李思雨，曹靜樺，王鳳偉

0 引言

結(jié)直腸癌（colorectal cancer, CRC）是消化道最常見的惡性腫瘤之一，如何提高其早期診斷率及有效抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，已成為醫(yī)學(xué)研究亟需解決的關(guān)鍵科學(xué)問題。腫瘤進(jìn)展是一個多階段的復(fù)雜過程，期間腫瘤細(xì)胞經(jīng)常處在缺氧、營養(yǎng)缺乏、酸中毒等應(yīng)激條件下[1]。傳統(tǒng)觀點認(rèn)為營養(yǎng)缺乏會顯著降低細(xì)胞基礎(chǔ)活動，但有越來越多的研究[2-4]發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞可能在營養(yǎng)缺乏條件下仍維持生存并進(jìn)行侵襲和遷移。血清作為多種蛋白、生長因子、細(xì)胞因子和激素的來源[5]，對促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和增殖具有重要作用。血清饑餓（血清剝奪）模型是一種模擬腫瘤營養(yǎng)缺乏環(huán)境的體外模型，指用低于正常培養(yǎng)基的胎牛血清濃度（通常為0.5%～5%）來培養(yǎng)細(xì)胞，但注意血清的完全缺乏對細(xì)胞有不可逆的毒性作用[6]。已有文獻(xiàn)報道，急性血清饑餓作為一種應(yīng)激條件，會增加結(jié)直腸癌側(cè)群細(xì)胞的比例及對化療藥物的抵抗[7]，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞周期[8]、自噬[9]及凋亡[10]等研究中。考慮到腫瘤作為一種慢性疾病，其細(xì)胞在生長過程中通常長期處于營養(yǎng)缺乏狀態(tài)，因此采用長期血清饑餓模型能更準(zhǔn)確地模擬其體內(nèi)環(huán)境。本研究針對兩種常見結(jié)直腸癌細(xì)胞系構(gòu)建了長期血清饑餓誘導(dǎo)的亞株，旨在探究慢性血清饑餓的應(yīng)激條件對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及潛在分子機制，從而為闡明結(jié)直腸癌的發(fā)展機制提供新的視角和實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

結(jié)直腸癌細(xì)胞系DLD-1、SW480分別購自美國ATCC細(xì)胞庫和中國科學(xué)院細(xì)胞庫；RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Thermo Fisher Scientific公司；CCK-8試劑盒（HY-K0301）和Stattic試劑（HY-13818）均購自美國MCE公司；8 μm Transwell小室（美國Falcon，353097）；RNA快速提取試劑盒（B0004D）和SYBR qPCR試劑盒（A0012-R2）均購自美國EZB公司；預(yù)混型定量用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TAKARA公司,RR036A）；jetPRIME轉(zhuǎn)染試劑（法國Polyplustransfection）；哺乳動物細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白提取試劑盒（北京全式金生物，DE201-01）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（GK10009）和ECL超敏化學(xué)發(fā)光試劑盒（GK10008）均購自美國GLPBIO公司；蛋白酶抑制劑（江蘇康為世紀(jì)公司，CW2200S）；Omni-Easy一步法PAGE凝膠快速制備試劑盒（上海Epizyme, PG211）；Anti-Integrin Beta 1（武漢Proteintech, 12594-1-AP）；Anti-FAK（A11195）、Anti-phospho-FAK-Y397（AP1447）和Anti-STAT3（A1192）均購自武漢ABclonal公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與低血清耐受細(xì)胞亞株的構(gòu)建

SW480和DLD-1細(xì)胞在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。正常血清培養(yǎng)組細(xì)胞用含10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，血清饑餓組細(xì)胞在細(xì)胞狀態(tài)良好（細(xì)胞無明顯空泡、邊緣不清晰、黑點和碎片多等）的情況下將血清濃度從10%FBS依次降至7.5%FBS、5%FBS、2%FBS和1%FBS，32天后細(xì)胞基本適應(yīng)1%FBS的生長環(huán)境。定義適應(yīng)1%FBS培養(yǎng)的細(xì)胞為血清饑餓細(xì)胞（SW480-1%和DLD-1-1%），保持10%FBS培養(yǎng)的細(xì)胞為對照細(xì)胞（SW480 WT和DLD-1 WT）。

