陳 攀，陳 燕，馬 軍，毛?？?，付 琪，黃 海

（1.海南熱帶海洋學(xué)院崖州灣創(chuàng)新研究院，海南三亞 572022；2.海南熱帶海洋學(xué)院，海南省熱帶海洋漁業(yè)資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南三亞 572022；3.海南熱帶海洋學(xué)院，熱帶海洋生物資源利用與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南三亞 572022）

石斑魚是馳名世界的名貴海產(chǎn)魚類，隸屬于鱸形目（Perciformes）、鱸亞目（Percoidei）、石斑魚科（Epinephelidae），全球有記錄的石斑魚種類有16 屬160 余種，主要分布于熱帶和亞熱帶海域。石斑魚具有肉味鮮美、營養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者歡迎。石斑魚人工養(yǎng)殖始于20 世紀(jì)80 年代，隨后得到迅速發(fā)展，目前已成為我國沿海地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖對(duì)象。據(jù)全國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒，2021—2022 年石斑魚養(yǎng)殖規(guī)模連續(xù)兩年超過20萬t（中國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒，2023），顯示出巨大的經(jīng)濟(jì)社會(huì)價(jià)值。

在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，雜交育種是水產(chǎn)品遺傳改良的有效手段。與傳統(tǒng)選擇育種相比，雜交育種手段可以有效改良水產(chǎn)品的遺傳特性，改變基因組組成，快速篩選出性狀優(yōu)良的新品種。石斑魚種類眾多，各具特點(diǎn)，分布于大陸沿海的約有46種（祝茜，1998），為石斑魚的遠(yuǎn)源雜交育種提供了豐富的親本材料。遠(yuǎn)源雜交已成為石斑魚良種培育的重要技術(shù)手段之一。通過不同特性的石斑魚種類開展種間或?qū)匍g雜交，可培育出兼有或超出父母本優(yōu)良目標(biāo)性狀的石斑魚新品種。海南晨海水產(chǎn)有限公司突破了石斑魚屬間雜交的壁壘，利用駝背鱸（Cromileptes altivelis♀）與鞍帶石斑魚（Epinephelus lanceolatus♂）進(jìn)行雜交，培育出“花龍斑”。花龍斑綜合了母本駝背鱸和父本鞍帶石斑魚的優(yōu)點(diǎn)，其生長速度顯著優(yōu)于母本，在養(yǎng)殖水泥池車間或者土塘養(yǎng)殖1.5 年能達(dá)到1 kg 以上，生長速度是其母本的1.8 倍，極大改善了母本生長緩慢的特點(diǎn)，而且肉質(zhì)細(xì)膩鮮美、體色靚麗，表現(xiàn)出良好的雜種優(yōu)勢，具有很好的市場開發(fā)前景?；埌呒∪馄焚|(zhì)是否與其親本存在差異是評(píng)價(jià)石斑魚選育效果的重要內(nèi)容之一。為此，本研究對(duì)花龍斑及其母本駝背鱸、父本鞍帶石斑魚肌肉營養(yǎng)成分、氨基酸、脂肪酸、礦物質(zhì)和微量元素的組成及含量進(jìn)行了分析，為新品種選育、配合飼料的研制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用駝背鱸、鞍帶石斑魚、花龍斑均由海南晨海水產(chǎn)有限公司東方市感城基地提供，3 種魚均采用相同的養(yǎng)殖方式，體質(zhì)健康。駝背鱸平均體重為（205.7±41.1）g，平均體長為（24.1±1.5）cm；鞍帶石斑魚平均體重為（212.6±71.1）g，平均體長為（23.3±2.7）cm；花龍斑平均體重為（40.5±15.3）g，平均體長為（14.3±1.4）cm。每種試驗(yàn)魚各取5 尾，去除背部鱗片和皮膚，取兩側(cè)背部肌肉，干冰速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 測定方法 采用直接干燥法測定肌肉水分含量（GB5009.3-2016）；采用高溫爐灼燒法（550 ℃）測定肌肉總灰分含量（GB 5009.4-2016）；采用全自動(dòng)凱氏定氮儀測定肌肉粗蛋白質(zhì)含量（GB5009.5-2016）；采用索氏抽提法測定粗脂肪含量（GB5009.6-2016）；采用鹽酸水解法測定氨基酸（GB5009.124-2016）；脂肪酸使用氣相色譜儀進(jìn)行檢測，按峰面積歸一化法計(jì)算脂肪酸組成（GB5009.168-2016）。采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）測定Na、K、Ca、Mg、Fe、Zn、Se 元素含量，采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法（ICP-OES）測定P 元素含量（GB5009.268-2016）。

