馬雯芳 吳劍麗 張秀麗 藍(lán)昌斌 甘潔雪 周華鋒 王劍

收稿日期：2023-09-25

基金項(xiàng)目：壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目（桂教科研［2013］20號(hào)）；廣西壯瑤藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（桂科基字［2014］32號(hào)）；廣西重點(diǎn)學(xué)科壯藥學(xué)項(xiàng)目（桂教科研［2013］16號(hào)）；廣西協(xié)同創(chuàng)新中心壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心科研項(xiàng)目（ZYXT［2015］-13）

作者簡(jiǎn)介：馬雯芳（1983-），女，廣西南寧人，教授，博士，主要從事中藥品種鑒定與品質(zhì)評(píng)價(jià)研究工作，（電話）0771-4953513（電子信箱）

109348793@qq.com；通信作者，王 劍（1981-），講師，碩士，主要從事中醫(yī)藥數(shù)據(jù)挖掘的研究工作，（電話）0771-4953513

（電子信箱） 43582538@qq.com。

馬雯芳，吳劍麗，張秀麗，等. 壯藥蛇尾草HPLC指紋圖譜及抗氧化活性的譜效關(guān)系［J］. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2024，63（5）：84-90．

摘要：為研究壯藥蛇尾草高效液相（HPLC）指紋圖譜及抗氧化活性間的譜效關(guān)系，建立了蛇尾草藥材高效液相指紋圖譜，采用1， 1-二苯基-2-三硝基苯肼法（DPPH）和鐵離子還原能力法（FRAP）對(duì)蛇尾草抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)合聚類分析、主成分分析和偏最小二乘分析對(duì)蛇尾草抗氧化活性進(jìn)行譜效分析。結(jié)果表明，以3號(hào)峰（毛蕊花糖苷）為參照峰，確定了11個(gè)共有峰，大部分批次蛇尾草的相似度>0.900；通過(guò)聚類分析和主成分分析，可將22 批樣品分為兩類；不同產(chǎn)地間蛇尾草毛蕊花糖苷含量在0.38%～4.82%；22批蛇尾草抗氧化活性良好，共有峰1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、8、10、11與DPPH自由基清除率呈正相關(guān)，1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、10號(hào)峰與鐵離子還原能力呈正相關(guān)。建立的蛇尾草HPLC指紋圖譜可靠、準(zhǔn)確，可為蛇尾草抗氧化活性物質(zhì)的篩選及質(zhì)量控制提供參考。

關(guān)鍵詞：蛇尾草；指紋圖譜；聚類分析；主成分分析；抗氧化活性；譜效關(guān)系；偏最小二乘回歸分析

中圖分類號(hào)：S567.21；R285.5???????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2024）05-0084-07

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2024.05.015??????????? 開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

HPLC fingerprint and its spectral effect relationship with antioxidant activity of Zhuang medicine Pogonostemon auricularius （L.） Hassk.

MA Wen-fang， WU Jian-li， ZHANG Xiu-li， LAN Chang-bin， GAN Jie-xue， ZHOU Hua-feng， WANG Jian

（Faculty of Pharmacy， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning? 530001， China）

Abstract： Aiming to study the relationship between high performance liquid ehromatography （HPLC） fingerprint and antioxidant activity， the HPLC fingerprint of Pogonostemon auricularius （L.） Hassk. was established. Combing with Cluster Analysis， Principal Component Analysis， and Partial Least Squares Regression Analysis， the antioxidant activity of Pogonostemon auricularius （L.） Hassk.was evaluated by 1，1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine （DPPH） and ferric reducing ability of plasma （FRAP） methods. The results showed that eleven common peaks were identified with peak No. 3 （verbascoside） as the reference peak， and the similarity of most batches of Pogonostemon auricularius （L.） Hassk. was greater 0.900. Through cluster analysis and principal component analysis， twenty-two batches of samples could be divided into two categories. The content of verbascoside in Pogonostemon auricularius （L.） Hassk. from different producing areas ranged from 0.38% to 4.82%. The antioxidant activity of twenty-two lots of Pogonostemon auricularius （L.） Hassk. was good. Peaks 1， 2， 3（verbascoside）， 6， 8， 10， and 11 were positively correlated with DPPH free radical scavenging rate， peaks 1， 2， 3（verbascoside）， 6， and 10 were positively correlated with iron ion reducing ability. The established HPLC fingerprint was reliable and accurate， which could provide reference for the screening and quality control of antioxidant active substances of Pogonostemon auricularius （L.） Hassk.

