張文瑞，楊爽，呂新亮

內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院風(fēng)濕科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是以慢性、對(duì)稱(chēng)性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的進(jìn)行性、侵襲性的自身免疫性疾?。?-3］。RA導(dǎo)致的滑膜炎持久反復(fù)發(fā)作，破壞關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能障礙，因此該病具有很高的致畸率［4-6］。RA屬于中醫(yī)“痹證”“鶴膝風(fēng)”等范疇，中醫(yī)藥治療具有辨證論治、審證求因的特點(diǎn)，以其多途徑、多靶點(diǎn)、整合效應(yīng)的優(yōu)勢(shì)在RA的治療中發(fā)揮著日益重要的作用［7-11］，但中醫(yī)藥治療RA多缺乏明確的作用機(jī)制。動(dòng)物模型作為實(shí)驗(yàn)研究的基出，對(duì)開(kāi)展疾病的發(fā)病機(jī)制及治療機(jī)制研究有著重要的意義。人體和疾病存在復(fù)雜性和不可控性，臨床證候研究中存在許多未知因素。若要開(kāi)展證候形成機(jī)制及中藥作用機(jī)制的科學(xué)性研究，就必須構(gòu)建具有中醫(yī)屬性的動(dòng)物模型。本文擬對(duì)近年RA中醫(yī)證型動(dòng)物模型進(jìn)行綜述，以期為未來(lái)更全面的中醫(yī)證型動(dòng)物模型提供參考。

1 中醫(yī)證型動(dòng)物模型

徐成林等［12］結(jié)合新疆高寒地區(qū)的特點(diǎn)，模擬自然界的風(fēng)寒濕環(huán)境，對(duì)健康家兔的后肢進(jìn)行風(fēng)寒濕痹證造模。造模選擇在冬季進(jìn)行，將家兔后腿放入環(huán)境海綿的造模箱孔內(nèi)，打開(kāi)噴霧、水源，調(diào)節(jié)室溫控制在（7±2）℃；相對(duì)濕度為95%，風(fēng)力5～6級(jí)，每天持續(xù)刺激造模部位5 h，持續(xù)刺激5天。造模后關(guān)節(jié)組織的滑膜細(xì)胞增生活躍、胞漿內(nèi)含大量溶酶體、滑膜下有嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞活躍，與未造模的前腿有著顯著差異。但該實(shí)驗(yàn)建立的動(dòng)物模型為單純性關(guān)節(jié)炎模型，與人RA表現(xiàn)、客觀指標(biāo)及病理變化存在一定的差異。

2 病證結(jié)合動(dòng)物模型

模擬自然環(huán)境進(jìn)行造模只能使模型在病因?qū)W上與人類(lèi)相似，如何使模型的發(fā)病機(jī)制、發(fā)病過(guò)程、臨床癥狀、免疫特點(diǎn)與人類(lèi)相似是建立RA中醫(yī)動(dòng)物模型需解決的關(guān)鍵問(wèn)題。病證結(jié)合的動(dòng)物模型既有西醫(yī)疾病的診斷特征，又有中醫(yī)證候的病因病機(jī)及不同表現(xiàn)，成為目前RA中醫(yī)動(dòng)物模型建立的首選方法［13-14］。RA國(guó)際中醫(yī)臨床指南［15］及RA病證結(jié)合診療指南［16］將RA辨證為風(fēng)濕痹阻證、寒濕痹阻證、濕熱痹阻證、痰瘀痹阻證、瘀血阻絡(luò)證、氣血兩虛證、肝腎不足證、氣陰兩虛證。目前多見(jiàn)的造模證型也是圍繞以上證型開(kāi)展。而RA模型的建立多選擇佐劑型關(guān)節(jié)炎模型（adjuvant arthritis，AA）及膠原型關(guān)節(jié)炎模型（collageninduced arthritis，CIA）［17-20］。

