摘要 通過云南獨(dú)蒜蘭種子無(wú)菌萌發(fā)獲得原球莖；原球莖經(jīng)過增殖長(zhǎng)葉、生根培養(yǎng)獲得組培苗；然后在溫度為15、20、25、30、35 ℃下進(jìn)行分別培養(yǎng)，光照時(shí)間12 h/d，光照強(qiáng)度1 500 lx。挑選出30 ℃（T1）和35 ℃（T2）的組培苗轉(zhuǎn)入變溫條件（白天溫度25 ℃、光照時(shí)長(zhǎng)12 h，晚上溫度20 ℃、光照時(shí)長(zhǎng)12 h）的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)照（CK）培養(yǎng)條件為溫度25 ℃（光照時(shí)長(zhǎng)24 h），光照強(qiáng)度均為1 500 lx。定期觀察云南獨(dú)蒜蘭葉片數(shù)量和長(zhǎng)度、假鱗莖數(shù)量和大小、須根數(shù)。結(jié)果表明：假鱗莖數(shù)量、大小在35 ℃培養(yǎng)條件下最高，15 ℃培養(yǎng)條件下最低；葉片長(zhǎng)度在25 ℃培養(yǎng)條件下最高，35 ℃培養(yǎng)條件下最低；葉片數(shù)量在25 ℃培養(yǎng)條件下最高，35 ℃培養(yǎng)條件下最低；須根數(shù)在35 ℃培養(yǎng)條件下最高，20 ℃培養(yǎng)條件下最低。通過變溫繼續(xù)培養(yǎng)后，假鱗莖數(shù)量、大小和須根數(shù)T2最多，葉片數(shù)量和葉片長(zhǎng)度CK組最多。通過煉苗對(duì)比，傳統(tǒng)云南獨(dú)蒜蘭組培苗煉苗成活率為83.3%，成苗率為72.4%，變溫處理后云南獨(dú)蒜蘭組培苗煉苗成活率達(dá)到94.6%，成苗率達(dá)到91.2%。

關(guān)鍵詞 云南獨(dú)蒜蘭；溫度調(diào)節(jié)；組培苗；生長(zhǎng)變化

中圖分類號(hào) S682.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2024）15-0184-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.15.039

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effect of Different Temperature Regulation on Growth of Tissue Culture Seedlings in Pleione yunnanensis Rolfe

XU Chun-lian， HE Shou-xing， TANG Wang-wai et al

（Institute of Alpine Economics and Botany，Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Lijiang，Yunnan 674199）

Abstract Protocorm was obtained by aseptic germination of Pleione yunnanensis seeds. Tissue culture seedlings were obtained from protocorm by proliferation， long leaves and rooting culture. They were cultured at 15 ℃， 20 ℃， 25 ℃， 30 ℃ and 35 ℃ respectively， and the illumination time was 12 h/d and the illumination intensity was 1 500 lx. Select tissue culture seedlings at 30 ℃ （T1） and 35 ℃ （T2） and transfer them to a temperature changing incubator （with a daytime temperature of 25 ℃ and a light duration of 12 hours， and a nighttime temperature of 20 ℃ and a light duration of 12 hours） for cultivation.The culture conditions of control group （CK） were light time 12 h/d， light intensity 1 500 lx， temperature 20 ℃ （night） and 25 ℃ （day）. The number and length of leaves， the number and size of pseudokirin， and the number of fibrous roots were observed regularly. The result showed that the number and size of pseudokirin were the highest under 35 ℃ culture conditions and lowest under 15 ℃ culture conditions.The leaf length was the highest in 25 ℃ culture， and the lowest in 35 ℃ culture conditions.The number of leaves in 25 ℃ culture conditions was the highest， and the lowest in 35 ℃ culture conditions.The number of fibrous roots was the highest at 35℃， and the lowest at 20 ℃ culture conditions.After continuous culture at variable temperature， the number and size of the pseudonymous， and number of fibrous roots were the highest in the T2 group， while the number and length of leaves were the highest in the CK group.By comparison of hardening-seedlings， the survival rate of tissue culture hardening seedlings of traditional Pleione yunnanensis was 83.3%，and the seedling formation rate was 72.4%，the survival rate of tissue culture seedlings of Pleione yunnanensis after variable temperature treatment was 94.6%，and the seedling formation rate was 91.2%.