Key words： Pogonostemon auricularius （L.） Hassk.； fingerprint； cluster analysis； principal component analysis； antioxidant activity； spectrum effect relationship； Partial Least Squares Regression Analysis

蛇尾草又名毛水珍珠草、水珍珠菜、水毛射，為唇形科刺蕊草屬植物水珍珠菜［Pogostemon auricularius （L.） Hassk.］的全草， 其味淡，性涼，有散風(fēng)清熱、消炎止痛、祛濕、拔毒生肌的功效；用于感冒發(fā)熱、皮膚潰瘍、咽喉腫痛、風(fēng)濕痛、驚風(fēng)、毒蛇咬傷［1-4］，生于廣西、廣東、福建、臺(tái)灣及云南疏林下濕潤(rùn)處或溪邊近水潮濕處，蛇尾草為壯族常用民間草藥［5-7］。壯醫(yī)認(rèn)為蛇尾草能調(diào)氣機(jī)、止疼痛、通龍路、消腫痛；用于額哈（毒蛇咬傷）、壩農(nóng)（癰疽）、能唅能累（濕疹）、林得叮相（跌打損傷）［8］。

目前已從基源、性狀、顯微、薄層色譜鑒別等方面對(duì)蛇尾草進(jìn)行了研究，初步建立了蛇尾草的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法［9］，但鮮見(jiàn)對(duì)其指紋圖譜的研究。指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別已廣泛用于民族藥、中藥的質(zhì)量控制，可從整體上更客觀地反映民族藥、中藥的質(zhì)量，是評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的重要手段［10-18］。炎癥和多種疾病與人體的自由基有關(guān)，體內(nèi)過(guò)多的自由基會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷、慢性炎癥，加速機(jī)體衰老，誘發(fā)各種疾?。?9-22］，因此研究抗氧化成分及評(píng)價(jià)抗氧化活性的方法，對(duì)開(kāi)發(fā)更多抗氧化劑具有重要意義。常用的體外抗氧化活性評(píng)價(jià)方法有DPPH自由基清除法、FRAP總抗氧化能力測(cè)定法、ABTS總抗氧化測(cè)定法、抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力測(cè)定法等，體外抗氧化活性評(píng)價(jià)方法簡(jiǎn)便、高效、快捷，但單一評(píng)價(jià)方法均不能直接反映總抗氧化活性，不同的抗氧化活性測(cè)定方法反應(yīng)機(jī)理不同故而結(jié)果有差異，因此需采用多種測(cè)定方法綜合評(píng)價(jià)抗氧化活性［22-24］。為此，本研究對(duì)22批蛇尾草建立HPLC指紋圖譜，采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼法和鐵離子還原能力法對(duì)蛇尾草抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)合聚類分析、主成分分析進(jìn)行共有峰分析，采用偏最小二乘法分析蛇尾草抗氧化活性譜效關(guān)系，以期為蛇尾草抗氧化活性物質(zhì)的篩選及質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 SOP型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AgiLent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)AgiLent公司）；SYNERGYH1型酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰公司）；DP5系列超純水儀（美國(guó)密理博公司）。

1.1.2 試劑 毛蕊花糖苷對(duì)照品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司；批號(hào)V101318，純度≥98%）；乙腈（賽默飛世爾科技有限公司；批號(hào)204127；色譜純）、甲醇（賽默飛世爾科技有限公司；批號(hào)207899；色譜純）、2，4，6-三吡啶基三嗪（分析純，Solarbio公司）、硫酸亞鐵（分析純，天津博迪化工股份有限公司）、1， 1-二苯基-2-三硝基苯肼（日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社，批號(hào)6KCYN-LT）、鹽酸（分析純，廉江市愛(ài)廉化學(xué)試劑有限公司）、95%乙醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、超純水。