3 RA模型

3.1 AA模型 AA大鼠造模方法是將含減毒卡介苗的弗氏佐劑注射至足趾關(guān)節(jié)皮下，導(dǎo)致局部免疫炎癥反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物，刺激T細(xì)胞激活、分化、增殖，模擬RA免疫炎癥病理變化反應(yīng)過(guò)程，發(fā)揮特異性免疫反應(yīng)效應(yīng)。AA模型發(fā)病過(guò)程同時(shí)涉及細(xì)胞免疫反應(yīng)及體液免疫反應(yīng)，累及部位不僅限于關(guān)節(jié)，同時(shí)可見(jiàn)心、肺、免疫器官等多系統(tǒng)受累表現(xiàn)，臨床、病理等方面與RA極為相似［21-23］。劉磊等［24］研究發(fā)現(xiàn)，AA大鼠同時(shí)也存在血小板病變。劉琪等［25］研究發(fā)現(xiàn)，AA模型同時(shí)受到性別的影響，雌性SD大鼠體質(zhì)量下降程度高于雄性SD大鼠；而踝關(guān)節(jié)病理評(píng)分、脾臟評(píng)分均高于雄鼠。

3.2 ClA模型 1977年Trentham等首先建立了Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型［26］。該模型的兩個(gè)重要特征是破壞耐受性及產(chǎn)生自身和膠原自身抗體，因其在免疫機(jī)制、關(guān)節(jié)病理改變、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)上與人類(lèi)RA最為相似［27-28］，CIA成為RA研究的金標(biāo)準(zhǔn)［29-30］。CIA模型還具有操作簡(jiǎn)單、病變持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)、滑膜增生及軟骨破壞等繼發(fā)性病變特征明顯、造模成功率高等特點(diǎn)，因此CIA在科研實(shí)驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用［31-32］。

CIA模型常用牛Ⅱ型膠原蛋白（calf Ⅱ collagen，CⅡ）分別與不完全弗氏佐劑（incomplete Freund's adjuvant，IFA）或完全弗氏佐劑混合（complete Freund's adjuvant，CFA）乳化以制備［33-34］。筆者通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，完全弗氏佐劑應(yīng)用更為廣泛。但郭帥［35］比較CⅡ聯(lián)合兩種佐劑制備CIA大鼠模型發(fā)現(xiàn)，CⅡ+IFA模型不良反應(yīng)更小，更適合作為大量復(fù)制的CIA動(dòng)物模型。制備CIA模型時(shí)需先將CⅡ與等體積的IFA或CFA在4 ℃無(wú)菌條件下充分混勻乳化，配制溶液濃度為1 g/L（即1 mL溶劑含有CⅡ 1 mg），隨后對(duì)造模動(dòng)物進(jìn)行皮內(nèi)免疫注射，選擇多個(gè)位置多次少量注射，總量約為200 μL，此為初次免疫；7天后以同樣方案于不同部位100 μL加強(qiáng)免疫1次［36］。

3.3 病證結(jié)合模型

3.3.1 風(fēng)、寒、濕痹病證結(jié)合動(dòng)物模型 《素問(wèn)·痹論》篇云：“痹之安生？風(fēng)、寒、濕三氣雜至，合而為痹也。”風(fēng)、寒、濕是導(dǎo)致痹證的重要因素。呂愛(ài)平等［37］采用冷水游泳聯(lián)合Ⅱ型膠原建立風(fēng)寒濕痹大鼠模型。首先將大鼠放入15 ℃的冷水中游泳7 min，每日1次，連續(xù)7天，隨后取1.5 mg/mL的Ⅱ型膠原粗提取物的乳化混合物0.125 mL于大鼠尾部、踝部多處皮內(nèi)注射，每只動(dòng)物注射1次，含Ⅱ型膠原粗提取物約0.18 mg。造模動(dòng)物病理變化呈滑膜受損期和軟骨損傷期，45天后造模關(guān)節(jié)病理可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞，甚至出現(xiàn)軟骨下骨細(xì)胞變性、壞死。