1.3 營養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià) 根據(jù)FAO/WHO 建議的氨基酸評(píng)分模式（WHO，1973）和全雞蛋蛋白的氨基酸模式（王光亞，1991）進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)算駝背鱸、鞍帶石斑魚、花龍斑的AAS、CS、必需氨基酸指數(shù)EAAI 和支鏈氨基酸和芳香族氨基酸比值F（趙亭亭等，2018）。

脂質(zhì)營養(yǎng)質(zhì)量通過以下指標(biāo)來評(píng)估，降膽固醇脂肪酸/ 升膽固醇脂肪酸（h/H）、多不飽和脂肪酸/ 飽和脂肪酸（PUFA/SFA）、n-3 系多不飽和脂肪酸/n-6 系多不飽和脂肪酸（n-3/n-6）（Domingues 等，2021）、致動(dòng)脈粥樣化指數(shù)（AI）和血栓形成指數(shù)（TI）（張艷霞等，2020）。

式中：n 為必需氨基酸個(gè)數(shù)，n=7 ；Lys、Trp、Phe……Val 為樣品中各必需氨基酸的含量（mg/g.N）；AX、BX、CX……GX 為全雞蛋蛋白必需氨基酸的含量（mg/g·N）

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 采用Microsoft Excel 2017 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行單因子方差分析（One-way ANOVA），采用Duncan’s 進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示組間差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 肌肉營養(yǎng)成分 由表1 可知，花龍斑粗蛋白質(zhì)含量顯著高于親本（P＜0.05）；粗脂肪含量高于親本且與父本差異顯著（P＜0.05），與母本無顯著差異（P＞0.05）；灰分含量與父本相等，但顯著小于母本（P＜0.05）；水分含量介于兩親本之間，且與父本差異顯著（P＜0.05），與母本無顯著差異（P＞0.05）。

表1 駝背鱸、鞍帶石斑魚及“花龍斑”肌肉一般營養(yǎng)成分比較（鮮重，g/100g）

2.2 氨基酸組成和營養(yǎng)價(jià)值的評(píng)估 由表2 可知，駝背鱸、鞍帶石斑魚和花龍斑肌肉共檢測出16 種氨基酸（色氨酸在酸水解中被破壞），其中均以天冬氨酸含量最高，組氨酸含量最低。除蛋氨酸和組氨酸外，其余14 種氨基酸含量均差異顯著（P＜0.05）?；埌叩牧涟彼?、谷氨酸和酪氨酸含量均低于親本，且其亮氨酸和谷氨酸含量與母本差異顯著（P＜0.05），酪氨酸含量與親本均差異顯著（P＜0.05）；花龍斑的蛋氨酸和甘氨酸含量均高于親本，其甘氨酸含量與親本均差異顯著（P＜0.05）。花龍斑總氨基酸含量（18.42%）、必需氨基酸含量（7.00%）、非必需氨基酸含量（11.42%）、鮮味氨基酸含量（7.60%）均顯著低于母本（P＜0.05）；除總氨基酸含量，花龍斑與父本差異不顯著外，其余均顯著高于父本（P＜0.05）；必需氨基酸指數(shù)（EAAI）大小，為駝背鱸（83.74）＞鞍帶石斑魚（81.21）＞花龍斑（75.21）且差異顯著（P＜0.05）；花龍斑EAA/TAA（0.38）和EAA/NEAA（0.61）值最低，但DAA/TAA（0.41）高于親本，支鏈氨基酸/ 芳香氨基酸F 值（2.31）小于父本，但大于母本。