1.1.3 藥材 22批蛇尾草藥材采自廣西、廣東各地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室蔡毅教授鑒定為唇形科刺蕊草屬植物水珍珠菜的干燥全草，藥材信息見(jiàn)表 1。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱為Inertsil ODS-3色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸，洗脫程序?yàn)?～12 min，20%（乙腈）；12～20 min，20%～25%（乙腈）；20～30 min，25%（乙腈）；30～45 min，25%～35%（乙腈）；45～70 min，35%（乙腈）；進(jìn)樣體積為10 μL；柱溫設(shè)置為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)310 nm；流速1.0 mL/min。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取毛蕊花糖苷對(duì)照品5.12 mg，用甲醇定容至10 mL，即得濃度為0.512 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取蛇尾草藥材粉末（過(guò)四號(hào)篩）0.3 g，加入25 mL的70%乙醇超聲30 min，經(jīng)離心后取上層清液濾過(guò)，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 精密度試驗(yàn) 取同一蛇尾草供試品溶液（S6），按“1.2.3”條件制備供試品溶液，按照“1.2.1”色譜條件測(cè)定 6 次，記錄保留時(shí)間和峰面積。以3號(hào)峰（毛蕊花糖苷）的保留時(shí)間和峰面積作為參照，計(jì)算11個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果11個(gè)色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的 RSD為 0.34%～0.55%，相對(duì)峰面積的 RSD為0.68%～1.95%，表明該儀器的精密度良好。

2.1.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一蛇尾草供試品溶液（S6），分別于制備后0、3、6、12、24、48 h，按照 “1.2.1”色譜條件測(cè)定，記錄峰面積和保留時(shí)間。以3號(hào)峰（毛蕊花糖苷）為參照峰，結(jié)果測(cè)得11個(gè)共有色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.13%～1.81%，相對(duì)峰面積的RSD為0.49%～2.07%，說(shuō)明蛇尾草供試品溶液放置室溫下在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批蛇尾草粉末（S6）0.3 g，稱定 6 份，按“1.2.1”色譜條件測(cè)定。以3號(hào)峰（毛蕊花糖苷）為參照，結(jié)果測(cè)得11個(gè)共有色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.07%～0.56%，相對(duì)峰面積的RSD為0.76%～2.24%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2 蛇尾草的指紋圖譜與化學(xué)模式識(shí)別研究

2.2.1 HPLC指紋圖譜建立 取22批蛇尾草樣品制備供試品溶液，按照“1.2.1”色譜條件測(cè)定，將22批蛇尾草的色譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A版）”，參照?qǐng)D譜為S6，時(shí)間窗為0.2 s，得到22批蛇尾草HPLC指紋圖譜疊加圖，見(jiàn)圖1。經(jīng)查閱文獻(xiàn)并通過(guò)對(duì)照品比對(duì)［9］，指認(rèn)3號(hào)峰為毛蕊花糖苷，結(jié)果見(jiàn)圖2。蛇尾草藥材對(duì)照指紋圖譜以中位數(shù)法生成，見(jiàn)圖3。由于3號(hào)毛蕊花糖苷色譜峰的峰面積高且分離度較好，因此作為參照峰，計(jì)算各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.12%～0.60%，相對(duì)峰面積的RSD為38.57%～118.92%，表明不同批次蛇尾草各成分種類基本相同，但是含量差異較大。

2.2.2 相似度評(píng)價(jià) 將22批蛇尾草樣品的色譜圖導(dǎo)入“中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A版）”進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表2。各批次蛇尾草相似度均大于或等于0.834，除S15和S21外，其余批次蛇尾草的相似度均>0.900，各批次蛇尾草藥材的整體化學(xué)成分差異性較小。

2.2.3 聚類分析 將22批蛇尾草供試品共有峰峰面積的原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入IBM SPSS Statistic 23.0軟件，選擇組間聯(lián)接的方法，以余弦作為測(cè)量度，根據(jù)各色譜峰的峰面積對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)聚類，輸出聚類結(jié)果見(jiàn)圖4。從聚類分析樹(shù)狀圖中可以看出，當(dāng)距離為24時(shí)，22批供試品分為兩大類，S3、S21、S4為一類，S9、S10、S2、S8、S12、S16、S1、S7、S6、S18、S20、S5、S11、S14、S19、S13、S22、S17、S15為一類，表明不同批次的蛇尾草樣品存在一定差異。

