［摘要］目的探究長鏈非編碼RNA（LncRNA）轉(zhuǎn)錄因子7類似物2（TCF7L2）在表皮生長因子受體基因（EGFR）突變的非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織表達(dá)及其與病人臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)性。方法選取2019年3月—2021年6月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院治療的EGFR突變NSCLC病人104例為研究對象，分別取其癌組織和癌旁組織應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測LncRNA TCF7L2的表達(dá)，比較不同組織TCF7L2表達(dá)及其與臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果RT-PCR檢測結(jié)果顯示，癌組織中LncRNA TCF7L2表達(dá)量顯著高于癌旁組織（t=12.410，Plt;0.05）。與LncRNA TCF7L2低表達(dá)病人比較，高表達(dá)者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更多、腫瘤體積更大（χ2=4.579、7.762，Plt;0.05）；LncRNA TCF7L2高表達(dá)病人6、9和12個月的生存率較低，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論LncRNA TCF7L2在EGFR突變NSCLC病人癌組織表達(dá)高于癌旁組織，且TCF7L2高表達(dá)病人的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險較高、腫瘤體積較大，其生存率可能較低。

［關(guān)鍵詞］癌，非小細(xì)胞肺；RNA，未翻譯；轉(zhuǎn)錄因子7樣2蛋白；基因，erbB-1；病理學(xué)，臨床；預(yù)后

［中圖分類號］R730.26;R342.3［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［文章編號］2096-5532（2024）03-0403-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2024.60.086［開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）］

［網(wǎng)絡(luò)出版］https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.R.20240711.1256.001;2024-07-1514：51：37

Expression of long non-coding RNA transcription factor 7-like 2 in epithelial growth factor receptor-mutant non-small cell lung cancer and its association with clinicopathological features and prognosis DONG Yuehua， WANG Guigang， YANG Yanjun， WEI Yulei， GAO Yongshan， JIANG Weihua （Department of Cardiothoracic Surgery， the First Affiliated Hospital of Hebei North University， Zhangjiakou 075000， China）

［Abstract］ObjectiveTo investigate the expression of long non-coding RNA （LncRNA） transcription factor 7-like 2 （TCF7L2） in epidermal growth factor receptor （EGFR）-mutant non-small cell lung cancer （NSCLC）， as well as its association with the clinicopathological features and prognosis of patients. MethodsA total of 104 patients with EGFR-mutant NSCLC who were treated in the First Affiliated Hospital of Hebei North University from March 2019 to June 2021 were enrolled as subjects， and RT-PCR was performed for their cancer tissue and paracancerous tissue to measure the expression of LncRNA TCF7L2. The expression level of TCF7L2 was compared between different tissue samples， and its association with clinicopathological features and prognosis was analyzed. ResultsRT-PCR showed that the expression level of LncRNA TCF7L2 in cancer tissue was significantly higher than that in paracancerous tissue （t=12.410，Plt;0.05）. Compared with the patients with a low expression level of LncRNA TCF7L2， the patients with a high expression level of LncRNA TCF7L2 had a significantly higher incidence rate of lymph node metastases and a significantly larger tumor diameter （χ2=4.579，7.762;Plt;0.05）， as well as a lower survival rate at 6， 9， and 12 months （Pgt;0.05）. ConclusionFor patients with EGFR-mutant NSCLC， the expression level of LncRNA TCF7L2 in cancer tissue is higher than that in paracancerous tissue， and the patients with a high expression level of TCF7L2 tend to have a higher risk of lymph node metastasis， a larger tumor diameter， and a lower survival rate.