表2 駝背鱸、鞍帶石斑魚及花龍斑氨基酸組成

由表3 可知，駝背鱸、鞍帶石斑魚和花龍斑肌肉必需氨基酸AAS 和CS 評(píng)分中都是甲硫氨酸+半胱酸最低，纈氨酸其次，故前者為第一限制性氨基酸，后者為第二限制性氨基酸。并且肌肉中除含硫氨基酸（甲硫氨酸和半胱氨酸）、纈氨酸及花龍斑中異亮氨酸AAS 評(píng)分小于1 外，其余氨基酸含量均高于FAO/WHO 的標(biāo)準(zhǔn)值，但只有賴氨酸和駝背鱸的CS 評(píng)分大于1。駝背鱸、鞍帶石斑魚和花龍斑的EAAI 分別為83.73、80.99、75.18。

表3 駝背鱸、鞍帶石斑魚及花龍斑必需氨基酸組成評(píng)價(jià)

2.3 脂肪酸組成 由表4 可知，飽和脂肪酸（SFA）含量為鞍帶石斑魚（42.31%）＞花龍斑（32.17%）＞駝背鱸（30.15%），且3 種魚間差異顯著（P＜0.05）；單不飽和脂肪酸（MUFA）含量為花龍斑26.60%）＞駝背鱸（26.51%）＞鞍帶石斑魚（23.01%）；多不飽和脂肪酸（PUFA）含量為駝背鱸（43.33%）＞花龍斑（41.23%）＞鞍帶石斑魚（34.68%）?；埌遪-3 多不飽和脂肪酸含量相對(duì)親本低，而n-6 多不飽和脂肪酸含量則高于親本，n-3/n-6 比值亦低于親本。不飽和脂肪酸總量、PUFA/SFA 比值、降膽固醇脂肪酸/ 升膽固醇脂肪酸（h/H）均高于父本而低于母本，動(dòng)脈粥樣化指數(shù)IA 高于母本而低于父本，血栓形成指數(shù)IT 高于親本。

表4 駝背鱸、鞍帶石斑魚及花龍斑脂肪酸含量

2.4 礦物質(zhì)及微量元素組成 由表5 可知，花龍斑、駝背鱸與鞍帶石斑魚肌肉中的礦物質(zhì)元素含量間均存在顯著差異（P＜0.05），其中Na、Fe含量表現(xiàn)為駝背鱸＞花龍斑＞鞍帶石斑魚；K、Mg 含量表現(xiàn)為花龍斑＞鞍帶石斑魚＞駝背鱸；P、Ca 的含量表現(xiàn)為花龍斑＞駝背鱸＞鞍帶石斑魚；Zn、Se 的含量表現(xiàn)為駝背鱸＞鞍帶石斑魚＞花龍斑，花龍斑K、Mg、P 元素含量比較高，Zn 含量顯著低于親本（P＜0.05），Na 含量顯著高于鞍帶石斑魚（P＜0.05）。

表5 駝背鱸、鞍帶石斑魚及花龍斑的礦物元素組成和含量（濕重，mg/kg）

3 討論

魚類營養(yǎng)價(jià)值取決于肌肉中蛋白質(zhì)、脂肪等干物質(zhì)的含量和組成。食品中蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值的評(píng)定受蛋白質(zhì)含量、氨基酸種類及比例等多種因素影響（王麗娜等，2023），其中必需氨基酸的含量與組成是評(píng)價(jià)食物營養(yǎng)價(jià)值的最重要指標(biāo)，而鮮味氨基酸的含量決定著肉質(zhì)的鮮美程度。FAO/WHO 根據(jù)嬰兒的必需氨基酸需求量（各年齡段人群中最高）制定了最低限度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（AAS 評(píng)分），是評(píng)價(jià)食物氨基酸營養(yǎng)性能的重要指標(biāo)，被廣泛應(yīng)用于食物營養(yǎng)價(jià)值的評(píng)定。

