董揚(yáng) 傅應(yīng)亞 方偉

作者簡(jiǎn)介：董揚(yáng)（1987.4-），女，重慶人，碩士，主治醫(yī)師，主要從事慢性阻塞性肺部疾病、支氣管哮喘研究

通訊作者：方偉（1981.3-），男，重慶人，本科，主治醫(yī)師，主要從事慢性阻塞性肺病、支氣管哮喘、肺癌研究

摘要：目的? 探討miR-146、miR-26在支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑中的作用及機(jī)制。方法? 收集2021年3月-2023年1月在重慶市南岸區(qū)人民醫(yī)院就診的75例支氣管哮喘患者（哮喘組）和25名健康體檢者（對(duì)照組），檢測(cè)血液和呼吸中的相關(guān)分子，用HRCT掃描測(cè)量氣道的形狀和大小。分析miR-146、miR-26水平與哮喘嚴(yán)重程度、氣道炎癥及氣道重塑的相關(guān)性。結(jié)果? 哮喘組miR-146、miR-26水平低于對(duì)照組，且隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加而降低（P＜0.05）。哮喘組FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)均高于對(duì)照組，且隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加而升高（P＜0.05）。miR-146、miR-26水平與FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論? miR-146、miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑有密切關(guān)系，可能通過(guò)調(diào)節(jié)T2型免疫反應(yīng)和一氧化氮合成酶表達(dá)參與哮喘的發(fā)生和發(fā)展。測(cè)定外周血中miR-146、miR-26水平可能有助于評(píng)估哮喘患者的病情和治療效果。

關(guān)鍵詞：支氣管哮喘；微小RNA；呼出氣一氧化氮；嗜酸性粒細(xì)胞；氣道重塑

中圖分類(lèi)號(hào)：R526.2+5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.09.025

文章編號(hào)：1006-1959（2024）09-0130-04

Relationship Between miR-146， miR-26 Levels and Airway Inflammation，

Airway Remodeling in Patients with Bronchial Asthma

DONG Yang1，F(xiàn)U Ying-ya2，F(xiàn)ANG Wei1

（1.Department of Respiratory Medicine，Chongqing Nan'an District People's Hospital，Chongqing 400000，China;

2.Department of Respiratory Medicine，Chongqing Seventh People's Hospital，Chongqing 400000，China）

Abstract：Objective? To investigate the role and mechanism of miR-146， miR-26 in airway inflammation and airway remodeling in patients with bronchial asthma.Methods? A total of 75 patients with bronchial asthma （asthma group） and 25 healthy subjects （control group） were collected from March 2021 to January 2023 in Chongqing Nan'an District People's Hospital. The related molecules in blood and respiration were detected， and the shape and size of the airway were measured by HRCT scan. The correlation between miR-146， miR-26 levels and asthma severity， airway inflammation and airway remodeling was analyzed.Results? The levels of miR-146 and miR-26 in the asthma group were lower than those in the control group， and decreased with the increase of asthma severity （P<0.05）. The levels of FeNO， EOS%， IgE and HRCT parameters in the asthma group were higher than those in the control group， and increased with the increase of asthma severity （P<0.05）. The levels of miR-146 and miR-26 were negatively correlated with FeNO level， EOS%， IgE level and HRCT parameters （P<0.05）.Conclusion? The levels of miR-146， miR-26 are closely related to airway inflammation and airway remodeling in patients with bronchial asthma， which may be involved in the occurrence and development of asthma by regulating T2 immune response and nitric oxide synthase expression. The determination of miR-146 and miR-26 levels in peripheral blood may be helpful to evaluate the condition and therapeutic effect of asthma patients.

Key words：Bronchial asthma;MicroRNA;Exhaled nitric oxide;Eosinophils;Airway remodeling

