摘要：目的" 對(duì)兒童呼吸道大腸埃希菌感染的耐藥性及產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析。方法" 選擇2022年6月-2024年5月興國縣婦幼保健院收治的102例呼吸道感染患兒作為研究對(duì)象，將患者痰液標(biāo)本采集送檢，開展藥敏試驗(yàn)以及細(xì)菌鑒定，針對(duì)大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株進(jìn)行檢測和篩選，根據(jù)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌檢出情況分為產(chǎn)ESBLs組與非產(chǎn)ESBLs組。統(tǒng)計(jì)呼吸道感染患兒病原菌檢出數(shù)量和種類，分析分離出的大腸埃希菌耐藥情況，統(tǒng)計(jì)大腸埃希菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測情況，比較產(chǎn)ESBLs組與非產(chǎn)ESBLs組對(duì)常用抗生素的耐藥性，并對(duì)兒童呼吸道大腸埃希菌感染的耐藥性及產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析。結(jié)果" 共分離出病原菌102株：其中77株為革蘭陰性菌（75.49%），25株為革蘭陽性菌（24.51%）。革蘭陰性菌中占比前3位為肺炎克雷伯菌（22.55%）、大腸埃希菌（20.59%）、銅綠假單胞菌（11.76%）。革蘭陽性菌中占比前3位為金黃色葡萄球菌（13.73%）、肺炎鏈球菌（6.86%）、腸球菌（2.94%）。分離出的大腸埃希菌耐藥率大于60.00%的前3位為氨芐西林（90.48%）、氨芐西林-舒巴坦（85.71%）、復(fù)方新諾明（76.19%）。對(duì)絕大多數(shù)藥物來說，非產(chǎn)ESBLs菌株的耐藥率低于產(chǎn)ESBLs菌株（Plt;0.05）。單因素分析顯示，年齡、三代頭孢使用、侵襲性操作是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的危險(xiǎn)因素（Plt;0.05）;多因素Logistic分析顯示，年齡lt;3歲、有侵入性操作和三代頭孢使用≥3 d是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（Plt;0.05）。結(jié)論" 大腸埃希菌是兒童呼吸道的主要致病病原菌，其耐藥的重要原因之一為產(chǎn)ESBLs，年齡lt;3歲、有侵入性操作和三代頭孢使用≥3 d是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此抗菌藥物的選用要根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果合理選擇。

關(guān)鍵詞：兒童;呼吸道感染;大腸埃希菌感染;耐藥性;產(chǎn)ESBLs

中圖分類號(hào)：R378.2+1" " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.24.027

文章編號(hào)：1006-1959（2024）24-0099-05

Study on Drug Resistance of Escherichia Coli Infection in Respiratory Tract of Children"and Risk Factors of ESBLs-producing Escherichia Coli Infection

LUO Huajun

（Clinical LaboratoryDepartment of Xingguo County Maternal and Child Health Hospital，Xingguo 342400，Jiangxi，China）

Abstract：Objective" To analyze the drug resistance of Escherichia coli infection in children's respiratory tract and the risk factors of extended-spectrum β-lactamase （ESBLs）-producing Escherichia coli infection.Methods" A total of 102 children with respiratory tract infection admitted to Xingguo County Maternal and Child Health Hospital from June 2022 to May 2024 were selected as the research objects. The sputum samples of the patients were collected and sent for examination， and drug sensitivity test and bacterial identification were carried out. ESBLs-producing strains of Escherichia coli were detected and screened. According to the detection of ESBLs-producing Escherichia coli， they were divided into ESBLs-producing group and non-ESBLs-producing group. The number and types of pathogenic bacteria detected in children with respiratory tract infection were counted， the drug resistance of isolated Escherichia coli was analyzed， the detection of extended-spectrum β-lactamase produced by Escherichia coli was counted， the drug resistance of ESBLs-producing group and non-ESBLs-producing group to commonly used antibiotics was compared， and the drug resistance of Escherichia coli infection in children with respiratory tract infection and the risk factors of ESBLs-producing Escherichia coli infection were analyzed.Results" A total of 102 strains of pathogenic bacteria were isolated： 77 strains were Gram-negative bacteria（75.49%）， 25 strains were Gram-positive bacteria（24.51%）. The top three Gram-negative bacteria were Klebsiella pneumoniae （22.55%）， Escherichia coli （20.59%） and Pseudomonas aeruginosa （11.76%）. The top three Gram-positive bacteria were Staphylococcus aureus （13.73%）， Streptococcus pneumoniae （6.86%） and Enterococcus （2.94%）. The top three resistance rates of Escherichia coli isolated were ampicillin （90.48%）， ampicillin-sulbactam （85.71%）， and cotrimoxazole （76.19%）. For most drugs， the resistance rate of non-ESBLs-producing strains was lower than that of ESBLs-producing strains （Plt;0.05）. Univariate analysis showed that age， third-generation cephalosporin use， and invasive operation were risk factors for ESBLs-producing Escherichia coli infection （Plt;0.05）. Multivariate Logistic analysis showed that age lt;3 years old， invasive operation and third-generation cephalosporin use ≥3 days were independent risk factors for ESBLs-producing Escherichia coli infection （Plt;0.05）.Conclusion" Escherichia coli is the main pathogenic bacteria in children's respiratory tract. One of the important reasons for its drug resistance is ESBLs production. Age lt;3 years old， invasive operation and third-generation cephalosporin use ≥3 days are independent risk factors for ESBLs-producing Escherichia coli infection. Therefore， the selection of antibiotics should be based on the results of drug sensitivity test.