1.3 細(xì)胞增殖能力測定

分別將血清饑餓組DLD-1-1%、SW480-1%細(xì)胞株和對照組SW480、DLD-1細(xì)胞接種于96孔板，12 h待細(xì)胞貼壁后加入含10% CCK8的無血清培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱孵育2 h后用酶標(biāo)儀檢測吸光度，同一時間點連續(xù)檢測7天，根據(jù)檢測結(jié)果繪制細(xì)胞生長折線圖。

1.4 細(xì)胞遷移能力檢測

使用Transwell小室（8 μm），上室加入以無血清RPMI1640重懸的2×104個/ml細(xì)胞懸液250 μl，下室加入含5%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液500 μl，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36～48 h。取出小室進(jìn)行甲醇固定30 min，結(jié)晶紫染色10 min，無菌棉簽小心擦凈上室側(cè)細(xì)胞，顯微鏡下觀察下室側(cè)細(xì)胞，并拍照記錄遷移情況。

1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及給藥

分別將血清饑餓組DLD-1-1%、SW480-1%細(xì)胞株和對照組DLD-1、SW480細(xì)胞消化收集后以30%的細(xì)胞密度接種于六孔板中，待細(xì)胞貼壁后加入siRNA與轉(zhuǎn)染試劑混合物，轉(zhuǎn)染6～8 h后換液，48 h后收集細(xì)胞。取相同數(shù)量的血清饑餓組和對照組細(xì)胞以80%的細(xì)胞密度接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后加入稀釋后的STAT3抑制劑Stattic，使藥物終濃度為5 μmol/L，24 h后收集細(xì)胞。本研究使用的siRNA通過NCBI Blast確認(rèn)靶點特異性，由銳博生物合成，見表1。

表1 本研究使用的引物和siRNA序列Table 1 Primer and siRNA sequence used in this study

1.6 RNA提取及定量分析

取6 cm培養(yǎng)皿中處于對數(shù)生長期的血清饑餓組DLD-1-1%、SW480-1%細(xì)胞株和對照組DLD-1、SW480細(xì)胞，棄培養(yǎng)基后加入PBS充分清洗，再加入RNA提取裂解液充分吹打，按說明書步驟提取RNA，得到的RNA樣品用Nanodrop微量分光光度計進(jìn)行定量和質(zhì)量評估。整個操作過程處于無RNA酶、DNA酶污染環(huán)境下。

1.7 實時熒光定量PCR檢測

取2 μg RNA樣品，用PrimeScript? RT Master Mix配制成20 μl反轉(zhuǎn)錄體系，置于PCR儀進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，程序為：37℃ 15 min，85℃ 15 s，4℃暫存。得到的cDNA樣品用ddH2O進(jìn)行稀釋，并配制SYBR Green qPCR Mix、特異性引物及ddH2O混合液，按順序定量加至Bio-Rad 96孔qPCR板中，每個樣品設(shè)三個復(fù)孔，離心后置于Roche實時熒光定量PCR儀中進(jìn)行檢測，反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5 min，PCR反應(yīng) 95℃ 10 s，60℃ 10 s，72℃15 s，循環(huán)40次，72℃徹底延伸5 min，最后65℃～95℃繪制溶解曲線。本研究使用的引物序列查詢自Primer Bank，經(jīng)NCBI Blast匹配，由擎科生物合成，見表1。

1.8 細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白提取

收集10 cm培養(yǎng)皿中處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照全式金核漿分離試劑盒說明書進(jìn)行操作，提取的細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白經(jīng)BCA法測濃度后配成相同濃度蛋白樣品，隨后進(jìn)行Western blot實驗。