Key words Pleione yunnanensis Rolfe;Temperature regulation;Tissue culture seedlings;Growth changes

云南獨(dú)蒜蘭（Pleione yunnanensis Rolfe）為蘭科獨(dú)蒜蘭屬的一種半附生蘭，是蘭科植物中具有較高藥用價(jià)值和觀賞園藝價(jià)值高的一個(gè)屬［1-2］，其假鱗莖為中藥山慈菇的主要來(lái)源之一，習(xí)稱“冰球子”。云南獨(dú)蒜蘭為《中國(guó)藥典》收載品，具有清熱解毒、止咳化痰、止血生肌的功效，主治肺結(jié)核、百日咳、氣管炎、癰腫、消化道出血、外傷出血等［3］，主要用于透解祛瘟顆粒（又稱肺炎一號(hào)）、癃閉舒膠囊、乳癖清膠囊等20余種中成藥。獨(dú)蒜蘭屬約有24 種9 個(gè)天然雜交種，中國(guó)有19 種4 個(gè)天然雜交種，主要分布在云南、四川、西藏、福建、臺(tái)灣，緬甸、泰國(guó)、老撾等國(guó)家也有分布［3-4］。云南獨(dú)蒜蘭假鱗莖含有聯(lián)芐基、二氫菲類、生物堿、多糖等化學(xué)成分，近年來(lái)，由于其含有抗腫瘤的活性，云南獨(dú)蒜蘭市場(chǎng)需求量不斷增加。假鱗莖指蘭科植物變態(tài)的莖，通常肉質(zhì)，呈卵球形至橢圓形。該屬植物最典型的特征就是假鱗莖每年更新，且假鱗莖結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單［4-12］；但其種子小，自然狀態(tài)下很難成功萌發(fā)及生長(zhǎng)，加之野生資源破壞嚴(yán)重，所以通過組織培養(yǎng)是獲得大量完整再生植株的重要技術(shù)手段，亦是緩解資源環(huán)境壓力的主要途徑。近年來(lái)，對(duì)獨(dú)蒜蘭的研究?jī)H限于群落特征、繁殖技術(shù)、假鱗莖化學(xué)成分等方面［4-12］，而溫度調(diào)節(jié)對(duì)云南獨(dú)蒜蘭組培苗的影響鮮見報(bào)道。目前組培出來(lái)的云南獨(dú)蒜蘭種苗在煉苗過程中出現(xiàn)的問題還是較多，特別是煉苗時(shí)其成活率和成苗率均不高，其根本原因是云南獨(dú)蒜蘭在組培過程中其組培苗假鱗莖過小，而葉片較多。該研究通過不同溫度調(diào)節(jié)對(duì)云南獨(dú)蒜蘭組培苗生長(zhǎng)的影響研究，獲得較好的云南獨(dú)蒜蘭組培苗，提高其煉苗成活率和成苗率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

云南獨(dú)蒜蘭組培苗是2021年在云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高山經(jīng)濟(jì)植物研究所試驗(yàn)基地種植的云南獨(dú)蒜蘭開花植株經(jīng)過自花授粉后獲得蒴果，在組培實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過種子無(wú)菌萌發(fā)、轉(zhuǎn)接、生根等過程培養(yǎng)獲得。選擇無(wú)污染、色澤鮮亮、大小均勻、出苗整齊的組培苗。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1

不同溫度處理對(duì)云南獨(dú)蒜蘭生長(zhǎng)的影響。試驗(yàn)設(shè)置溫度分別為15、20、25、30、35 ℃，每個(gè)溫度條件下組培苗數(shù)量為200苗，培育時(shí)間一致，組培苗大小基本一致。所有試驗(yàn)的培養(yǎng)條件均為光照時(shí)間12 h/d，光照強(qiáng)度1 500 lx。每個(gè)溫度梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。統(tǒng)計(jì)、觀察記錄云南獨(dú)蒜蘭假鱗莖數(shù)量和大小、葉片數(shù)量和長(zhǎng)度、須根數(shù)。

