謝志偉 劉敏 楊放 盧文婷 唐焓嫣 田佩靈 郭曉恒

收稿日期：2022-10-26

基金項(xiàng)目：四川省2021—2023年高等教育人才培養(yǎng)質(zhì)量和教學(xué)改革項(xiàng)目（JG20211106）；新藥中試四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題資助項(xiàng)目（XYZS202201）；成都大學(xué)2021—2023年研究生人才培養(yǎng)質(zhì)量和教學(xué)改革項(xiàng)目（cdjgy2022 004）；2021年四川省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（S202111079066）

作者簡(jiǎn)介：謝志偉（2000—），男，從事中藥新藥開(kāi)發(fā)及質(zhì)量再評(píng)價(jià)研究.Email：1537176619@qq.com

通信作者：郭曉恒（1979—），男，博士，副教授，從事中藥品種、品質(zhì)與資源的開(kāi)發(fā)利用研究.Email：4570806@qq.com

劉敏（1981—），女，從事藥物再評(píng)價(jià)研究.Email：752544391@qq.com

摘要：蟲(chóng)類(lèi)藥作為動(dòng)物藥組成的一部分，其藥理及化學(xué)成分等相關(guān)研究逐漸深入，但動(dòng)物藥研究相較于植物藥偏少，其基礎(chǔ)研究較為薄弱，尤其體現(xiàn)在動(dòng)物藥材品種混亂和質(zhì)量良莠不齊等方面.目前，未見(jiàn)蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究相關(guān)綜述，通過(guò)分析維普資訊和中國(guó)知網(wǎng)2005—2022年中所收錄有關(guān)蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量的相關(guān)文獻(xiàn)，從性狀、顯微鑒別、分子鑒別、光譜鑒別、色譜鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜及安全性評(píng)價(jià)等方面對(duì)蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究現(xiàn)狀進(jìn)行闡述，并對(duì)現(xiàn)有問(wèn)題和未來(lái)發(fā)展前景進(jìn)行分析，以期為蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)研究提供參考.

關(guān)鍵詞：蟲(chóng)類(lèi)藥；質(zhì)量評(píng)價(jià)；色譜鑒別；光譜鑒別；指紋圖譜；含量測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

0引言

動(dòng)物類(lèi)中藥包括昆蟲(chóng)類(lèi)動(dòng)物藥、魚(yú)類(lèi)動(dòng)物藥與爬行類(lèi)動(dòng)物藥等.其中，蟲(chóng)類(lèi)藥作為動(dòng)物藥組成的一部分，其形體較小，多為昆蟲(chóng)類(lèi)，也包括軟體動(dòng)物、環(huán)節(jié)動(dòng)物和節(jié)肢動(dòng)物等［1-2］.蟲(chóng)類(lèi)藥被稱為“血肉有情”“蟲(chóng)蟻飛走”之品，具有特別藥性，是中藥學(xué)中值得深入研究的一個(gè)領(lǐng)域，其大多具有鉆透剔邪、搜風(fēng)通絡(luò)、消腫定痛、祛濕化痰與止痙破血等功效［3-5］.蟲(chóng)類(lèi)藥的應(yīng)用在我國(guó)有著十分悠久的歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》均記載有僵蠶、水蛭與地龍等多種蟲(chóng)類(lèi)藥［6-7］.隨著現(xiàn)代醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，蟲(chóng)類(lèi)藥的藥效及化學(xué)成分等相關(guān)研究不斷深入，蟲(chóng)類(lèi)藥越來(lái)越多的藥用價(jià)值也被發(fā)現(xiàn).例如，僵蠶具有殺菌、抗癌、鎮(zhèn)靜安眠、抗凝血、美容養(yǎng)顏、降血脂與保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等功效［8-9］；地龍具有抗炎、促進(jìn)創(chuàng)面愈合、創(chuàng)傷修復(fù)、抗菌與抗血栓等功效［10-13］；螻蛄具有利尿消腫、抗菌與鎮(zhèn)靜等功效［14-15］.