1.9 Western blot檢驗

收集處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，PBS洗兩次后加入IP裂解液，冰上裂解30 min，隨后4℃12 000 r/min離心20 min，取上清液用BCA法測定蛋白濃度，將每組樣品統(tǒng)一配置成3 μg/μl的濃度。使用凝膠快速制備試劑盒配置10%濃度的SDS-PAGE膠，每個樣品取相同蛋白量進(jìn)行上樣，以90 V恒壓進(jìn)行電泳30 min，隨后加大電壓至120 V，當(dāng)溴酚藍(lán)條帶即將跑出凝膠時停止電泳。以250 mA恒流轉(zhuǎn)膜2 h，5%脫脂牛奶封閉PVDF膜1 h，4℃一抗孵育過夜。次日TBST洗3遍，二抗室溫孵育1 h，TBST洗3遍，最后加ECL發(fā)光液進(jìn)行曝光。

1.10 RNA-Seq數(shù)據(jù)分析

本研究委托武漢康測科技有限公司進(jìn)行RNA建庫測序，獲得的原始數(shù)據(jù)經(jīng)過濾、比對人類全基因組、基因表達(dá)定量從而得到差異基因表達(dá)數(shù)據(jù)，使用metascape基因注釋網(wǎng)站進(jìn)行GO和KEGG富集分析，輸出結(jié)果利用R語言的dplyr函數(shù)、DOSE包和ggplot包繪制富集氣泡圖，利用R語言的circlize包和ComplexHeatmap包繪制環(huán)狀熱圖。從String數(shù)據(jù)庫下載蛋白互作信息，導(dǎo)入Cytoscape并使用CytoHubba插件繪制核心基因互作圖。

1.11 統(tǒng)計學(xué)方法

使用ImageJ軟件進(jìn)行Transwell小室細(xì)胞計數(shù)及Western blot灰度值定量，GraphPad Prism 8軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析及繪圖，采用Student′st-test檢驗對兩組間的差異進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 長期血清饑餓耐受細(xì)胞亞株形態(tài)

顯微鏡下觀察可見10%FBS培養(yǎng)的SW480呈三角形、梭形或圓形，邊緣銳利。長期血清饑餓后細(xì)胞體積增大，邊緣變模糊毛糙，核漿比增大，細(xì)胞密度提高時聚集性更加明顯。10%FBS培養(yǎng)的DLD-1呈不規(guī)則梭形，血清饑餓后細(xì)胞形態(tài)大小不一，部分細(xì)胞突出增多，見圖1。

圖1 長期血清饑餓后腸癌細(xì)胞形態(tài)變化Figure 1 Morphological changes of colorectal cancer cells after prolonged serum deprivation

2.2 長期血清饑餓對SW480及DLD-1細(xì)胞增殖的影響

CCK-8實驗結(jié)果顯示：血清饑餓的SW480和DLD-1細(xì)胞增殖能力明顯弱于對照組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見圖2。

圖2 長期血清饑餓對SW480和DLD-1細(xì)胞增殖能力的影響Figure 2 Impact of prolonged serum deprivation on proliferation capacity of SW480 and DLD-1 cells

2.3 長期血清饑餓對SW480及DLD-1細(xì)胞遷移的影響

Transwell實驗結(jié)果顯示：血清饑餓減弱了DLD-1細(xì)胞的遷移能力，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0001）；但血清饑餓的SW480遷移能力明顯強于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0004），見圖3。以上結(jié)果提示，在腫瘤進(jìn)展的過程中，腫瘤中的部分癌細(xì)胞可以耐受長期的營養(yǎng)匱乏并在其刺激下獲得更強的遷移能力，這可能是腫瘤轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的重要原因之一。

圖3 長期血清饑餓對SW480和DLD-1細(xì)胞遷移能力的影響Figure 3 Effect of prolonged serum deprivation on migration of SW480 and DLD-1 cells

