祁月月，邵宇，張平，胡宗林，鈕建國，馮星凱，胡永陽

(浙江天豐生物科學有限公司，浙江 金華 321000)

小麥赤霉病(fusarium head blight)是我國小麥生產(chǎn)上危害較嚴重的流行性病害之一[1-3]，其病原菌屬于半知菌亞門鐮孢屬亞洲鐮刀菌。我國小麥赤霉病以往主要發(fā)生于長江中下游冬麥區(qū)以及東北春麥區(qū)。近年來，由于氣候變暖和秸稈還田的影響，小麥赤霉病迅速向黃淮麥區(qū)蔓延[4-5]。該病害的流行不僅可造成小麥大幅度減產(chǎn)，還可導致脫氧雪腐鐮孢菌烯醇(DON)等多種毒素污染谷物，嚴重威脅人和動物的健康[6-7]。種植抗性品種是防治小麥病害既經(jīng)濟又安全的有效方法，我國自70年代開始使用多菌靈防治小麥赤霉病，由于長期連續(xù)使用，抗藥性問題越來越嚴重[8-9]。因此，尋求新的防治藥劑勢在必行[10-11]，丙硫菌唑是一種新型廣譜三唑硫酮類殺菌劑，主要用于防治谷類、麥類、豆類等眾多病害，丙硫菌唑的作用機理為抑制真菌中甾醇前體-羊毛甾醇或2，4-甲基二氫羊毛甾醇14位的脫甲基化作用，即脫甲基化抑制劑(DMIs)。丙硫菌唑不僅具有很好的內(nèi)吸活性，優(yōu)異的保護、治療和鏟除活性，且持效時間長，但由于作用位點比較單一，存在中高抗性風險。氟唑菌酰羥胺是吡唑-4-酰胺類殺菌劑，是琥珀酸脫氫酶抑制劑(SDHI)，通過真菌呼吸鏈復合體Ⅲ上的三羧酸循環(huán)來抑制線粒體的功能，阻止其產(chǎn)生能量，抑制病原菌生長，最終導致其死亡，氟唑菌酰羥胺與三唑類、甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑無交互抗性。丙硫菌唑與氟唑菌酰羥胺混合使用，將不同作用機理的殺菌劑制成混劑，可以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，擴大抗菌譜，提高藥效，降低用藥量，降低成本。因此，本研究將丙硫菌唑和氟唑菌酰羥胺進行混配，為科學合理開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株

供試病原菌為小麥赤霉病菌，采自安徽省明光市石壩鎮(zhèn)安徽農(nóng)業(yè)大學試驗田發(fā)病麥穗。取患病的新鮮組織，連續(xù)2次在無菌水中清洗1 min，然后用70%乙醇清洗晾干，用解剖刀切取病健交界處小塊病組織。將病組織在無菌水中清洗去除碎末，移入75%乙醇中浸3～5 s，晾干。放入平板培養(yǎng)基上，每皿放置2～3塊，在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待長出菌絲后，挑取菌絲放入空白培養(yǎng)皿中做進一步純化培養(yǎng)，然后回接至小麥上，確定菌株為小麥赤霉病菌。最后將菌種接種到斜面上，待充分生長后，用橡膠塞和油皮紙包好，放置浙江天豐生物科學研究院冷藏，每6個月復壯1次。

1.1.2 供試藥劑

供試藥劑為98%氟唑菌酰羥胺、98%丙硫菌唑原藥，由浙江天豐生物科學研究院提供。

1.2 毒力測定

1.2.1 試驗設(shè)計

丙硫菌唑(編號為A)有效成分濃度設(shè)置為2.4、4.8、9.6、19.2、28.8、38.4、48.0、64.2 mg·L-1，每個濃度設(shè)置3次重復，另設(shè)空白對照。

氟唑菌酰羥胺(編號為B)有效成分濃度設(shè)置為0.1、0.3、0.9、2.7、8.1、24.3、72.9、218.7 mg·L-1，每個濃度設(shè)置3次重復，另設(shè)空白對照。