［Key words］carcinoma， non-small-cell lung; RNA， untranslated; transcription factor 7-like 2 protein; genes， erbB-1; pathology， clinical; prognosis

肺癌是十分常見的一種惡性腫瘤，其發(fā)病率在男性癌癥位居第一，在女性位居第三，且致死率位居惡性腫瘤首位[1-2]。非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要類型，是肺癌的重要致死因素[3-4]。近年來，針對NSCLC的治療，表皮生長因子酪氨酸激酶抑制劑取得了較好的效果，其作用機制與表皮生長因子受體（EGFR）突變誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5]。長鏈非編碼RNA（LncRNA）是一類長度在200個核苷酸以上的非編碼RNA，其在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，對于腫瘤的發(fā)展進(jìn)程有明顯影響[6]。有研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄因子7類似物2（TCF7L2）在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中均有參與[7-8]。但其與EGFR基因突變NSCLC關(guān)系的研究尚不夠深入，因此，本研究以EGFR突變的NSCLC病人為研究對象，采用實時熒光定量PCR分別檢測病人癌組織和癌旁組織LncRNA TCF7L2的表達(dá)，探究其表達(dá)的臨床意義?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，選取2019年3月—2021年6月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院治療的EGFR突變NSCLC病人104例為研究對象。其中男性63例，女性41例，年齡57～76歲，平均年齡（66.79±8.52）歲。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[9]：Ⅰ～Ⅱ期59例，Ⅲ～Ⅳ期45例。分別取手術(shù)切除的原發(fā)腫瘤（研究組）及與腫瘤邊緣距離超過3 cm、且經(jīng)過鏡檢確認(rèn)無腫瘤組織存在的癌旁組織（對照組），經(jīng)清洗、脂肪組織剔除后分割成小塊凍存于液氮中。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中華醫(yī)學(xué)會肺癌臨床診療指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]；②入院前無相關(guān)治療史；③腫瘤標(biāo)本經(jīng)基因檢測明確EGFR突變；④預(yù)計存活時間gt;3個月；⑤自愿簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重肝腎疾?。虎诰哂衅渌到y(tǒng)嚴(yán)重功能障礙；③合并精神疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會許可。

1.2LncRNA TCF7L2表達(dá)檢測

取液氮凍存組織小塊磨成粉末，采用TRNzol總抽提試劑盒（天根生化科技有限公司，中國）分別提取癌組織和癌旁組織的RNA。使用AMV試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）對提取得到的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，以cDNA為模板使用7500型實時熒光定量PCR儀（Applied Biosystems公司，美國）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)綌U增反應(yīng)（RT-PCR）。LncRNA NEAT1引物序列如下：上游引物，5′-AAACAGGAATCGTCCCAGAGTG-3′；下游引物，5′-CTCAGCTACGACCTTTGCTCTCA-3′。嚴(yán)格按照試劑盒說明步驟進(jìn)行操作。擴增參數(shù)：95 ℃、15 min，1個循環(huán)；95 ℃、15 s，35個循環(huán)；最后，60 ℃、60 s。采用2－ΔΔCt方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到病人LncRNA TCF7L2相對表達(dá)量。

1.3觀察指標(biāo)

對病人進(jìn)行為期1年隨訪，分別統(tǒng)計術(shù)后3、6、9和12月的生存構(gòu)成比。比較癌組織和癌旁組織TCF7L2的表達(dá)水平，根據(jù)LncRNA TCF7L2表達(dá)量的平均值，將大于等于平均值的病人納入高表達(dá)組，小于平均值者納入低表達(dá)組，比較兩組病人相關(guān)臨床病理特征和生存預(yù)后。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料數(shù)據(jù)以±s形式表示，兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗。計數(shù)資料數(shù)據(jù)以例數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Kaplan-Meier生存曲線分析研究對象生存差異。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1癌和癌旁組織LncRNA TCF7L2表達(dá)比較

實時熒光定量PCR的檢測結(jié)果表明，癌組織LncRNA TCF7L2相對表達(dá)量為12.27±2.35，明顯高于癌旁組織的8.69±1.77，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.410，Plt;0.05）。

2.2LncRNA TCF7L2表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

與EGFR突變NSCLC組織LncRNA TCF7L2低表達(dá)病人比較，高表達(dá)者腫瘤體積更大、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.579、7.762，Plt;0.05）。二者性別和年齡比較，差異均無顯著性（Pgt;0.05）。見表1。