2.4 RNA-Seq差異基因分布特征

為探索SW480耐受血清饑餓并獲得更強遷移能力的潛在分子機制，我們對血清饑餓及對照的SW480細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，實驗組和對照組每組細(xì)胞設(shè)置兩個生物學(xué)重復(fù)。主成分分析（PCA）顯示組內(nèi)兩個樣本分布較為聚集，見圖4A，提示實驗重復(fù)性好；組間樣本分布散在，具有較好的區(qū)分度，提示血清饑餓對細(xì)胞的基因表達(dá)有顯著調(diào)控。以|log2FC|＞1且FDR＜0.05為閾值，篩選出6 486個差異基因，其中血清饑餓誘導(dǎo)3 016個基因表達(dá)上調(diào)，3 470個基因表達(dá)下調(diào)，見圖4B。

圖4 SW480細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平差異基因分布特征Figure 4 Distribution characteristics of differentiallyexpressed genes (DEGs) in SW480 cells

2.5 RNA-Seq差異基因富集分析

對長期血清饑餓誘導(dǎo)上調(diào)的3 016個差異基因進(jìn)行GO和KEGG富集分析。GO數(shù)據(jù)庫分別從細(xì)胞組分（cellular component, CC）、分子功能（molecular function, MF）和生物過程（biological process, BP）3個角度對基因進(jìn)行注釋，富集到細(xì)胞增殖負(fù)調(diào)控、細(xì)胞遷移正調(diào)控、細(xì)胞運動、血管形成等生物過程相關(guān)的基因，KEGG通路分析主要富集到細(xì)胞黏附分子相關(guān)通路，這與觀察到的功能實驗相一致，提示高通量測序數(shù)據(jù)具有較高的可信度，結(jié)果見圖5。

圖5 差異表達(dá)基因GO和KEGG富集分析Figure 5 GO and KEGG enrichment analyses of differentially-expressed genes

2.6 長期血清饑餓上調(diào)SW480細(xì)胞遷移相關(guān)基因表達(dá)

選取GO富集分析中與細(xì)胞遷移相關(guān)的283個基因，見圖6A。為進(jìn)一步篩選其中發(fā)揮潛在介導(dǎo)作用的關(guān)鍵分子，我們使用String在線數(shù)據(jù)庫分析了283個遷移相關(guān)基因的蛋白互作信息。該組基因?qū)隒ytoscape軟件后，采用拓?fù)浞治龇椒‥c-Centricity篩選出互作網(wǎng)絡(luò)中排名前20位的潛在關(guān)鍵基因，見圖6B。隨后對評分最高的16個核心基因進(jìn)行qPCR驗證，見圖7，發(fā)現(xiàn)血清饑餓的確在SW480中上調(diào)了VTN、TNS1、VEGFA、STAT3、ITGB1、PTEN、CDH5和CTTN等基因的mRNA表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0001）。

圖6 SW480細(xì)胞遷移相關(guān)差異基因分析Figure 6 Analysis of migration-related DEGs in SW480 cells

圖7 長期血清饑餓上調(diào)SW480細(xì)胞轉(zhuǎn)錄核心基因mRNA水平Figure 7 Prolonged serum starvation upregulated the mRNA levels of the SW480 cell transcriptome core gene

2.7 長期血清饑餓上調(diào)SW480 ITGB1/p-JAK2/p-STAT3/MMP2蛋白表達(dá)

為了找到促進(jìn)SW480遷移的關(guān)鍵介導(dǎo)分子，我們采用Western blot實驗來檢測遷移相關(guān)核心基因的表達(dá)，并通過文獻(xiàn)閱讀初步確認(rèn)了ITGB1的重要性。隨后，我們檢測了文獻(xiàn)中報道的ITGB1相關(guān)通路FAK-SRC和JAK2-STAT3的關(guān)鍵激酶蛋白表達(dá)和磷酸化水平，見圖8。血清饑餓上調(diào)SW480 ITGB1、p-JAK2、p-STAT3（Tyr705）、p-STAT3（Ser727）、STAT3、MMP2蛋白表達(dá)，下調(diào)p-FAK表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。通過核漿分離實驗發(fā)現(xiàn)血清饑餓后SW480 STAT3轉(zhuǎn)錄因子入核增多，而DLD-1 STAT3核漿蛋白水平不受血清饑餓的影響，見圖9。