Key words：Children;Respiratory tract infection;Escherichia coli infection;Drug resistance;ESBLs-producing

兒童呼吸道感染是臨床比較常見的疾病，其中分為上、下呼吸道感染，比較常見的兒童感冒是上呼吸道感染，其表現(xiàn)是喉嚨痛、咳嗽、流鼻涕、打噴嚏，還伴隨著發(fā)燒的癥狀;而下呼吸道感染主要是肺炎、支氣管炎、氣管炎[1]。若上呼吸道感染無法及時(shí)控制，極易發(fā)展成下呼吸道感染。因此，兒童上呼吸道感染需及時(shí)治療，避免發(fā)展成下呼吸道急性感染，嚴(yán)重情況還會(huì)導(dǎo)致兒童死亡[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[3]，全球中有400萬兒童死于急性呼吸道感染，其中有1/2的兒童年齡在5歲以下。因此，了解兒童呼吸道感染常見的致病菌對(duì)于臨床預(yù)后十分重要[4]。隨著抗生素的應(yīng)用不斷增加，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）菌株也隨之增加，其高耐藥性更易在醫(yī)院傳播，甚至造成流行，增加治療難度，嚴(yán)重時(shí)可危及患者生命安全[5，6]。在產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）細(xì)菌中，主要以大腸埃希菌為主，醫(yī)院產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌檢出率及感染率占比日益增多，成為居民死亡的重要原因[7]。同時(shí)，ESBLs能在菌株間傳遞等特性，大幅提高醫(yī)院感染控制難度。本研究選擇2022年6月-2024年5月興國縣婦幼保健院收治的102例呼吸道感染患兒作為研究對(duì)象，旨在明確兒童呼吸道大腸埃希菌感染的耐藥性及產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染危險(xiǎn)因素，進(jìn)而為臨床制定預(yù)防措施、合理使用抗菌藥物提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 選擇2022年6月-2024年5月興國縣婦幼保健院收治的102例呼吸道感染患兒作為研究對(duì)象，其中產(chǎn)ESBLs菌株9株，非產(chǎn)ESBLs菌株11株。所有患兒家長知曉研究內(nèi)容且已簽署知情同意書。

1.2方法" 取所有患兒下呼吸道分泌物，分別進(jìn)行細(xì)菌鑒定、藥敏試驗(yàn)和產(chǎn)ESBLs檢測。在進(jìn)行菌落分離培養(yǎng)時(shí)，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，使用專業(yè)的分析儀器及相應(yīng)的鑒定卡片來確定菌株種類;抗生素敏感性檢測則通過紙片擴(kuò)散法進(jìn)行，本研究所使用的敏感性測試紙片均來源于同一家生產(chǎn)商的同一試劑。針對(duì)ESBLs的檢測，需從隔夜培養(yǎng)的菌株中選取菌落制備成菌懸液，將20 μl菌懸液加入5 ml的LB肉湯中，在35 ℃的恒溫?fù)u床（轉(zhuǎn)速200 r/min）中孵化6 h。孵化完畢后，將5 ml菌液以4000 r/min在4 ℃下離心20 min，并丟棄上清液。將沉淀物重新懸浮于0.75 ml的0.01 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH值為7.0）中，充分混勻后，在-80 ℃條件下反復(fù)凍融5次，接著在14 000 r/min、4 ℃的條件下離心2 h，收集上清液并在MH瓊脂平板上進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)，若結(jié)果為陰性，則將樣本存放于-20 ℃。對(duì)于ESBLs的分析，使用30 μg頭孢噻肟紙片替代頭孢西丁，并將36 μl酶粗提液與4 μl 10 μmmol/L的鄰氯西林混合液代替原有的40 μl酶粗提液，余下的步驟不變。如果在狹縫與抑菌圈交界處觀察到擴(kuò)大的長菌區(qū)域，則判定為三維試驗(yàn)陽性，表明菌株產(chǎn)生ESBLs。