動(dòng)物藥的研究相比于植物藥較少，其基礎(chǔ)研究較為薄弱，尤其體現(xiàn)在動(dòng)物藥材品種混亂和質(zhì)量良莠不齊等方面［16-19］.目前，對(duì)蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)主要從藥材真?zhèn)?、質(zhì)量?jī)?yōu)劣和安全性等方面進(jìn)行綜合評(píng)價(jià).其中，質(zhì)量?jī)?yōu)劣的鑒別可從化學(xué)成分（如色譜指紋圖譜與電泳法）和生物活性（如生物效價(jià)與藥理指標(biāo)）2個(gè)方面進(jìn)行分析評(píng)價(jià);藥材真?zhèn)舞b別多通過(guò)指紋圖譜和紅外光譜等技術(shù)，并建立灰關(guān)聯(lián)度模型對(duì)藥材質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)；安全性常通過(guò)對(duì)5種有害重金屬元素（鉛、鎘、砷、汞和銅）及黃曲霉毒素檢測(cè)來(lái)評(píng)價(jià);生物活性評(píng)價(jià)研究較少，目前僅冬蟲(chóng)夏草和斑蝥等少數(shù)蟲(chóng)類(lèi)藥研究相對(duì)較多.

本文通過(guò)分析維普資訊和中國(guó)知網(wǎng)2005—2022年中所收錄的有關(guān)蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量的相關(guān)文獻(xiàn)，從性狀與顯微鑒別、分子鑒別、光譜鑒別、色譜鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜及安全性評(píng)價(jià)等方面對(duì)蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究現(xiàn)狀進(jìn)行闡述，并對(duì)現(xiàn)有問(wèn)題和未來(lái)發(fā)展前景進(jìn)行分析，以期為蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)研究提供參考，同時(shí)對(duì)蟲(chóng)類(lèi)藥的養(yǎng)殖、生產(chǎn)與加工等過(guò)程的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化提供參考.

1鑒別

目前蟲(chóng)類(lèi)藥市場(chǎng)不夠規(guī)范，市場(chǎng)上的假冒偽劣品種眾多，且由于品種、生長(zhǎng)環(huán)境與養(yǎng)殖方法等不同，加工和炮制方法各異等原因，造成了市面上蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量差異較大，因而藥材的假冒偽劣品種的鑒定尤為重要.傳統(tǒng)的鑒別方法是通過(guò)來(lái)源、性狀、顯微和理化等對(duì)藥材品種進(jìn)行鑒定，基本是通過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)總結(jié)而來(lái)，不依靠現(xiàn)代的儀器設(shè)備，具有方便快捷等優(yōu)勢(shì)，其依然是快速鑒別藥材真假優(yōu)劣的重要手段［15-19］.

但隨著假冒偽劣產(chǎn)品層出不窮，以僵蠶藥材為例，傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為具有條粗直、色白、味微咸與氣微腥等外觀性狀的僵蠶品質(zhì)較好.然而，近年來(lái)，陸續(xù)出現(xiàn)了黑死蠶和空心僵蠶2種偽品，由于外觀與顯微鑒別均與真實(shí)的僵蠶相似，難以通過(guò)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)來(lái)有效鑒別.在傳統(tǒng)鑒別方法的基礎(chǔ)之上，應(yīng)用現(xiàn)代質(zhì)量鑒別技術(shù)可更加準(zhǔn)確有效地鑒別藥材真?zhèn)?現(xiàn)代鑒別研究中，由于蟲(chóng)類(lèi)藥富含蛋白質(zhì)類(lèi)、脂類(lèi)、核苷類(lèi)與多糖類(lèi)等大分子化學(xué)成分，大大增加了鑒別研究的難度，這也是蟲(chóng)類(lèi)藥鑒定研究相對(duì)較少的原因之一［20-22］.

目前，蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量鑒別的方法主要有傳統(tǒng)鑒別法、色譜鑒別法、光譜鑒別法及分子鑒別法等.其中，薄層色譜（TLC）、紅外光譜、近紅外光譜與脫氧核糖核酸（DNA）分子鑒別等質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)能夠準(zhǔn)確鑒別蟲(chóng)類(lèi)藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣.