支氣管哮喘（bronchial asthma， BA）是一種常見(jiàn)的慢性氣道炎癥性疾病，以氣道高反應(yīng)性和可逆性氣流受限為特征[1]。哮喘的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但認(rèn)為與遺傳、環(huán)境、免疫等多種因素有關(guān)。目前，哮喘的治療主要是控制氣道炎癥和緩解支氣管痙攣，但仍有部分患者難以達(dá)到理想的控制水平。因此，尋找新的哮喘發(fā)病機(jī)制和治療靶點(diǎn)是當(dāng)前哮喘研究的重要方向。微小RNA（microRNA， miRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度為18～25個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，通過(guò)與靶基因的3'非翻譯區(qū)（3'untranslated region， 3'UTR）結(jié)合，導(dǎo)致靶基因的降解或轉(zhuǎn)錄后抑制[2-4]。miRNA參與了多種生物學(xué)過(guò)程，包括細(xì)胞分化、增殖、凋亡、代謝、免疫調(diào)節(jié)等。近年來(lái)，越來(lái)越多的證據(jù)表明，miRNA在哮喘的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用[5]。miR-146和miR-26是兩種在哮喘中表達(dá)異常的miRNA。miR-146在呼吸道上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)，可以調(diào)節(jié)T2型免疫反應(yīng)表達(dá)[6，7]和氣道平滑肌中炎癥介質(zhì)的表達(dá)。miR-26在肺泡上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)，可以抑制炎癥因子和平滑肌收縮。這些細(xì)胞和分子都與哮喘患者的氣道炎癥和氣道重塑有關(guān)。氣道重塑（airway remodeling）是指哮喘患者長(zhǎng)期存在的氣道結(jié)構(gòu)改變，包括氣道壁增厚、平滑肌增生等[8，9]。目前，關(guān)于miR-146和miR-26水平與哮喘患者氣道重塑的關(guān)系的報(bào)道較少。本研究旨在探討miR-146和miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑的關(guān)系，為哮喘的發(fā)病機(jī)制和治療靶點(diǎn)提供新的線索。

1資料與方法

1.1一般資料? 采用前瞻性隊(duì)列研究設(shè)計(jì)，收集2021年3月-2023年1月在重慶市南岸區(qū)人民醫(yī)院呼吸科就診的75例支氣管哮喘患者（哮喘組）和25名健康體檢者（對(duì)照組）。哮喘組患者均符合全球哮喘防治倡議（Global Initiative for Asthma， GINA）2022版診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)哮喘控制水平分為輕度、中度和重度哮喘。哮喘組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～65歲；③未使用任何抗哮喘藥物或僅使用低劑量吸入性皮質(zhì)類(lèi)固醇（ICS）治療；④無(wú)其他呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重合并癥；⑤無(wú)急性感染或發(fā)熱；⑥無(wú)孕婦或哺乳期婦女；⑦無(wú)吸煙史或戒煙超過(guò)1年。排除標(biāo)準(zhǔn)：拒絕參加本研究或中途退出者。對(duì)照組無(wú)呼吸系統(tǒng)疾病史，無(wú)吸煙史，無(wú)過(guò)敏性疾病史，無(wú)慢性炎癥性疾病史，無(wú)使用任何藥物史。兩組年齡、性別、身高、體重比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），研究可比，見(jiàn)表1。本研究經(jīng)過(guò)本院倫理委員會(huì)審批，并獲得所有患者的知情同意。

1.2方法

1.2.1測(cè)定血液指標(biāo)? 外周血中miR-146、miR-26的表達(dá)水平采用EDTA抗凝法采集患者空腹靜脈血5 ml，離心后取上清血漿，用TRIzol試劑提取總RNA，用miScriptⅡ RT試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，用miScript SYBR Green PCR試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR），以U6為內(nèi)參基因，以2-△△Ct法計(jì)算相對(duì)表達(dá)水平。血清嗜酸性粒細(xì)胞百分比（EOS%）、血清IgE水平采用EDTA抗凝法采集患者空腹靜脈血2 ml，離心后取上清血清，用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（Sysmex XN-9000公司，日本）測(cè)定EOS%，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定IgE水平。

1.2.2測(cè)定呼出氣一氧化氮（FeNO）水平? 采用NIOX MINO呼出氣一氧化氮分析儀（Aerocrine AB公司，瑞典）按照廠家說(shuō)明書(shū)操作，讓患者在儀器的口罩上吹氣，儀器會(huì)顯示FeNO的數(shù)值。按照說(shuō)明書(shū)的要求，重復(fù)測(cè)量3次，取平均值作為最終結(jié)果作為患者的FeNO水平。

1.2.3患者的氣道重塑程度評(píng)估? 采用64排螺旋CT掃描儀（GE Healthcare公司，美國(guó)）進(jìn)行高分辨率計(jì)算機(jī)斷層掃描（HRCT），按照標(biāo)準(zhǔn)程序掃描患者的胸部，選擇第三肋間隙處的右肺上葉后段支氣管作為代表性氣道進(jìn)行分析，測(cè)量其氣道壁厚度（AWT）、氣道壁面積（WA%）、氣道內(nèi)徑（AiD）等參數(shù)，公式如下：WT%=WT/（WT+ID）×100%；WA%=WA/（WA+π×ID2/4）×100%；ID%=ID/[（WA+π×ID2/4）/π]1/2×100%。