2.3LncRNA TCF7L2表達(dá)對生存預(yù)后影響

對病人術(shù)后1年的隨訪結(jié)果顯示，與EGFR突變NSCLC組織LncRNA TCF7L2低表達(dá)組病人相比較，雖然高表達(dá)組在6、9和12個月的生存率均有降低趨勢，但兩組病人的生存率曲線比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Log Rank（χ2）=2.215，Pgt;0.05）。見表2和圖1。

3討論

TCF7L2主要是通過參與Wnt信號通路的異?；罨瘉韰⑴c腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11-13]。Wnt信號通路一般包括Wnt蛋白、糖原合成激酶3和T細(xì)胞因子（TCF），其中Wnt蛋白通過分泌作用結(jié)合細(xì)胞膜上的受體激活細(xì)胞內(nèi)信號通路，發(fā)揮對細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)生物的生長發(fā)育、衰老死亡等生命進(jìn)程[14-16]。TCF家族蛋白作為Wnt信號通路中的調(diào)控靶點之一，在不同的細(xì)胞中對于同一靶基因有抑制或激活作用[17-18]。TCF7L2是TCF家族中一種重要的下游因子，在Wnt信號不存在時，該因子會特異性結(jié)合下游靶基因啟動子序列，通過與多種阻遏蛋白結(jié)合，發(fā)揮抑制下游基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的作用；而在Wnt信號通路被異常激活時，TCF7L2的相關(guān)結(jié)構(gòu)域可與未降解的β-連環(huán)蛋白結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，進(jìn)而再結(jié)合其他轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)下游靶基因表達(dá)，進(jìn)而推進(jìn)腫瘤發(fā)展進(jìn)程[19-21]。由此可見，TCF7L2既能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，同時也能抑制細(xì)胞的過度生長，對于腫瘤的治療也有一定的指導(dǎo)作用。

本研究選取我院收治的EGFR突變的NSCLC病人為研究對象，采用實時熒光定量PCR檢測病人癌組織和癌旁組織LncRNA TCF7L2的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，LncRNA TCF7L2在癌組織中的表達(dá)水平明顯高于其癌旁組織，提示LncRNA TCF7L2在EGFR突變的NSCLC的疾病進(jìn)程中有重要意義，其參與肺癌發(fā)生發(fā)展的機制可能是由于該基因被激活后對下游靶基因的表達(dá)發(fā)揮了促進(jìn)作用，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞過度增殖[22-24]。有研究表明，LncRNA TCF7L2在胃癌病人的癌組織表達(dá)明顯高于其癌旁組織，LncRNA TCF7L2不僅能改變組織細(xì)胞的形態(tài)，同時可增強癌細(xì)胞的遷移、浸潤等能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞球和癌癥病灶的形成，給病人的生命健康帶來了消極影響[25-27]。

本研究將EGFR基因突變NSCLC病人分為LncRNA TCF7L2高表達(dá)組和低表達(dá)組，并對兩組的臨床病理特征進(jìn)行對比。結(jié)果顯示，兩組病人的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而高表達(dá)組發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人顯著增多、腫瘤體積顯著增大。提示LncRNA TCF7L2表達(dá)量越高，病人發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的風(fēng)險越高、腫瘤的體積越大，其原因可能與TCF7L2基因?qū)δ[瘤細(xì)胞生長分化的促進(jìn)作用有關(guān)[28-30]。本文的隨訪結(jié)果顯示，在1年內(nèi)LncRNA TCF7L2高表達(dá)組病人的生存率雖低于低表達(dá)組，但是二者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。其原因可能與本研究樣本量不足且隨訪時間較短有關(guān)。因此，在未來的研究中應(yīng)擴大樣本量，同時延長隨訪時間，以便于更好地探究LncRNA TCF7L2表達(dá)對于EGFR突變NSCLC病人的臨床價值。

綜上所述，LncRNA TCF7L2在EGFR突變NSCLC病人癌組織的表達(dá)量顯著高于癌旁組織，且TCF7L2高表達(dá)組的病人發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險更高、腫瘤體積更大，而且其生存率也可能較低。因此，對LncRNA TCF7L2在EGFR突變NSCLC病人癌組織中表達(dá)進(jìn)行檢測，可能對病人的預(yù)后有一定的評估價值。

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