)25-羥化酶羥化為25（OH）D3，后經(jīng)CYP27B1 作用合成為活性形式的1，25-二羥維生素D3，后者通過結(jié)合靶器官中的VDR 來發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)[23]。血清25（OH）D3水平是評價體內(nèi)VD水平的主要指標(biāo)，已被證實(shí)其可促進(jìn)鈣鹽沉積、骨小梁再生，其水平降低可導(dǎo)致骨質(zhì)中硫酸鹽、碳酸鹽沉積減少，從而誘發(fā)骨量流失[24]。研究指出，OP 患者普遍處于低25（OH）D3狀態(tài)，補(bǔ)充25（OH）D3能夠有效提升骨密度，具有良好的臨床應(yīng)用效果[25]。CYP24A1 編碼基因是對1，25-二羥維生素D3轉(zhuǎn)錄反應(yīng)最強(qiáng)的基因，參與1，25-二羥維生素D3的代謝失活，從而維持1，25-二羥維生素D3 的生理水平[26]。本研究結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組大鼠血清25（OH）D3水平及骨組織中VDR、CYP27B1 蛋白表達(dá)水平顯著降低，CYP24A1 蛋白表達(dá)水平顯著上升；經(jīng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯干預(yù)后，大鼠血清25（OH）D3水平及骨組織中VDR、CYP27B1 蛋白表達(dá)水平均顯著升高，而CYP24A1 蛋白表達(dá)水平顯著降低，表明該方具有調(diào)控VD表達(dá)的作用。

綜上所述，當(dāng)歸補(bǔ)血湯能夠恢復(fù)POF 并發(fā)OP 大鼠的E2水平，改善OP，其機(jī)制可能與上調(diào)VD 水平、抑制NETs 形成有關(guān)。

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（收稿日期：2024-07-29 修回日期：2024-11-15）

（編輯：張?jiān)拢?/p>