1.2.2

變溫處理對(duì)云南獨(dú)蒜蘭生長(zhǎng)的影響。在云南獨(dú)蒜蘭組培苗葉片由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色且云南獨(dú)蒜蘭假鱗莖停止生長(zhǎng)時(shí)，挑選出30 ℃（T1）和35 ℃（T2）（也是設(shè)置3個(gè)重復(fù)）的組培苗轉(zhuǎn)入變溫條件（白天溫度25 ℃、光照時(shí)長(zhǎng)12 h，晚上溫度20 ℃、光照時(shí)長(zhǎng)12 h）的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)照（CK）培養(yǎng)條件為溫度25 ℃（光照時(shí)長(zhǎng)24 h），光照強(qiáng)度均為1 500 lx。統(tǒng)計(jì)、觀察記錄云南獨(dú)蒜蘭假鱗莖數(shù)量和大小、葉片數(shù)量和長(zhǎng)度、須根數(shù)。

1.2.3 煉苗試驗(yàn)。對(duì)再次培養(yǎng)后的云南獨(dú)蒜蘭進(jìn)行煉苗試驗(yàn)，煉苗基質(zhì)為椰糠+腐殖土+蛭石（V∶V∶V=1∶1∶1），煉苗在云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高山經(jīng)濟(jì)植物研究所試驗(yàn)基地溫室大棚進(jìn)行，過14 d后每隔10 d統(tǒng)計(jì)煉苗的成活率和成苗率。對(duì)照（CK）為沒有經(jīng)過變溫處理且培養(yǎng)時(shí)間一致的組培苗。煉苗數(shù)量均為2 000株，煉苗基質(zhì)、環(huán)境與試驗(yàn)一致。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

假鱗莖數(shù)量：統(tǒng)計(jì)假鱗莖總數(shù)，含無(wú)葉的假鱗莖；

假鱗莖大小：選取20個(gè)假鱗莖，用游標(biāo)卡尺測(cè)量大小，取平均值；

葉片數(shù)量：統(tǒng)計(jì)不同溫度條件下所有植株的葉片數(shù)；

葉片長(zhǎng)度：選取20個(gè)葉片，用游標(biāo)卡尺測(cè)量大小，取平均值；

須根數(shù)量：統(tǒng)計(jì)不同溫度條件下所有植株的須根數(shù)。

成活率=（成活的種苗數(shù)/種苗總數(shù)）×100%

成苗率=（成苗的種苗數(shù)/種苗總數(shù)）×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度處理對(duì)云南獨(dú)蒜蘭生長(zhǎng)的影響

從表1可以看出，假鱗莖數(shù)量在35 ℃培養(yǎng)條件下最高，平均值達(dá)到327.20個(gè)，15 ℃培養(yǎng)條件下最低，平均值僅為219.67個(gè)，相差107.53個(gè)。30 ℃培養(yǎng)條件與35 ℃培養(yǎng)條件下假鱗莖數(shù)量差異不顯著（P＞0.05），30和35 ℃培養(yǎng)條件下與15、20、25 ℃培養(yǎng)條件下差異顯著（P＜0.05），15、20、25 ℃培養(yǎng)條件之間差異不顯著（P＞0.05）。

從表1可以看出，假鱗莖大小在35 ℃培養(yǎng)條件下最高，平均值達(dá)到2.926 7 mm，15 ℃培養(yǎng)條件下最低，平均值為2.514 0 mm，相差0.412 7 mm。30 ℃培養(yǎng)條件與35 ℃培養(yǎng)條件下假鱗莖大小差異不顯著（P＞0.05），30和35 ℃培養(yǎng)條件下與15、20、25 ℃培養(yǎng)條件下差異顯著（P＜0.05），15、20、25 ℃培養(yǎng)條件之間差異不顯著（P＞0.05）。

從表1可以看出，葉片數(shù)量在25 ℃培養(yǎng)條件下最高，平均值達(dá)到475.87片，35 ℃培養(yǎng)條件下最低，平均值僅為248.73片，相差227.14片。30 ℃培養(yǎng)條件與35 ℃培養(yǎng)條件下葉片數(shù)量差異不顯著（P＞0.05），30和35 ℃培養(yǎng)條件下與15、20、25 ℃培養(yǎng)條件下差異顯著（P＜0.05），15、20、25 ℃培養(yǎng)條件之間差異不顯著（P＞0.05）。