1.3觀察指標(biāo)? 主要觀察指標(biāo)為外周血中miR-146、miR-26的表達(dá)水平；次要觀察指標(biāo)為FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析；計(jì)數(shù)資料以（n）和（%）表示，組間比較采用？字2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)系數(shù)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 miR-146、miR-26水平與哮喘嚴(yán)重程度的關(guān)系? 哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于對(duì)照組，且隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加而降低（P＜0.05）。輕度哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于對(duì)照組，中度哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于輕度哮喘組（P＜0.05），重度哮喘組患者的miR-146、miR-26水平低于中度哮喘組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.2 FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)與哮喘嚴(yán)重程度的關(guān)系? 哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)均高于對(duì)照組，且隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加而升高（P＜0.05）。輕度哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)高于對(duì)照組，中度哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)高于輕度哮喘組，重度哮喘組患者的FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)高于中度哮喘組（P＜0.05），見(jiàn)表3。

2.3 miR-146、miR-26水平與FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)的相關(guān)性? Spearman秩相關(guān)分析顯示，miR-146、miR-26水平與FeNO水平、EOS%、IgE水平和HRCT參數(shù)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表4。

3討論

miR-146是一種在呼吸道上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)的miRNA，可以調(diào)節(jié)T2型免疫反應(yīng)表達(dá)和調(diào)節(jié)氣道平滑肌中炎癥介質(zhì)的表達(dá)。T2型免疫反應(yīng)是哮喘的主要免疫機(jī)制之一，涉及Th2細(xì)胞、IgE、嗜酸性粒細(xì)胞等因子[10]。既往研究發(fā)現(xiàn)，miR-146可以通過(guò)靶向IL-1β、IRAK1、TRAF6等基因抑制T2型免疫反應(yīng)[11-12]，通過(guò)靶向環(huán)氧化酶-2 （COX-2）和IL-1β基因來(lái)調(diào)節(jié)氣道平滑肌中炎癥介質(zhì)的表達(dá)[13-15]。miR-26是一種在肺泡上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)的miRNA，可以可以抑制上皮細(xì)胞的增值及遷移和平滑肌收縮[16]。前人研究發(fā)現(xiàn)[17，18]，miR-26可以通過(guò)靶向IL-6、THF-α、hs-CBP基因抑制炎癥因子和平滑肌收縮。本研究發(fā)現(xiàn)，支氣管哮喘患者的外周血中miR-146、miR-26水平低于對(duì)照組，且隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加而降低。同時(shí)，miR-146、miR-26水平與哮喘患者的氣道炎癥及氣道重塑指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。這些結(jié)果提示，miR-146、miR-26水平與支氣管哮喘患者氣道炎癥及氣道重塑有密切關(guān)系，可能通過(guò)調(diào)節(jié)T2型免疫反應(yīng)和一氧化氮合成酶表達(dá)參與哮喘的發(fā)生和發(fā)展。

哮喘患者的外周血中miR-146、miR-26水平顯著降低，且與FeNO水平、EOS%、IgE水平呈負(fù)相關(guān)，這可能說(shuō)明，miR-146在哮喘患者中失去了對(duì)T2型免疫反應(yīng)和氣道平滑肌中炎癥介質(zhì)的抑制作用，從而導(dǎo)致了氣道炎癥的加重。miR-26在哮喘患者中失去了對(duì)T2型免疫反應(yīng)和平滑肌收縮的抑制作用，從而導(dǎo)致了氣道炎癥和氣流受限的加重。

氣道重塑是指哮喘患者長(zhǎng)期存在的氣道結(jié)構(gòu)改變，包括氣道壁增厚、平滑肌增生、黏液腺體增生、黏液分泌增加、血管增生等[19]。氣道重塑會(huì)導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性和氣流受限的持久化，并影響哮喘患者的預(yù)后[20]。本研究采用HRCT評(píng)估患者的氣道重塑程度，發(fā)現(xiàn)哮喘患者的AWT、WA%顯高于對(duì)照組，AiD低于對(duì)照組，且隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加而變化，說(shuō)明HRCT是一種有效的評(píng)估氣道重塑的方法。本研究還發(fā)現(xiàn)，miR-146、miR-26水平與AWT、WA%呈負(fù)相關(guān)，與AiD呈正相關(guān)。這可能說(shuō)明，miR-146、miR-26水平與氣道重塑有關(guān)，可能通過(guò)影響上述細(xì)胞和分子的表達(dá)或功能參與氣道重塑的過(guò)程。

本研究有一些局限性，如樣本量較小，未考慮患者的吸煙史、過(guò)敏原暴露史等可能影響結(jié)果的因素，未進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-146、miR-26與靶基因之間的因果關(guān)系等。今后需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，控制混雜因素，進(jìn)行多中心研究，以及進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室研究，以驗(yàn)證本研究的結(jié)論，并探討miR-146、miR-26在哮喘治療中的潛在價(jià)值。

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收稿日期：2023-06-01；修回日期：2023-06-10

編輯/肖婷婷