3 種石斑魚粗蛋白質(zhì)含量較高，氨基酸種類齊全，“花龍斑”的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量均高于親本，體現(xiàn)出明顯的雜交優(yōu)勢，這與太湖魴鲌（姜建湖等，2019）和小黃魚♀與大黃魚♂雜交子代（劉峰等，2020）的結(jié)果一致?！盎埌摺钡陌被峥偭俊⒈匦璋被岷亢头潜匦璋被岷恳约磅r味氨基酸含量均低于母本駝背鱸而高于父本鞍帶石斑魚。說明在營養(yǎng)物質(zhì)的表達(dá)上母本的遺傳貢獻(xiàn)大。DAA/TAA 值高于親本，尤其甘氨酸含量明顯高于親本，說明雜交石斑魚的味道比較鮮美，“花龍斑”的甘氨酸含量顯著高于親本（P＜0.05）。甘氨酸在機(jī)體內(nèi)廣泛存在，參與蛋白質(zhì)、核苷酸、卟啉及膽鹽等的代謝（范小慶和扈金萍，2018），在糖異生、嘌呤、血紅素合成和膽汁酸結(jié)合等許多反應(yīng)中都有作用（Kalinowski 等，2017），其慢性缺乏會(huì)導(dǎo)致免疫應(yīng)答失敗、生長緩慢、營養(yǎng)代謝異常等不良影響（韓浩月和邵建忠，2018）。而且3 種魚的EAA/TAA 均接近于0.4，EAA/NEAA 均大于0.6，符合聯(lián)合國糧農(nóng)組織/ 世界衛(wèi)生組織推薦的理想蛋白質(zhì)評(píng)價(jià)模式（王林娜等，2018）。

脂肪含量是評(píng)價(jià)魚肉品質(zhì)的另一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)，脂肪本身不是呈味物質(zhì)，但魚類肌肉中適宜的脂肪含量可以為魚肉中增加一些鮮美的風(fēng)味和細(xì)嫩的口感。魚類肌肉中的脂肪含量與肉質(zhì)風(fēng)味和細(xì)嫩程度成正比（向智男和寧正祥，2004 ；江偉珣等，1992）。但當(dāng)魚類肌肉中的脂肪含量太高又會(huì)違背現(xiàn)代人的健康飲食觀念。花龍斑的粗脂肪含量為2.3%，屬于低脂型魚類（2% ～4%）（Haard，1992）。花龍斑的飽和脂肪酸（SFA）含量高于父本而小于母本，不飽和脂肪酸含量介于兩親本之間，其中單不飽和脂肪酸含量最高。理想的脂肪酸組成還需適宜的PUFA/SFA 比例，聯(lián)合國健康部門的推薦值為0.4（吳水清等，2020），駝背鱸、鞍帶石斑魚和花龍斑的比例分別為1.44、0.82 和1.28，均高于推薦值，表明3 種石斑魚均符合理想脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)，是人們?nèi)粘ｏ嬍持袃?yōu)質(zhì)的脂肪源。

礦物質(zhì)在人體內(nèi)不能自行合成，只能通過膳食進(jìn)行補(bǔ)充，對(duì)保持人體正常的生理功能具有重要作用。3 種石斑魚肌肉中礦物質(zhì)及微量元素共檢測出8 種，其中“花龍斑”的K、Ca、P、Mg 明顯高于親本，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，而Na、Fe、Zn、Se 的含量則介于兩親本之間。

雜交是一種有效的遺傳改良方法，雜交可以使不同物種的基因組合在一起，導(dǎo)致雜交后代的基因型和表現(xiàn)型均發(fā)生改變（王林娜等，2018 ；何周玲等，2014）。本研究首次對(duì)“花龍斑”及其親本肌肉營養(yǎng)成分進(jìn)行了分析比較，結(jié)果表明，“花龍斑”不僅生長速度明顯快于母本駝背鱸，而且粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量明顯高于親本，而且氨基酸、必需氨基酸、鮮味氨基酸、多不飽和脂肪酸含量、PUFA/SFA、降膽固醇脂肪酸/ 長虹膽固醇脂肪酸均較父本有明顯的改善且接近母本，具有很好的雜交優(yōu)勢，顯示出良好的營養(yǎng)價(jià)值。

4 結(jié)論

綜上所述，雜交魚“花龍斑”肌肉營養(yǎng)繼承并綜合了雙親的優(yōu)良性狀，肌肉營養(yǎng)成分較均衡，達(dá)到FAO/WHO 標(biāo)準(zhǔn)，是符合人們營養(yǎng)需求的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)源，該研究為雜交品種“花龍斑”的新品種選育、配合飼料研制提供了理論依據(jù)。