丙硫菌唑(編號為A)、氟唑菌酰羥胺(編號為B)二者分別以1∶1、2∶3、1∶2混配，有效成分濃度設(shè)置為0.1、0.3、0.9、2.7、8.1、24.3、72.9、218.7 mg·L-1。

以上藥劑濃度是指在培養(yǎng)基中的測試濃度。上述丙硫菌唑和氟唑菌酰羥胺分別加入助懸浮劑、增稠劑、防凍劑、水等通過砂磨機研磨成20%懸浮劑備用，然后采用定量分析法進行含量標定。

1.2.2 試驗方法

在無菌操作下，預先制備凈含量為99.00 g的PDA培養(yǎng)基置于高壓鍋中滅菌后，冷卻至28 ℃待用。

在無菌操作下，將20%的丙硫菌唑SC用無菌水配制成有效成分濃度為0.24、0.48、0.96、1.92、2.88、3.84、4.80、6.42 g·L-1的母液，將20%氟唑菌酰羥胺SC用無菌水配制成濃度為0.01、0.03、0.09、0.27、0.81、2.43、7.29、21.87 g·L-1的母液，將丙硫菌唑、氟唑菌酰羥胺分別以1∶1、2∶3、1∶2混配，配制成0.01、0.03、0.09、0.27、0.81、2.43、7.29、21.86 g·L-1的母液。用移液槍定量取1 mL加入預先滅好菌的PDA培養(yǎng)基中。充分搖勻后，均勻倒入已滅菌的9 cm培養(yǎng)皿中，每個處理3次重復，制備成相應的含藥平板。另設(shè)不加藥處理，制備成空白平板的培養(yǎng)基做對照。

在無菌條件下，用滅過菌的內(nèi)徑為7 mm的打孔器從預先培植好的含菌培養(yǎng)基的菌落邊緣切取菌餅。將菌餅移置于含藥培養(yǎng)基的居中位置，菌絲面朝下(菌絲面與培養(yǎng)基相接觸)，每個培養(yǎng)皿內(nèi)放置1個菌餅。將接菌后的培養(yǎng)皿倒置放于26 ℃的恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待培養(yǎng)至空白對照恰好長滿培養(yǎng)皿時，采用十字交叉法，用游標卡尺垂直測量菌落直徑，求其平均值，計算各藥劑每個處理濃度下的菌絲生長抑制率。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

待空白處理長滿平板后，用十字交叉法測量菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。

用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計，求出回歸直線、EC50、相關(guān)系數(shù)。根據(jù)共毒系數(shù)法(CTC)來評價藥劑混用的增效作用，即≤80為拮抗作用，>80～<120為相加作用，≥120為增效作用。

實測毒力指數(shù)(ATI)為標準藥劑EC50與供試藥劑EC50的比值。混劑理論毒力指數(shù)(TTI)為各藥劑毒力指數(shù)與其劑量百分比乘積之和。共毒系數(shù)(CTC)為混劑實測毒力指數(shù)與混劑理論毒力指數(shù)的比值。

1.3 田間藥效試驗

1.3.1 試驗設(shè)計

試驗地選在安徽省阜南縣鹿城鎮(zhèn)小麥赤霉病常發(fā)田塊。試驗地栽培管理、水肥條件一致，試驗設(shè)8個處理，分別為處理1，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑300 mL·hm-2；處理2，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰胺懸浮劑400 mL·hm-2；處理3，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰胺懸浮劑500 mL·hm-2；處理4，20%丙硫菌唑懸浮劑400 mL·hm-2；處理5，30%氟唑菌酰羥胺懸浮劑400 mL·hm-2；處理6，25%多菌靈可濕性粉劑(市購)3 000 g·hm-2；處理7，36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑750 mL·hm-2；處理8，空白對照。