肖長(zhǎng)虹等［38］認(rèn)為，呂氏造模方法僅有炎癥浸潤(rùn)程度的病理觀察，而未對(duì)臨床表現(xiàn)的差異進(jìn)行報(bào)道。其用0.1 mL冰醋溶解2 mg/mL的Ⅱ型膠原，與等體積的IFA混合后再加入3 mg/mL卡介苗研磨、乳化成膠原，每只大鼠于尾部、頸背部皮內(nèi)多點(diǎn)注射膠原共500 μg；7天后再于尾根部及背部皮內(nèi)注射膠原200 μg進(jìn)行加強(qiáng)免疫。大鼠從接受第1次膠原注射開(kāi)始，每天于造模箱中接受風(fēng)、寒、濕刺激1次，每次1 h，刺激條件為風(fēng)速18 m/s，相對(duì)濕度100%，溫度7～10 ℃，共刺激9天。第7～9天時(shí)每只鼠雙后肢踝關(guān)節(jié)以下均勻涂抹纖維素糊各30 μg（含葡萄球菌腸毒素B 5 μg），即每只鼠每次外涂SEB 10 μg，再進(jìn)行風(fēng)、寒、濕刺激。造模后模型組炎癥積分顯著增加，炎癥關(guān)節(jié)表面溫度顯著降低，與中醫(yī)證型的臨床表現(xiàn)類(lèi)似。

魏艷霞［39］在前期研究中制作了規(guī)范、可控的風(fēng)、寒、濕造模裝置——人工智能氣候箱，并明確優(yōu)化了風(fēng)、寒、濕刺激條件及刺激時(shí)間。其選用SPF級(jí)雄性大鼠放入特制的人工氣候造模箱（上海汗諾PRX-150B）中接受風(fēng)、寒、濕刺激14天，每天1次，每次4 h，條件為風(fēng)速5 m/s，濕度90%～95%，溫度0～2 ℃。第15天大鼠尾根部皮下注射0.1 mL含200 μg熱滅活菌結(jié)核桿菌（Mtb）的CFA誘導(dǎo)佐劑型關(guān)節(jié)炎（adjuvantinduced arthritis，AIA）模型，繼續(xù)風(fēng)寒濕刺激30天。造模成功后大鼠出現(xiàn)精神萎靡、畏寒喜暖、飲食飲水量減少、大便質(zhì)稀，耳緣有風(fēng)濕結(jié)節(jié)、舌質(zhì)紫黯、舌底絡(luò)脈曲張、尾根部潰爛等。與RA的AIA大鼠模型相比，受風(fēng)、寒、濕刺激的大鼠足腫脹容積明顯增加，平均發(fā)病時(shí)間提前，病理程度明顯加重，實(shí)驗(yàn)后期殘疾率明顯上升。

朱興旺［40］認(rèn)為，目前風(fēng)、寒、濕痹模型多集中在模型與人類(lèi)RA病理過(guò)程、寒痹證的相似相符程度及中藥方證研究上，而較少關(guān)注風(fēng)、寒、濕等外界環(huán)境的致病實(shí)質(zhì)及其激發(fā)、加劇關(guān)節(jié)炎的致病機(jī)制。因此朱興旺的研究以CIA大鼠為基出，探討風(fēng)、寒、濕對(duì)中醫(yī)證候的影響及致病實(shí)質(zhì)。實(shí)驗(yàn)選擇SPF級(jí)SD大鼠，每只大鼠于尾根部注射0.2 mL雞Ⅱ型膠原+CFA乳劑做首次免疫；第7天加強(qiáng)免疫。于加強(qiáng)免疫后接受人工氣候箱風(fēng)、寒、濕干預(yù)，條件為：溫度8 ℃，濕度90%，風(fēng)速5 m/s，每天2次，每次2 h，共64 h。造模后大鼠AI值于首次免疫后28天左右時(shí)達(dá)到峰值，紅腫消退率與普通模型組無(wú)差異。風(fēng)、寒、濕組大鼠踝關(guān)節(jié)基本無(wú)組織腫脹，有較明顯的骨侵襲，但仍有關(guān)節(jié)間隙。朱興旺［40］認(rèn)為，受風(fēng)、寒、濕環(huán)境刺激的CIA大鼠未能模擬出人類(lèi)RA寒痹證型的證候特點(diǎn)。