2.2.4 主成分分析 對(duì)22批藥材共有峰的峰面積數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理后，導(dǎo)入IBM SPSS Statistic 23.0軟件進(jìn)行主成分分析，結(jié)果見(jiàn)表3。取主成分對(duì)應(yīng)的特征值大于1 的前2個(gè)主成分［25-27］，主成分特征值分別為19.260、1.493，方差貢獻(xiàn)率分別為87.545%、6.785%；前2個(gè)主成分的累積方差貢獻(xiàn)率達(dá)94.330%，表明提取前2個(gè)主成分可表示蛇尾草藥材中的大部分化學(xué)信息。以前2個(gè)主成分為變量，利用IBM SPSS Statistics 23.0軟件繪制主成分得分，見(jiàn)圖5，可以直觀地顯示樣品之間的差異。由圖5可知，S3、S4、S21批次與其他批次距離較遠(yuǎn)，主成分分析的結(jié)果與聚類分析的結(jié)果一致。

2.3 不同產(chǎn)地蛇尾草中毛蕊花糖苷含量的測(cè)定

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密量取毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液（0.512 mg/mL）0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0 mL于2 mL的容量瓶中，配制成系列對(duì)照品溶液，按照“1.2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，將對(duì)照品質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)（X），以峰面積作為縱坐標(biāo)（Y），回歸方程為Y=?? 13 200.742X+4.502 511 8（r=0. 999 95），結(jié)果表明，在0.025 6～0.512 0 mg/mL范圍內(nèi)毛蕊花糖苷的質(zhì)量濃度和峰面積的線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 取同一毛蕊花糖苷（0.204 8 mg/mL）對(duì)照品溶液，在“1.2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定 6 次，記錄毛蕊花糖苷的峰面積，結(jié)果RSD為0.20%，顯示該儀器的精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一蛇尾草供試品溶液（S6），分別于供試品制備后0、3、6、12、24、48 h，按照“1.2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。記錄毛蕊花糖苷的峰面積，結(jié)果RSD為0.75%，說(shuō)明蛇尾草供試品溶液中毛蕊花糖苷含量在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同一份蛇尾草粉末（S6）0.3 g，稱定6份，制備蛇尾草供試品溶液，在“1.2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定6次，記錄毛蕊花糖苷的峰面積，結(jié)果RSD為2.60%，說(shuō)明重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取蛇尾草粉末（S6）0.15 g，稱定6份，制備蛇尾草供試品溶液，精密加入適量的對(duì)照品溶液，在“1.2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，結(jié)果毛蕊花糖苷加樣回收率為96.42%～99.16%，平均加樣回收率為98.15%，RSD為1.08%。

2.3.6 含量測(cè)定 精密稱取各批次蛇尾草粉末0.3 g，制備蛇尾草供試品溶液，在“1.2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定，記錄各批次毛蕊花糖苷峰面積，測(cè)得各批次蛇尾草藥材中毛蕊花糖苷含量在0.38%～4.82%，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 藥效學(xué)研究

2.4.1 DPPH自由基清除率測(cè)定 取蛇尾草供試品溶液80 μL與60 μL 0.4 mmol/L的DPPH溶液，避光反應(yīng)30 min，即得樣品組溶液；供試品溶液80 μL與95%乙醇60 μL混勻，避光反應(yīng)30 min，即得樣品空白溶液；95%乙醇80 μL與60 μL 0.4 mmol/L的DPPH溶液混勻，避光反應(yīng)30 min，即得對(duì)照溶液；試驗(yàn)平行3份。在517 nm測(cè)得A0、A1、A2。根據(jù)公式DPPH自由基清除率=［1-（A1-A2）/A0］×100%計(jì)算，得到自由基清除率為91.78%～95.67%，其中S9抗氧化能力最強(qiáng)，S4抗氧化能力最弱，結(jié)果見(jiàn)表5。