1.3觀察指標(biāo)" ①統(tǒng)計(jì)呼吸道感染患兒病原菌檢出數(shù)量和種類，將其作為判斷引起呼吸道感染病原菌的依據(jù)。②分離出的大腸埃希菌耐藥情況。③統(tǒng)計(jì)大腸埃希菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測情況，根據(jù)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌檢出情況分為產(chǎn)ESBLs組與非產(chǎn)ESBLs組，對(duì)比兩組對(duì)常用抗生素的耐藥性。④危險(xiǎn)因素分析：查閱兩組資料，包括性別、年齡、基礎(chǔ)疾病（主要有先天性心臟病、營養(yǎng)不良、佝僂病，腦發(fā)育不良，先天性喉軟骨發(fā)育不良等），侵襲性操作（包括氣管鏡檢查，吸痰，霧化吸入等治療情況）以及近期抗生素尤其是頭孢三代的使用情況等，對(duì)兒童呼吸道大腸埃希菌感染的耐藥性及產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的可能危險(xiǎn)因素進(jìn)行單因素和多因素Logistic回歸分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。使用多變量Logistic回歸分析確定影響兒童呼吸道大腸埃希菌感染的耐藥性及產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的危險(xiǎn)因素。Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1病原菌分布情況" 在送檢的102份痰液標(biāo)本中，共分離出病原菌102株：其中77株為革蘭陰性菌，占75.49%;25株為革蘭陽性菌，占24.51%。革蘭陰性菌、革蘭陽性菌種類見表1。

2.2大腸埃希菌耐藥情況分析" 從分離出的21株大腸埃希菌來看，耐藥率大于60.00%的藥品見表2。

2.3產(chǎn)ESBLs組與非產(chǎn)ESBLs組菌株耐藥率比較" 產(chǎn)ESBLs組對(duì)頭孢呋辛、氨芐西林完全耐藥，非產(chǎn)ESBLs菌株耐率相對(duì)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）;產(chǎn)ESBLs組對(duì)氨芐西林-舒巴坦、復(fù)方新諾明、頭孢他啶、環(huán)丙沙星、哌拉西林、頭孢唑林、慶大霉素、頭孢噻肟、左氧氟沙星的耐藥率均接近90%，非產(chǎn)ESBLs菌株耐率則相對(duì)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。兩組對(duì)哌拉西林-他唑巴坦、阿米卡星來的耐藥率均低于10%，兩組對(duì)亞胺培南均完全敏感，對(duì)絕大多數(shù)藥物來說，非產(chǎn)ESBLs組的耐藥率低于產(chǎn)ESBLs組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），見表3。

2.4危險(xiǎn)因素分析" 單因素分析顯示，年齡、三代頭孢使用、侵襲性操作是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的危險(xiǎn)因素，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），見表4。多因素Logistic分析顯示，年齡lt;3歲、有侵入性操作和三代頭孢使用≥3 d是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（Plt;0.05），見表5。

3討論

呼吸道感染屬于兒科常見病，這主要是因?yàn)閮和暮粑到y(tǒng)尚未發(fā)育完全，免疫力較差，但是其新陳代謝強(qiáng)，需要大量的氧氣。呼吸道感染主要由細(xì)菌感染、真菌感染、病毒感染引起，細(xì)菌感染是常見病因[8，9]。目前，臨床上對(duì)細(xì)菌的抑制和消滅主要依靠抗生素類藥物，但我國抗生素的使用較為普遍，致使細(xì)菌對(duì)其產(chǎn)生了較強(qiáng)的抗藥性[10]。肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌產(chǎn)ESBLS菌株的耐藥性問題對(duì)于全球都是一個(gè)嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。這些菌株對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥率高達(dá)83%以上，導(dǎo)致臨床治療面臨困難[11]。ESBLS菌株的耐藥性增加可能與菌株之間ESBLS質(zhì)粒的傳播有關(guān)。大腸埃希菌中ESBLS產(chǎn)生菌株的不斷增加是革蘭陰性菌，導(dǎo)致兒科下呼吸道感染難治的重要原因之一[12，13]。這些菌株水解第三代頭孢菌類抗生素，使得細(xì)菌耐藥性不斷增加，對(duì)兒童健康構(gòu)成了重大威脅[14]。因此，定期監(jiān)測陰溝腸桿菌科廣譜β-內(nèi)酰胺酶的分布及耐藥情況，可有效預(yù)防醫(yī)院感染，保證患者治療安全[15]。