1.1性狀與顯微鑒別

性狀與顯微鑒別是藥材鑒別常用的傳統(tǒng)方法，具有簡(jiǎn)單、易行等優(yōu)勢(shì)，但鑒別者需要有豐富的傳統(tǒng)鑒別經(jīng)驗(yàn).性狀鑒別即通過(guò)眼看、手摸、鼻聞、口嘗、水試與火試等便捷實(shí)用的方法對(duì)藥材外觀性狀（包括形狀、大小、色澤、質(zhì)地、氣味與特征等）進(jìn)行鑒別.例如，在對(duì)蟬蛻及其偽品蟪蛄殼的鑒別研究中，通過(guò)性狀鑒別發(fā)現(xiàn)，蟬蛻及其偽品蟪蛄殼的原昆蟲(chóng)在大小、顏色及表面特征上有顯著差異，但藥材特征除大小及胸部背面裂口特征有顯著差別外，其余都無(wú)明顯區(qū)別［23］.顯微鑒別指利用顯微鏡來(lái)觀察藥材內(nèi)部的組織構(gòu)造、細(xì)胞形態(tài)及內(nèi)含物特征，從而達(dá)到鑒別藥材的方法.在中藥鼠婦鑒別及質(zhì)量研究中，通過(guò)顯微觀察鑒別體壁碎片為橙色或黃色，表面具不規(guī)則紋理，有的具點(diǎn)狀小圓孔，部分碎片上可見(jiàn)多數(shù)剛毛，無(wú)色透明［24］.梁珊珊等［25］利用手機(jī)顯微鏡，對(duì)五谷蟲(chóng)的不同部位進(jìn)行圖像采集，利用所得的高清照片對(duì)其微性狀特征進(jìn)行研究分析，有別于傳統(tǒng)微性狀鑒別法使用的體視顯微鏡、電子顯微鏡及生物顯微鏡，手機(jī)顯微鏡不僅具有準(zhǔn)確度高，而且具有操作簡(jiǎn)便、快捷與成本低等優(yōu)點(diǎn)，更適合基層藥檢機(jī)構(gòu)工作的需要，是在微性狀鑒別領(lǐng)域值得推廣應(yīng)用的方法.

1.2分子鑒別

近20多年來(lái)，DNA分子鑒別技術(shù)已廣泛應(yīng)用于中藥的真?zhèn)舞b別與質(zhì)量評(píng)價(jià)等方面，常用的中藥DNA分子鑒別技術(shù)可分為位點(diǎn)特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)和DNA測(cè)序技術(shù).位點(diǎn)特異性PCR技術(shù)是指使用具有種屬特異性的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，只有目的物種可檢測(cè)到擴(kuò)增產(chǎn)物；DNA測(cè)序技術(shù)是指借助于測(cè)序儀器對(duì)DNA序列進(jìn)行解讀.DNA分子鑒別技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便與專(zhuān)屬性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì).對(duì)于蟲(chóng)類(lèi)藥假冒偽劣比較嚴(yán)重的情況，該方法能不依賴于藥材本身的形態(tài)及性狀，排除鑒別者的主觀影響，準(zhǔn)確迅速鑒別藥材真?zhèn)?蔣超等［26］根據(jù)PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）分子鑒別技術(shù)發(fā)現(xiàn)，虻蟲(chóng)的CO1片段可被酶切形成2個(gè)片段，從而特異性地鑒別虻蟲(chóng)真?zhèn)?，從而建立了具有?zhǔn)確、簡(jiǎn)便與重復(fù)性好的用于虻蟲(chóng)與其混偽品的鑒別方法.高開(kāi)銘等［27］引入PCR技術(shù)對(duì)九香蟲(chóng)藥材及其混偽品進(jìn)行鑒別，PCR鑒別驗(yàn)證結(jié)果良好，與指紋圖譜鑒別結(jié)果基本一致，也可為藥材質(zhì)量鑒別提供參考.

1.3光譜鑒別

目前，紅外光譜與近紅外光譜等光譜技術(shù)運(yùn)用于蟲(chóng)類(lèi)藥品種鑒別分析較多，可對(duì)藥材的真?zhèn)危约安煌a(chǎn)地和不同品種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別.紅外光譜與近紅外光譜分析法可以得到樣品中有機(jī)分子所含基團(tuán)的特征振動(dòng)信息，從而對(duì)藥材進(jìn)行多組分的快速鑒別，進(jìn)而進(jìn)行差異分析.例如，李彥希等［28］利用紅外光譜技術(shù)，探究美洲大蠊、全蝎與水蛭紅外光譜差異，其在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，3種藥材的紅外指紋圖譜具有明顯差異，尤其在1 700～1 800 cm-1處峰形存在較大差異，其還結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)對(duì)3種蟲(chóng)類(lèi)藥進(jìn)行快速區(qū)分，此法能夠簡(jiǎn)單快速地鑒別此3種藥材，可為鑒別不同蟲(chóng)類(lèi)藥提供參考.魏道智等［29］利用近紅外光譜技術(shù)，對(duì)螻蛄的不同產(chǎn)地及混種進(jìn)行鑒別分析.因此，近紅外光譜技術(shù)也可作為同種蟲(chóng)類(lèi)藥不同產(chǎn)地與種屬之間的鑒別方法.