2.4.2 FRAP鐵離子還原能力測(cè)定 在酸性環(huán)境下，抗氧化物質(zhì)可以還原Fe3+-三吡啶三吖嗪（Fe3+-TPTZ）生成藍(lán)色的Fe2+-TPTZ［20］。取蛇尾草供試品溶液80 μL加入4 mL FRAP工作液中，避光靜置40 min，于596 nm處測(cè)定吸光度。以FeSO4當(dāng)量評(píng)價(jià)蛇尾草總抗氧化能力，不同批次蛇尾草FeSO4當(dāng)量為101.34～264.73 mg/g，其中S8抗氧化能力最強(qiáng)，S12抗氧化能力最弱，結(jié)果見(jiàn)表6。

2.5 偏最小二乘回歸分析

以11個(gè)共有峰的峰面積經(jīng)Z-score標(biāo)準(zhǔn)化處理后為自變量，不同批次蛇尾草供試品抗氧化能力數(shù)據(jù)經(jīng)Z-score標(biāo)準(zhǔn)化處理后為因變量，通過(guò)SIMCA 14.1軟件偏最小二乘回歸分析［28，29］，見(jiàn)圖6、圖7。結(jié)果表明，蛇尾草指紋圖譜中峰1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、8、10、11與DPPH自由基清除率呈正相關(guān)，峰4、5、7、9則與DPPH自由基清除率呈負(fù)相關(guān)；1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、10號(hào)峰與鐵離子還原能力呈正相關(guān)，而4、5、7、8、9、11號(hào)峰與鐵離子還原能力呈負(fù)相關(guān)。與兩個(gè)藥效均呈正相關(guān)的是1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、10號(hào)峰。VIP是變量重要性值，可評(píng)價(jià)自變量對(duì)因變量解釋的重要程度。對(duì)DPPH自由基清除率貢獻(xiàn)較大的峰從大到小依次是9、2、3（毛蕊花糖苷）、4、10，對(duì)鐵離子還原能力貢獻(xiàn)較大的峰從大到小依次是2、9、1、3（毛蕊花糖苷）、6。結(jié)果表明蛇尾草各成分發(fā)揮抗氧化作用的途徑各不相同，抗氧化作用是多種化學(xué)成分共同發(fā)揮作用的結(jié)果。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)前期分別采用不同濃度甲醇、乙醇和純水作提取溶劑，對(duì)浸漬、回流、超聲等方法的提取效果進(jìn)行了比較，也對(duì)30、60、90 min不同提取時(shí)間進(jìn)行考察，結(jié)果以70%乙醇25 mL超聲提取30 min提取效率較高，峰信息較豐富，峰響應(yīng)值較高。對(duì)乙腈-0.2%磷酸溶液、甲醇-0.1 %磷酸、乙腈-0.1 %磷酸、甲醇-0.2%磷酸不同流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈- 0.2%磷酸進(jìn)行梯度洗脫時(shí)各色譜峰有較好的峰形和分離度。試驗(yàn)對(duì)蛇尾草指紋圖譜進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，對(duì)310、320、330 nm不同檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行考察，在310 nm 波長(zhǎng)下色譜峰較多，響應(yīng)值較高。通過(guò)對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了色譜峰較豐富、分離度好的蛇尾草HPLC指紋圖譜。