3.3.2 風(fēng)濕熱痹病證結(jié)合動(dòng)物模型 肖長(zhǎng)虹等［38］建造風(fēng)、濕、熱痹病證結(jié)合動(dòng)物模型與風(fēng)、寒、濕痹模型相似，即接受膠原免疫刺激后在造模箱中接受風(fēng)濕熱造模刺激。條件為：風(fēng)速18 m/s，相對(duì)濕度100%，溫度36～38 ℃，刺激9天。7～9天時(shí)同樣予纖維素糊各30 μg（含葡萄球菌腸毒素B5 μg）于雙后肢踝關(guān)節(jié)以下，再予風(fēng)、濕、熱刺激。造模結(jié)束后模型動(dòng)物炎癥關(guān)節(jié)99mTc含量顯著增加，炎癥關(guān)節(jié)表面溫度升高。

梁江洪等［41］使用0.1 mL/L冰醋酸充分溶解牛Ⅱ型膠原蛋白，配置成4 mg/L的溶液，再按1∶1體積與弗氏不完全佐劑混合、振蕩并充分乳化，制成CⅡ乳劑。選擇SPF級(jí)雌性Wistar大鼠，于頸、背、尾部多點(diǎn)皮內(nèi)注射CⅡ乳劑0.25 mL致炎，并于7天后按上述方法再次免疫。大鼠于首次免疫后開(kāi)始在自制造模箱內(nèi)接受風(fēng)濕熱刺激，每天1 h，條件為：風(fēng)速5 m/s，相對(duì)濕度90%，溫度（37±1）℃。造模后大鼠關(guān)節(jié)表面溫差顯著增高、關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)及TNF-α、IL-1β顯著升高。

朱興旺等［42］使用SPF級(jí)SD大鼠建立風(fēng)、濕、熱痹模型，每只大鼠于尾根部注射0.2 mL雞Ⅱ型膠原+CFA乳劑做首次免疫；第7天加強(qiáng)免疫。于加強(qiáng)免疫后接受人工氣候箱風(fēng)、寒、濕干預(yù)，條件為：溫度36 ℃，濕度90%，風(fēng)速5 m/s，每天2次，每次2 h，共64 h。造模結(jié)束后大鼠AI值于首次免疫后19～21天時(shí)達(dá)到峰值，最高為11分，峰值可維持10天左右，紅腫消退率最慢，至觀察期結(jié)束時(shí)仍能觀察到后肢關(guān)節(jié)腫脹，AI約為4分。且踝關(guān)節(jié)有輕度軟組織腫脹、嚴(yán)重骨侵襲，關(guān)節(jié)基本融合，評(píng)分較普通模型組顯著增高。該研究結(jié)果表明，較長(zhǎng)時(shí)間的風(fēng)、濕、熱刺激能使CIA大鼠關(guān)節(jié)紅腫程度加重，并使其炎癥峰值提前、持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，結(jié)束環(huán)境刺激后關(guān)節(jié)炎癥狀緩慢消退。同時(shí)CIA大鼠的基出屬性為熱，風(fēng)、濕、熱刺激能加重?zé)嶙C表現(xiàn)，與臨床上熱痹“遇熱加重，遇寒減輕”說(shuō)法一致，且風(fēng)濕熱的刺激可以模擬人類(lèi)RA熱痹發(fā)病過(guò)程，其致病機(jī)理可能與上調(diào)HSP-70有關(guān)。

3.3.3 內(nèi)生痰濕病證結(jié)合動(dòng)物模型 周游［43］選擇SPF級(jí)雄性DBA/1小鼠，先予高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)4周，然后在小鼠尾根部皮下多點(diǎn)注射0.2 mg/只Ⅱ型膠原溶液與等體積CFA混合乳化的CIA佐劑。首次免疫當(dāng)天記為第1天，第21天以0.1 mg/只劑量于小鼠尾根部皮下多點(diǎn)注射激發(fā)免疫。造模后痰濕CIA小鼠身體劇烈顫抖、瞇眼遲鈍不喜動(dòng)、弓背、大便質(zhì)稀。與正常組相比，痰濕CIA小鼠肥胖指數(shù)差異明顯，關(guān)節(jié)AI指數(shù)增長(zhǎng)迅速；關(guān)節(jié)組織病理可見(jiàn)關(guān)節(jié)面粗糙、大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與融合，血管翳布滿(mǎn)關(guān)節(jié)間隙。