圖8 長期血清饑餓上調(diào)SW480細(xì)胞ITGB1/p-JAK2/p-STAT3/MMP2蛋白表達(dá)Figure 8 Prolonged serum starvation promoted the protein expression of ITGB 1/p-JAK2/p-STAT3/MMP2 in SW480 cells

圖9 長期血清饑餓促進(jìn)SW480細(xì)胞STAT3轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核Figure 9 Prolonged serum starvation promoted STAT3 translation to the nucleus in SW480 cells

2.8 敲降ITGB1和使用STAT3抑制劑減弱血清饑餓SW480的遷移能力

為探究上調(diào)的ITGB1和STAT3的磷酸化水平對SW480的影響，采用Transwell實驗驗證血清饑餓組和對照組細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA或加入5 μmol/L STAT3抑制劑（stattic）后遷移能力的變化。ITGB1的敲降效果和stattic抑制STAT3磷酸化的作用見圖10A～B。敲降ITGB1能減弱血清饑餓SW480細(xì)胞的遷移能力，而正常血清組不受影響，見圖10C。5 μmol/L stattic作用24 h均能抑制兩組細(xì)胞的遷移能力，并且對血清饑餓SW480遷移能力的抑制作用相較于對照組更顯著，見圖10D，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

圖10 敲低ITGB1和使用STAT3抑制劑減弱血清饑餓SW480細(xì)胞的遷移能力Figure 10 Knockdown of ITGB1 and use of STAT3 inhibitor reduced the migration capacity of serum-starved SW480 cells

3 討論

腫瘤細(xì)胞在生長、遷移、侵襲的過程中持續(xù)受到不利環(huán)境條件的刺激[11]，尤其是營養(yǎng)物質(zhì)的匱乏。為探索其對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及機制，目前研究主要利用葡萄糖剝奪、氨基酸剝奪、血清饑餓等體外模型來模擬體內(nèi)腫瘤的營養(yǎng)缺乏狀態(tài)。

為揭示長期營養(yǎng)匱乏對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，我們構(gòu)建了1%FBS耐受細(xì)胞亞株SW480-1%和DLD-1-1%，并對其增殖、遷移能力進(jìn)行檢測。長期血清饑餓導(dǎo)致SW480和DLD-1細(xì)胞增殖能力下降，這可能主要歸因于培養(yǎng)基中營養(yǎng)和生長因子的不足，但也可能涉及其他機制。例如，研究發(fā)現(xiàn)腸癌細(xì)胞HD6在低血清條件下培養(yǎng)48小時會上調(diào)Mirk表達(dá)，通過降低cyclin D1的穩(wěn)定性使細(xì)胞停留在G0期，從而抑制了其生長[12]。值得注意的是，長期血清饑餓減弱DLD-1的遷移能力，但增強SW480的遷移能力。為了探究其潛在的分子機制，我們分別對DLD-1、SW480的血清饑餓組及對照組細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，DLD-1轉(zhuǎn)錄組分析未得到顯著差異，而SW480轉(zhuǎn)錄組差異基因富集到細(xì)胞遷移正調(diào)控通路。基于283個遷移相關(guān)且表達(dá)上調(diào)的基因，我們構(gòu)建遷移相關(guān)基因核心蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，并選取評分最高的16個基因進(jìn)行qPCR驗證。相較于對照組細(xì)胞，血清饑餓細(xì)胞的VTN、TNS1、VEGFA、STAT3、ITGB1、PTEN、CDH5和CTTNmRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)。通過相關(guān)文獻(xiàn)回顧，我們發(fā)現(xiàn)此組基因在多種癌種中具有顯著促轉(zhuǎn)移的作用。結(jié)合蛋白表達(dá)水平驗證，我們初步確定了ITGB1作為進(jìn)一步研究的分子。