本研究結(jié)果顯示，在102份合格痰液標(biāo)本中，共分離出病原菌102株：其中77株（75.49%）為革蘭陰性菌;有25株（24.51%）為革蘭陽性菌。本次共檢出21例大腸埃希菌，產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌9例，占42.86%。對(duì)絕大多數(shù)藥物來說，非產(chǎn)ESBLs菌株的耐藥率低于產(chǎn)ESBLs菌株（Plt;0.05）。說明對(duì)于大腸埃希菌來說，其耐藥的重要原因之一即產(chǎn)ESBLs。ESBLs屬于酶的一種，有多種耐藥基因攜帶，如aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ib、ant（3″）-I、ant（2″）-I等，使得大腸埃希菌成為耐藥菌株。提示醫(yī)院要及時(shí)發(fā)現(xiàn)，早期對(duì)重點(diǎn)人群、重點(diǎn)科室定期分析常用抗生素耐藥率，避免抗生素濫用現(xiàn)象的發(fā)生[16]。對(duì)于哌拉西林-他唑巴坦、阿米卡星來說兩種菌株的耐藥率均低于10%，并且均對(duì)亞胺培南完全敏感，所以在治療兒童呼吸道感染時(shí)首先考慮選用亞胺培南、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦，以提高治療效率[17]。對(duì)于氨芐西林、頭孢唑林、氨芐西林-舒巴坦、哌拉西林、頭孢呋辛、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、頭孢他啶這些耐藥率較高的藥物要盡量避免使用[18]。同時(shí)，單因素分析顯示，年齡、三代頭孢使用、侵襲性操作是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的危險(xiǎn)因素（Plt;0.05），多因素Logistic分析顯示，年齡lt;3歲、有侵入性操作和三代頭孢使用≥3 d是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（Plt;0.05）。分析認(rèn)為，可能與體質(zhì)下降、免疫細(xì)胞及體液功能減弱、白細(xì)胞動(dòng)員和吞噬作用減弱等現(xiàn)象密切相關(guān)。頻繁的侵襲性醫(yī)療手段增加了細(xì)菌獲取耐藥基因的機(jī)會(huì)。嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程和消毒隔離程序，對(duì)醫(yī)療器械進(jìn)行徹底消毒顯得極為關(guān)鍵。針對(duì)一切涉及呼吸道吸入的設(shè)備，如霧化器，在使用前必須進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，并且減少吸氧、插管等侵入性操作，以有效控制病原菌的傳播。鑒于第三代頭孢菌素具備較寬的抗菌譜和較低的毒性，常在兒科中大量或長期使用，這成為了兒童感染產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的一個(gè)重大風(fēng)險(xiǎn)源。一些學(xué)者提出，第三代頭孢菌素在治療細(xì)菌感染過程中，有可能篩選出耐藥變異株并加速其擴(kuò)散[19]。國內(nèi)研究同樣表明，產(chǎn)ESBLs菌的感染概率與三代頭孢菌素使用時(shí)間的長短有一定的聯(lián)系。因此，合理使用抗菌藥物，特別是嚴(yán)格控制廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素尤其是第三代頭孢菌素的應(yīng)用，對(duì)于防范產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染極為重要。

綜上所述，大腸埃希菌是兒童呼吸道的主要致病病原菌，其耐藥的重要原因之一為產(chǎn)ESBLs，年齡lt;3歲、有侵入性操作和三代頭孢使用≥3 d是產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此抗菌藥物的選用要根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行合理選擇。

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收稿日期：2024-11-29;修回日期：2024-12-06

編輯/成森

作者簡介：羅華軍（1977.8-），男，江西興國縣人，本科，主管技師，主要從事微生物檢驗(yàn)工作