3.3.4 痰瘀痹阻病證結(jié)合動(dòng)物模型 唐先平［44］使用雌性SPF級(jí)SD大鼠建立痰瘀痹阻證動(dòng)物模型。首先取無(wú)水羊毛脂40 mL、液體石蠟60 mL高壓消毒后按8 mg/mL加入滅活卡介苗，制成完全弗氏佐劑（complete Freund's adjuvant，F(xiàn)CA）。第1周大鼠單日喂飼甘藍(lán)，10～15 g/只，雙日灌喂精煉豬油4 mL/只，第8天于每只大鼠右后跖皮下注射0.1 mLFCA，每只動(dòng)物只注射1次。其后繼續(xù)予高脂飼料喂養(yǎng)。造模后大鼠出現(xiàn)體毛無(wú)光澤、畏寒蜷縮、懶動(dòng)、進(jìn)食減少、時(shí)有溏便，舌根部出現(xiàn)厚膩苔和舌質(zhì)紫暗，并伴有足跖腫脹、近端趾間關(guān)節(jié)及其他肢體關(guān)節(jié)腫脹，耳部及尾根部出現(xiàn)紅斑及/或結(jié)節(jié)。痰瘀痹阻證大鼠出現(xiàn)t-PA上升、PAI下降的趨勢(shì)，證明該模型影響到血凝纖溶系統(tǒng)，出現(xiàn)高凝（即血瘀）狀態(tài)。

3.3.5 血瘀證病證結(jié)合動(dòng)物模型 李茜等［45］認(rèn)為，RA皮下結(jié)節(jié)或瘀斑是久病瘀阻經(jīng)絡(luò)，脈絡(luò)不通之象，故以雌性SD大鼠在Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的CIA關(guān)節(jié)模型的基出上，結(jié)合長(zhǎng)期小劑量注射鹽酸腎上腺素和4 ℃冷水應(yīng)激的方法，建立RA血瘀證動(dòng)物模型。首先將一定量Ⅱ型膠原蛋白溶解于0.1 mol/L的乙酸中，使其濃度為1 g/L，再與等體積的CFA溶液混合并完全乳化。初次免疫時(shí)將此乳化劑按0.75 mL/kg注射于模型組大鼠右側(cè)膝關(guān)節(jié)腔、足跖皮內(nèi)、背部及尾部，同時(shí)以腎上腺素注射液0.1 mg/kg皮下注射大鼠，2 h后置于4 ℃冷水中游泳5 min，連續(xù)14天，初次免疫后14天再按0.5 mL/kg劑量再次注射乳化劑于大鼠背部及尾根部皮下以加強(qiáng)免疫。造模后大鼠日漸畏寒喜暖、蜷縮少動(dòng)、尾爪紫暗、膝關(guān)節(jié)、足趾、踝關(guān)節(jié)紅腫、屈伸不利、活動(dòng)受限，舌質(zhì)紫暗或見(jiàn)瘀點(diǎn)。造模第4天足趾即出現(xiàn)腫脹，第24天達(dá)到高峰，伴血清RF、TNF-α、TX-A2濃度增高；全血黏度及血漿黏度均高于正常組；膝關(guān)節(jié)軟骨表面不光整，淺表層可見(jiàn)增生纖維化，部分可見(jiàn)裂紋；軟骨全層細(xì)胞減少，細(xì)胞排列紊亂，分布不均，部分細(xì)胞核壞死，部分軟骨陷窩消失；軟骨基質(zhì)染色淺且不均勻；潮線模糊、不規(guī)則，附近有血管穿過(guò)，且軟骨組織Mankin's評(píng)分較正常組增高。