試驗(yàn)采用HPLC法建立了22批蛇尾草的指紋圖譜，其中3號(hào)峰為共有峰中最高峰，且保留時(shí)間適宜，故以3號(hào)峰毛蕊花糖苷為參照峰（S），共確定了11個(gè)共有峰，對(duì)22批蛇尾草藥材樣品的指紋圖譜分析可知，其共有峰的相對(duì)保留時(shí)間之間存在的差異比較小，表明本研究建立的蛇尾草藥材指紋圖譜測(cè)定方法重復(fù)性良好，但不同批次蛇尾草藥材相對(duì)峰面積差異較大，藥材質(zhì)量可能受地域環(huán)境、采收季節(jié)等影響較大。22批蛇尾草指紋圖譜的相似度均大于或等于0.834，表明各批次蛇尾草藥材的整體質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定，相似度較好。通過(guò)聚類分析和主成分分析，可知22 批蛇尾草樣品分為2類，S3、S4、S21為一類，其余19批為一類，其可能與各成分含量比例差異有關(guān)。毛蕊花糖苷是蛇尾草藥材中的主要成分，峰響應(yīng)值最大，且是發(fā)揮抗氧化作用的活性成分，為了更好地評(píng)價(jià)蛇尾草藥材的質(zhì)量，在指紋圖譜建立的基礎(chǔ)上，對(duì)22批蛇尾草的毛蕊花糖苷進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果顯示22批蛇尾草中毛蕊花糖苷含量為0.38%～4.82%，平均值為2.50%，受不同產(chǎn)地、采收時(shí)間影響［30-34］，不同批次的蛇尾草中毛蕊花糖苷含量有較大差異。分別采用了DPPH法和 FRAP法對(duì)蛇尾草抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，不同測(cè)定方法的反應(yīng)機(jī)理不同而結(jié)果有差異，且不同批次蛇尾草各成分含量存在差異，因此需結(jié)合指紋圖譜綜合評(píng)價(jià)蛇尾草的質(zhì)量。

本研究采用偏最小二乘回歸分析探討蛇尾草指紋圖譜共有峰與抗氧化活性間的關(guān)聯(lián)，建立譜效間的聯(lián)系，篩選藥效相關(guān)峰，初步確定蛇尾草發(fā)揮抗氧化活性的成分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛇尾草指紋圖譜中峰1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、8、10、11與DPPH自由基清除率呈正相關(guān)，1、2、3（毛蕊花糖苷）、6、10號(hào)峰與鐵離子還原能力呈正相關(guān)，表明蛇尾草各活性成分發(fā)揮抗氧化作用的途徑各不相同，抗氧化作用是多種化學(xué)成分共同發(fā)揮作用的結(jié)果。但因蛇尾草基礎(chǔ)研究較薄弱，蛇尾草抗氧化藥效相關(guān)峰僅指認(rèn)了毛蕊花糖苷，其余藥效相關(guān)峰的鑒別有待進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 《全國(guó)中藥匯編》編寫(xiě)組.全國(guó)中草藥匯編（第二版）（下冊(cè)）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2006.

［2］ 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草（第9冊(cè)） ［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社， 1999.

［3］ 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊(cè)）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979.

［4］ 中國(guó)科學(xué)院華南植物研究所. 常用中草藥彩色圖譜第2冊(cè)［M］.廣州：廣東人民出版社， 1979.

［5］ 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第66卷［M］.北京：科學(xué)出版社， 1979.

［6］ 覃海寧，劉 演.廣西植物名錄［M］.北京：科學(xué)出版社， 2010.

［7］ 廣西壯族自治區(qū)革命委員會(huì)衛(wèi)生局.廣西本草選編（下冊(cè)）［M］.廣西：廣西人民出版社，1974.

［8］ 廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第3卷）［M］.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2017.

［9］ 王美琪，王莉莉，馬雯芳，等.蛇尾草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中成藥，2018，40（4）：857- 861.

［10］ 陳建真，敖志輝，陳 彬，等.木瓜、酒木瓜、光皮木瓜的HPLC指紋圖譜鑒別［J］.中成藥，2022， 44（2）：664-667.

［11］ 徐鑫梅，易 歡，賴先榮，等.小檗皮HPLC指紋圖譜建立及不同品種模式識(shí)別［J］.中成藥，2021， 43（1）：264-267.

［12］ 韓忠耀，張 濤，李 燕，等.不同采收期大接骨丹HPLC指紋圖譜建立及化學(xué)模式識(shí)別［J］.中成藥，2021，43（2）：547-551.

［13］ 張 永，丁 越，張 彤，等.高效液相色譜指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量方法評(píng)價(jià)不同生長(zhǎng)年限肉桂藥材［J］.中成藥，2021，??????? 43（2）：543-546.

［14］ 李 洋，陳 健，張 越，等.基于指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別及多成分含量測(cè)定的白芍藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究［J］.中草藥，2022，53（1）：231-237.

［15］ 黃建猷，胡筱希，麥琬婷，等.指紋圖譜及多成分定量結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別法評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地消瘤藤質(zhì)量［J］.中草藥，2021，52（14）：4334-4340.