1.4色譜鑒別

目前高效毛細(xì)管電泳色譜（HPCE）、TLC、氣相色譜（GC）和高效液相色譜（HPLC）等色譜技術(shù)較多地運(yùn)用于蟲(chóng)類(lèi)藥的鑒別，可對(duì)藥材的真?zhèn)纹芳安煌a(chǎn)地和不同品種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別.TLC可用于蟲(chóng)類(lèi)藥成分的定性分析，區(qū)分藥材混偽品，該法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，是一種鑒別藥材的有效方法.例如，陳偉韜等［30］建立了一種可準(zhǔn)確鑒別金邊土鱉混偽品的TLC法，金邊土鱉在比移值（Rf）為0.4～0.65處，有明顯橙黃色熒光斑點(diǎn).

2含量測(cè)定及指紋圖譜研究

目前蟲(chóng)類(lèi)藥中有效成分和指標(biāo)性成分多采用HPLC進(jìn)行含量測(cè)定，HPLC還可對(duì)多種化學(xué)成分進(jìn)行定量分析，建立HPLC指紋圖譜，HPLC是一種藥材質(zhì)量分析與控制的常用有效方法.例如，逯春玲等［20］建立了九香蟲(chóng)4種核苷酸成分的HPLC含量測(cè)定方法，可為九香蟲(chóng)藥材的質(zhì)量控制提供參考.全蝎、蠐螬、地龍與冬蟲(chóng)夏草等蟲(chóng)類(lèi)藥也均有相關(guān)核苷類(lèi)成分的HPLC含量研究［21-22］.鄭倩倩等［31］采用HPLC對(duì)蠶蛹的多種化學(xué)成分進(jìn)行含量測(cè)定，建立蠶蛹的HPLC指紋圖譜，其通過(guò)18批蠶蛹樣品的HPLC指紋圖譜與對(duì)照品色譜圖進(jìn)行對(duì)比，指認(rèn)出了尿嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤、黃嘌呤與鳥(niǎo)苷等特征峰，并確定了16個(gè)共有峰，建立了穩(wěn)定可靠的蠶蛹HPLC指紋圖譜.HPCE分離待測(cè)物，是由于其帶電量的不同而產(chǎn)生不同的遷移速率，分子量和極性對(duì)其影響較小，其更有利于分離氨基酸、蛋白質(zhì)與多肽等化合物，可應(yīng)用于蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量分析與鑒別.例如，張?jiān)露鸬龋?2］建立了土鱉蟲(chóng)的HPCE指紋圖譜，確立了7個(gè)共有峰為土鱉蟲(chóng)質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，該方法具有簡(jiǎn)便、快速、高效、易清洗與成本低等優(yōu)點(diǎn)，可為其他蟲(chóng)類(lèi)藥的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)研究提供參考［33］.

對(duì)于蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量?jī)?yōu)劣鑒別目前主要集中于對(duì)其活性成分進(jìn)行質(zhì)量分析.例如，趙建國(guó)等［34］按2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）僵蠶項(xiàng)下的檢測(cè)方法，對(duì)10批次僵蠶的水分和灰分進(jìn)行測(cè)定，并且利用紫外—可見(jiàn)分光光度法和高錳酸鉀滴定法分別測(cè)定10批次僵蠶中蛋白質(zhì)和草酸銨含量，結(jié)果表明，水分均符合要求，灰分均不符合要求，而10批次僵蠶蛋白質(zhì)和草酸銨含量差異較大.李峰等［35］采用灰關(guān)聯(lián)度法對(duì)不同品種與不同規(guī)格的20批水蛭藥材的6類(lèi)主要成分含量進(jìn)行關(guān)聯(lián)度測(cè)定，并構(gòu)建水蛭的質(zhì)量評(píng)價(jià)模型.灰關(guān)聯(lián)度法是一種衡量因素之間關(guān)聯(lián)程度的一種方法，其根據(jù)因素之間發(fā)展趨勢(shì)的相似或相異程度進(jìn)行灰色系統(tǒng)分析.土鱉蟲(chóng)、全蝎、九香蟲(chóng)和僵蠶等蟲(chóng)類(lèi)藥也均有采用灰關(guān)聯(lián)度法構(gòu)建藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)模型的相關(guān)研究［36］.