3.3.6 脾虛證病證結(jié)合動(dòng)物模型 杜中平等［46］采用腹腔注射利血平聯(lián)合CIA建立RA脾虛證動(dòng)物模型。選擇SPF級(jí)SD大鼠，給予利血平0.5 mg/（kg·d）腹腔注射［47］，14天后于尾根部皮下注射乳化后的混合物（2 mg/mL牛Ⅱ型膠原加入等容積不完全弗氏佐劑中，使牛Ⅱ型膠原終濃度為1 mg/mL）0.2 mL/只，即 200 μg牛Ⅱ型膠原/只，7天后按0.1 mL/只，即100 μg牛Ⅱ型膠原/只，于尾根部皮下加強(qiáng)免疫1次。造模后大鼠出現(xiàn)精神萎靡，瞇眼，背毛枯疏無(wú)光澤，弓背蜷縮，踝關(guān)節(jié)紅腫，倦怠、懶動(dòng)，喜聚堆，飲食減少，體質(zhì)量下降，稀便。大鼠回腸病理示小腸絨毛排列紊亂，數(shù)量減少，長(zhǎng)短、寬窄不一，被覆上皮可見(jiàn)有多量杯狀細(xì)胞，腸腔內(nèi)可見(jiàn)大量剝脫、退變、壞死的絨毛碎片。壞死組織內(nèi)見(jiàn)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腸腔內(nèi)可見(jiàn)剝脫。與正常對(duì)照組相比，造模組大鼠T細(xì)胞增殖能力和LPS刺激后B細(xì)胞增殖能力明顯升高，外周血CD4/CD8明顯升高、CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞明顯下降，關(guān)節(jié)腫脹度與關(guān)節(jié)病理?yè)p傷程度加重，抗Ⅱ型膠原抗體、IL-10水平升高。因此該模型既有明顯的脾虛癥狀，又有RA的特征。

3.3.7 腎虛證病證結(jié)合動(dòng)物模型 趙宏艷等［48］建立羥基脲致腎虛RA大鼠模型及去勢(shì)致腎虛RA大鼠模型。具體如下：去勢(shì)腎虛組選擇SPF級(jí)SD大鼠，摘除雙側(cè)卵巢，術(shù)后28天于尾根部皮下注射乳化后的混合物（2 mg/mL牛Ⅱ型膠原加入等容積不完全弗氏佐劑中，使牛Ⅱ型膠原終濃度為1 mg/mL）0.2 mL/只，即200 μg牛Ⅱ型膠原/只，7天后按0.1 mL/只，即100 μg牛Ⅱ型膠原/只，于尾根部皮下加強(qiáng)免疫1次。羥基脲腎虛模型予羥基脲375 mg/（kg·d）灌胃，灌胃17天后按上述方法進(jìn)行CIA模型復(fù)制。兩種造模方法均可使大鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫、變形、活動(dòng)減少，弓背蜷縮、體毛枯疏、扎堆及飲食減少、肛周污穢等，與人類(lèi)腎虛證候相似，且能升高大鼠關(guān)節(jié)腫脹度，降低IL-6含量、升高IL-10及INF-γ含量，但去勢(shì)組INF-γ含量高于羥基脲組。因此趙宏艷等［48］認(rèn)為去勢(shì)法建立的腎虛RA模型優(yōu)于羥基脲腎虛模型。

目前尚無(wú)文獻(xiàn)對(duì)RA氣血兩虛證、肝腎不足證、氣陰兩虛證的造模方法進(jìn)行詳細(xì)論述。

4 病病結(jié)合動(dòng)物模型

RA是一種易致殘的自身免疫性疾病，關(guān)節(jié)反復(fù)疼痛及功能障礙不僅影響患者的生理健康，還會(huì)影響患者的心理健康［49-50］。研究表明，RA患者抑郁癥的發(fā)病率為32.7%～55.4%，但只有11.7%的患者接受了抗抑郁治療［51-52］。我國(guó)RA伴發(fā)抑郁癥的發(fā)病率高達(dá)44.7%，高于全球平均水平［53-54］。RA伴發(fā)抑郁癥發(fā)病機(jī)制尚不明確，因此建立一個(gè)可靠的動(dòng)物模型將對(duì)研究RA伴發(fā)抑郁癥起到重要的作用。