［16］ 劉 慧，肖金超，張慶捷，等.金骨蓮膠囊HPLC指紋圖譜及化學(xué)模式識(shí)別研究［J］.中草藥， 2021， 52（14）：4185-4192.

［17］ 黨曉月，朱志軍，王永祥，等.生脈飲HPLC指紋圖譜與化學(xué)模式識(shí)別研究［J］.中藥材， 2020， 43（12）：2988-2991.

［18］ 任明軍，胡云飛，朱永波，等.基于色譜指紋圖譜和含量測(cè)定相結(jié)合的青風(fēng)藤質(zhì)量控制方法研究［J］.中草藥，2022，53（5）：1338-1344.

［19］ YUAN X Y， GAO M Z， XIAO H B， et al. Free radical scavenging activities and bioactive substances of Jerusalem artichoke（ Helianthus tuberosus L.） leaves［J］. Food Chem， 2012，133（1）：10-14.

［20］ 楊 耘，盧雪蕊，宋平順，等.甘草HPLC指紋圖譜及抗氧化活性的譜效關(guān)系［J］.藥物分析雜志， 2022，42（4）：607-617.

［21］ 劉 楨，呂玉秀， 張璟雯， 等. 雀嘴茶中三大酚類成分的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性分析［J］.食品工業(yè)科技，2023，44（8）：405-411.

［22］ 喻 艷，逯海朋，賈亞楠，等.桑椹中酚類物質(zhì)極性分布及抗氧化活性評(píng)價(jià)［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2017，43（1）：73-79.

［23］ PRIOR R L， WU X， SCHAICH K. Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements［J］. J Agric Food Chem， 2005， 53（10）：4290-4302.

［24］ 蔡延渠，董碧蓮，陳利秋，等.桃膠多糖體內(nèi)外抗氧化作用的研究［J］.食品工業(yè)科技，2020，41（13）：53-58.

［25］ 邱俊娜，張 榆，張 雙，等.基于HPLC指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別及定量測(cè)定的夏枯草質(zhì)量控制研究［J］.中草藥，2020，51（10）：2842-2850.

［26］ 周冰倩，高喜梅，楊 穎，等.不同來(lái)源竹茹藥材HPLC指紋圖譜和化學(xué)計(jì)量學(xué)分析［J］.中草藥， 2022，53（3）：853-857.

［27］ 王夢(mèng)嬌，唐婷婷，潘林梅，等.基于HPLC指紋圖譜和化學(xué)模式識(shí)別評(píng)價(jià)不同產(chǎn)瓜蔞質(zhì)量［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2021，38（8）：919-924.

［28］ 孫 飛，吳相親，戚 悅，等.基于偏最小二乘算法探究山楂和焦山楂消食健脾功效成分［J］.中國(guó)中藥雜志， 2023， 48（4）：958-965.

［29］ 卞振華，胡敏敏，袁曉航，等. 基于偏最小二乘回歸法分析五味子抑菌活性部位譜效關(guān)系［J］.中成藥，2019，41（11）：2788-2791.

［30］ 曹 盼，張櫻山，魏學(xué)明，等.不同產(chǎn)地烈香杜鵑的質(zhì)量評(píng)價(jià)［J］.中成藥，2022，44（1）： 306-309.

［31］ 孟祥才，李曉穎，姚 杰，等.生態(tài)脅迫促進(jìn)道地藥材質(zhì)量形成機(jī)制與質(zhì)量評(píng)價(jià)思路［J］.中草藥，2022，53（5）：1587-1594.

［32］ 殷 濤，徐 寧，盧 恒，等.不同產(chǎn)地枸杞子質(zhì)量評(píng)價(jià)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2020，31（7）：1707- 1709.

［33］ 任賽賽，李德強(qiáng)，張志清，等.基于多元統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的不同產(chǎn)地龍船花根及炮制品的含量差異分析［J］.中藥材，2021， 44（12）：2809-2813.

［34］ 李 妍， 何文媛， 王康宇， 等. 基于HPLC多指標(biāo)成分測(cè)定及指紋圖譜多模式識(shí)別方法的北細(xì)辛質(zhì)量分析［J］.中草藥， 2022， 53（1）：238-243.