3安全性評(píng)價(jià)

中藥材的安全性評(píng)價(jià)主要指檢測(cè)其內(nèi)源性與外源性有害物質(zhì)，外源性有害物質(zhì)包括有害重金屬元素、農(nóng)藥殘留、黃曲霉毒素及二氧化硫等，內(nèi)源性有害物質(zhì)是指中藥本身所含有的具有毒副作用的化學(xué)成分.目前，蟲(chóng)類(lèi)藥安全性評(píng)價(jià)研究主要集中在對(duì)汞、銅、鉛、鎘與砷等外源性重金屬和有害元素含量測(cè)定分析上，但安全性評(píng)價(jià)研究尚不夠完善.

目前，2020年版《中國(guó)藥典》雖然對(duì)冬蟲(chóng)夏草、地龍、水蛭和僵蠶等蟲(chóng)類(lèi)藥的黃曲霉素或重金素元素等外源性有害物質(zhì)作出了限量規(guī)定，但為了進(jìn)一步保證藥材質(zhì)量，還可建立更準(zhǔn)確、更完善的有害元素安全性分析方法，如在對(duì)冬蟲(chóng)夏草砷超標(biāo)問(wèn)題的研究上，目前大多數(shù)以測(cè)定冬蟲(chóng)夏草的總砷含量為主，極少?gòu)纳榇嬖诘男螒B(tài)和生物吸收占比方面對(duì)砷的安全性進(jìn)行精準(zhǔn)分析評(píng)價(jià).除對(duì)蟲(chóng)類(lèi)藥進(jìn)行有害重金屬元素檢測(cè)外，還需從農(nóng)藥殘留、黃曲霉毒素、二氧化硫及內(nèi)源性有害物質(zhì)等多個(gè)方面對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，完善用藥安全性［37］.

4結(jié)語(yǔ)

目前，蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)還不完善，市場(chǎng)上的假冒偽劣品種眾多，膜分離、蛋白質(zhì)組學(xué)與蛋白質(zhì)鑒別標(biāo)記分析等技術(shù)有望在蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中取得新的突破.蟲(chóng)類(lèi)藥的品種、生長(zhǎng)環(huán)境與養(yǎng)殖方法的不同，加工和炮制方法各異等因素都是導(dǎo)致藥材有效成分含量不合格、灰分含量不合格及重金屬含量超標(biāo)等問(wèn)題的原因，蟲(chóng)類(lèi)藥質(zhì)量控制的提升還需在藥材養(yǎng)殖、生產(chǎn)、加工、運(yùn)輸與儲(chǔ)存等各環(huán)節(jié)進(jìn)一步規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化.例如，冬蟲(chóng)夏草的采集與儲(chǔ)存方式，地龍的飼喂方式、采收時(shí)間和炮制方法等差異能明顯影響藥材的品質(zhì).

另外，我國(guó)蟲(chóng)類(lèi)藥有效成分的研究也存在較多問(wèn)題，一方面表現(xiàn)為對(duì)其活性成分研究較少，僅對(duì)斑蝥、冬蟲(chóng)夏草、僵蠶與地龍等少數(shù)蟲(chóng)類(lèi)藥研究相對(duì)較多；另一方面蟲(chóng)類(lèi)藥在藥理方面的研究也偏少，對(duì)于一些有效成分研究比較深入的蟲(chóng)類(lèi)藥，可以加強(qiáng)臨床應(yīng)用研究，并對(duì)有效成分進(jìn)行提取分離等，以期開(kāi)發(fā)新藥產(chǎn)品.對(duì)于蟲(chóng)類(lèi)藥活性成分產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)研究，還可從生物化學(xué)、中藥藥理學(xué)與毒理學(xué)等多學(xué)科角度綜合考慮.相信隨著醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，對(duì)傳統(tǒng)蟲(chóng)類(lèi)藥的有效成分與藥效作用會(huì)有更加深入系統(tǒng)的研究.

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（責(zé)任編輯：伍利華）