鄭琴［55］認(rèn)為，RA伴發(fā)抑郁癥的病機(jī)為肝腎虧虛，以腎虛為要，同時(shí)伴有瘀阻脈絡(luò)，因此采用膠原誘導(dǎo)聯(lián)合慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激復(fù)合孤養(yǎng)制備RA伴發(fā)抑郁癥大鼠模型。首先制備CIA大鼠模型。將牛Ⅱ型膠原溶解于乙酸，此溶液與等量的CFA混合，制備成牛Ⅱ型膠原終濃度為1 mg/mL的混合物，并將其充分乳化，取此混合物于大鼠左足底皮下按0.1 mL/只注射，共含Ⅱ型膠原100 ug/只。其后將大鼠單籠孤養(yǎng)飼養(yǎng)7天后，再予21天的慢性不可預(yù)知的溫和應(yīng)激，包括：將大鼠予以?shī)A尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、45 ℃環(huán)境5 min、晝夜顛倒24 h、水平振蕩30 min（160次/min）、4 ℃冰水游泳5 min的7種方法刺激。大鼠每天接受1種刺激，連續(xù)3周。造模后大鼠呆滯少動(dòng)、飲食減少、體質(zhì)量明顯減輕。大鼠關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)明顯高于正常組。大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜形態(tài)學(xué)見(jiàn)滑膜組織充血、水腫，滑膜細(xì)胞排列不規(guī)則，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維組織增生，有血管翳形成，有軟骨和骨質(zhì)破壞模型組滑膜組織高度增生、充血、水腫，有豐富的血管翳形成，細(xì)胞排列不規(guī)則，可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。且伴有5-HT、NA、DA、5-HIAA的降低，證明下丘腦單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的下降。

石磊［56］認(rèn)為，細(xì)胞因子IL-27、IL-17和IL-10可能在RA伴抑郁癥發(fā)病中起了重要的作用［57-58］。同樣他采取在CIA大鼠模型基出上聯(lián)合慢性不可預(yù)知溫和刺激抑郁癥模型建立RA共病抑郁癥復(fù)合模型，并參考改進(jìn)Fu［59］的CIA造模方法，雌性Wistar大鼠尾根部皮下注射100 mg含4 mg/mL變性分枝桿菌的牛Ⅱ型膠原（用等體積的CFA充分乳化）并壓迫使乳化液充分吸收。在CIA誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型基出上，將大鼠單籠孤養(yǎng)7天后，再給予21天慢性不可預(yù)知的溫和刺激。石磊［56］建立抑郁癥的慢性不可預(yù)知溫和刺激方法參考改進(jìn)WANG等［60］的方法：夾尾1 min，禁水、禁食24 h，4 ℃冰水游泳5 min，45°傾斜鼠籠24 h，水平震蕩20 min（頻率80次/分），閃光刺激（頻率3次/分），電擊（電流強(qiáng)度1.0 mA，頻率1次/分）。大鼠每天接受1種刺激，7天為1個(gè)周期，連續(xù)刺激3個(gè)周期。造模后4天大鼠出現(xiàn)始發(fā)于后足的對(duì)稱(chēng)性、多關(guān)節(jié)紅腫，后期可見(jiàn)關(guān)節(jié)強(qiáng)直、功能障礙，并伴有蜷縮少動(dòng)，毛發(fā)粗糙、無(wú)光澤，膽小易驚，體質(zhì)量減輕，同時(shí)出現(xiàn)飲用糖水量減少、曠野試驗(yàn)刺激水平評(píng)分下降，IL-27、IL-17和IL-10水平升高等表現(xiàn)。

5 展望

由目前研究可見(jiàn)，目前RA中醫(yī)動(dòng)物模型研究熱點(diǎn)集中在病證結(jié)合動(dòng)物模型，尤其是風(fēng)寒濕熱痹證模型［61-63］，但這些動(dòng)物模型多是單純的西醫(yī)的“病”及中醫(yī)的“證”的疊加，模型制作方法簡(jiǎn)單，并未從本質(zhì)上探索病和證的關(guān)系，也未考慮到遺傳因素及體質(zhì)因素對(duì)中醫(yī)證候的影響。且對(duì)于造模動(dòng)物的選擇各家也各執(zhí)一詞，雖多選擇大鼠CIA模型，但也有對(duì)雌雄大鼠的不同選擇體現(xiàn)激素和干預(yù)條件耐受性的不同，缺乏統(tǒng)一、明確的標(biāo)準(zhǔn)。

由于RA的復(fù)雜性及中醫(yī)證型的多樣性，動(dòng)物模型僅能代表病證的某些方面；隨著研究目的的不同，所需的動(dòng)物模型也不盡相同。因此還應(yīng)該進(jìn)行進(jìn)一步的探索，以期能建立真正符合中醫(yī)證型、體現(xiàn)中醫(yī)精髓的RA中醫(yī)動(dòng)物模型。