ITGB1基因編碼Integrin Subunit Beta 1，屬于整合素家族。該家族是一組由18種α亞基、8種β亞基組合形成的糖基化異二聚體跨膜蛋白，不僅作為胞膜受體參與細(xì)胞黏附和分子識別，同時參與細(xì)胞增殖、遷移和侵襲等多種生命活動[13]。研究顯示，ITGB1的高表達(dá)與胃癌患者的不良預(yù)后和高復(fù)發(fā)率緊密相關(guān)[14]，并在乳腺癌與膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展中，特別是在侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[15-16]。Chang等通過對微陣列數(shù)據(jù)進(jìn)行生信分析及臨床樣本驗證，提出ITGB1可作為預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的新指標(biāo)[17]。在我們的研究中，長期血清饑餓顯著上調(diào)了SW480細(xì)胞中的ITGB1表達(dá)，而對DLD1細(xì)胞無明顯影響，這表明血清饑餓可能通過增強ITGB1的表達(dá)來增強SW480細(xì)胞的遷移能力。整合素負(fù)責(zé)介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外的雙向信號傳遞。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時，整合素從折疊狀態(tài)變?yōu)榛钚孕问?，其胞外段與細(xì)胞外基質(zhì)的配體蛋白結(jié)合，驅(qū)動整合素形成蛋白簇，胞內(nèi)段則與支架蛋白、細(xì)胞骨架蛋白和信號蛋白等相互作用，形成復(fù)雜而動態(tài)的結(jié)構(gòu)黏附體，進(jìn)而觸發(fā)下游信號的激活[18]。雖然FAK-SRC是整合素介導(dǎo)細(xì)胞遷移的經(jīng)典激酶家族，但我們的實驗排除了ITGB1通過促進(jìn)FAK第397位酪氨酸磷酸化激活FAK-SRC從而調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移的可能性。文獻(xiàn)表明，整合素能夠激活多條信號通路，如PI3KAKT、MAPK-ERK和JAK-STAT，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的生存、增殖和遷移[19]，此前的生物信息學(xué)分析也提示遷移相關(guān)的核心基因包括JAK2和STAT3。在后續(xù)的實驗中，我們觀察到血清饑餓SW480細(xì)胞的確激活了JAK2-STAT3信號通路，導(dǎo)致STAT3的磷酸化并入核，從而促進(jìn)了MMP2等遷移相關(guān)正向調(diào)控蛋白的表達(dá)。通過敲降ITGB1和使用STAT3抑制劑，我們觀察到在血清饑餓條件下增強的SW480細(xì)胞遷移能力被有效抑制，并且敲降ITGB1的效果更為顯著，這表明ITGB1的上調(diào)除了激活JAK2-STAT3信號通路外，還可能通過其他分子途徑影響細(xì)胞遷移。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌細(xì)胞可耐受慢性饑餓應(yīng)激，并通過上調(diào)ITGB1增強其遷移能力，提示應(yīng)激條件可能促進(jìn)癌細(xì)胞的惡性表型，為理解體內(nèi)應(yīng)激條件對腫瘤細(xì)胞的影響提供了實驗基礎(chǔ)。此外，盡管STAT3作為腫瘤藥物研發(fā)的重要靶點，近20年來已有多種抑制劑進(jìn)入臨床試驗，但受限于藥效、不良反應(yīng)等原因治療方案尚未獲得FDA批準(zhǔn)[20]。本研究發(fā)現(xiàn)低濃度STAT3抑制劑對遷移能力更強的血清饑餓細(xì)胞有更好的抑制作用，提示STAT3抑制劑可能對惡性傾向更顯著的結(jié)直腸癌細(xì)胞有同樣甚至更好的治療效果，為了解腫瘤異質(zhì)性與STAT3信號通路的關(guān)系提供了新的線索。不足的是，關(guān)于慢性饑餓應(yīng)激是通過何種機制促進(jìn)ITGB1表達(dá)，以及ITGB1調(diào)節(jié)JAK2激酶活性的具體機制仍有待探索。

利益沖突聲明：

所有作者均聲明不存在利益沖突。