從表1可以看出，葉片長(zhǎng)度在25 ℃培養(yǎng)條件下最高，平均值達(dá)到34.930 0 mm，35 ℃培養(yǎng)條件下最低，平均值僅為20.353 0 mm，相差14.577 0 mm。30 ℃培養(yǎng)條件與35 ℃培養(yǎng)條件下葉片長(zhǎng)度差異不顯著（P＞0.05），30和35 ℃培養(yǎng)條件下與15、20、25 ℃培養(yǎng)條件下差異顯著（P＜0.05），15、20、25 ℃培養(yǎng)條件之間差異不顯著（P＞0.05）。

從表1可以看出，須根數(shù)在35 ℃培養(yǎng)條件下最高，平均值達(dá)到544.07根，20 ℃培養(yǎng)條件下最低，平均值僅為491.80根，相差52.27根。30 ℃培養(yǎng)條件與35 ℃培養(yǎng)條件下須根數(shù)差異顯著（P＜0.05），30和35 ℃培養(yǎng)條件下與15、20、25 ℃培養(yǎng)條件下差異顯著（P＜0.05），15、20、25 ℃培養(yǎng)條件之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 變溫處理對(duì)云南獨(dú)蒜蘭生長(zhǎng)的影響

從表2可以看出，假鱗莖數(shù)量T2最多，達(dá)到490.47個(gè)，與CK相差223.27個(gè)，達(dá)到顯著水平；假鱗莖大小T2最大，達(dá)到3.810 0 mm；葉片數(shù)量和葉片長(zhǎng)度CK最多，分別為528.40片和37.336 7 mm；須根數(shù)T2最多，達(dá)到629.93根，與CK相差94.26根，達(dá)到顯著水平。

2.3 煉苗試驗(yàn)

從表3可以看出，變溫處理組和對(duì)照組（CK）云南獨(dú)蒜蘭組培苗成活率、成苗率差異均顯著（P<0.05），成活率相差11.3百分點(diǎn)，成苗率相差18.8百分點(diǎn)，說(shuō)明變溫處理對(duì)云南獨(dú)蒜蘭組培苗影響較大。

3 結(jié)論

（1）云南獨(dú)蒜蘭為喜冷涼的植物，最適宜生長(zhǎng)溫度為15～25 ℃，不耐受高溫（35 ℃），在高溫（35 ℃）條件下會(huì)出現(xiàn)葉片發(fā)黃、倒苗、停止生長(zhǎng)等現(xiàn)象。葉片數(shù)量會(huì)從455.87片（15 ℃）減少至248.73片（35 ℃）。

（2）云南獨(dú)蒜蘭組培苗在高溫（30、35 ℃）條件下培養(yǎng)30～40 d出現(xiàn)倒苗、休眠現(xiàn)象，再次轉(zhuǎn)入白天25 ℃、晚上20 ℃的培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)40 d后，云南獨(dú)蒜蘭假鱗莖數(shù)量和大小、須根數(shù)有明顯增多、增大現(xiàn)象。

（3）經(jīng)過變溫處理后的云南獨(dú)蒜蘭組培苗與傳統(tǒng)組培苗在同一煉苗棚中進(jìn)行煉苗培養(yǎng)，通過煉苗對(duì)比，傳統(tǒng)云南獨(dú)蒜蘭組培苗煉苗成活率和成苗率分別僅為83.3%和72.4%，變溫處理后的成活率和成苗率分別達(dá)到94.6%和91.2%?？梢?，云南獨(dú)蒜蘭組培苗煉苗成苗率提高11.3百分點(diǎn)，成苗率提高18.8百分點(diǎn)，有效解決了獨(dú)蒜蘭煉苗成活率和成苗率低的問題，為云南獨(dú)蒜蘭今后大規(guī)模種植提供優(yōu)質(zhì)種苗打下基礎(chǔ)，云南獨(dú)蒜蘭煉苗成活率和成苗率的關(guān)鍵為假鱗莖大小，其次是葉片數(shù)量等指標(biāo)。

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