1.3.2 藥劑配置

50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑(2∶3)制備，丙硫菌唑20%，氟唑菌酰羥胺30%，Genapol X060 1%，分散劑EMULSON AG TRSS 4%，Agrilan 788 1.5%，Ethylan 324 1%，乙二醇 5%，硅酸鎂鋁0.5%，消泡劑0.2%，卡松0.1%，黃原膠0.06%，水適量，將上述組分剪切均勻，經(jīng)砂磨機研磨，至物料粒徑D90≤5 μm，將丙硫菌唑、氟唑菌酰羥胺調(diào)配至標示值，即得50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑。

20%丙硫菌唑懸浮劑制備，丙硫菌唑20%，潤濕劑Genapol X060 1%，分散劑EMULSON AG TRSS 5%，乙二醇5%，硅酸鎂鋁1%，消泡劑0.2%，卡松0.1%，黃原膠0.2%，水適量，將上述組分剪切均勻，經(jīng)砂磨機研磨，至物料粒徑D90≤5 μm，并將丙硫菌唑調(diào)配至20%，即得20%丙硫菌唑懸浮劑。

30%氟唑菌酰羥胺懸浮劑制備，氟唑菌酰羥胺30%，潤濕劑Genapol X060 1%，YUS-FS3000 2%，Agrilan 788 2%，Ethylan 324 2%，乙二醇5%，硅酸鎂鋁1%，消泡劑0.2%，卡松0.1%，黃原膠0.15%，水適量，將上述組分剪切均勻，經(jīng)砂磨機研磨，至物料粒徑D90≤5 μm，即得30%氟唑菌酰羥胺懸浮劑。

1.3.3 施藥方法

采用電動噴霧器進行常規(guī)均勻噴霧，葉片正反面以及莖基部均勻噴霧施藥。共施藥2次，在小麥揚花期和小麥盛花期各施藥1次，每667 m2兌水50 kg。施藥24 h無降雨，施藥后采用田間常規(guī)化管理。

1.3.4 田間藥效調(diào)查與統(tǒng)計

統(tǒng)計方法參照《農(nóng)藥田間藥效試驗準則》GB/T 17980.30—2000進行調(diào)查。調(diào)查方法采用對角線五點取樣，每點調(diào)查100穗，根據(jù)麥穗損害程度分級，記錄病株數(shù)和病級數(shù)。調(diào)查時間為第2次施藥后3、25 d。第2次施藥后3 d觀察小麥的生長情況是否正常，葉片、植株有無失綠、灼傷斑點等藥害癥狀。在施藥后25 d統(tǒng)計病穗數(shù)并計算病情指數(shù)和防治效果。

小麥赤霉病分級標準(以穗為單位)：0級，全穗無??；1級，感病病穗面積占全穗面積的1/4以下；3級，感病病穗面積占全穗面積的1/4～1/2；5級，感病病穗面積占全穗面積的1/2～3/4；7級，感病病穗面積占全穗面積的3/4以上。

2 結(jié)果與分析

2.1 毒力測定結(jié)果

丙硫菌唑單劑的EC50值為22.44 mg·L-1，氟唑菌酰羥胺單劑的EC50值為0.33 mg·L-1，混配比例1∶1、2∶3、1∶2的EC50值分別為0.47、0.19、0.28 mg·L-1。丙硫菌唑和氟唑菌酰羥胺混配比例1∶1、2∶3、1∶2的共毒系數(shù)分別為137.54、285.91、175.36，以丙硫菌唑和氟唑菌酰羥胺混配比例2∶3的共毒系最大，增效最為明顯(表1)。

表1 不同藥劑對小麥赤霉病菌的毒力Table 1 Virulence of different agents against fusarium head blight

2.2 田間藥效結(jié)果

在小麥的安全性上，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑在2次施藥后3 d，小麥植株正常，無葉片發(fā)黃、藥斑等現(xiàn)象，安全性良好。施藥后25 d，脫粒調(diào)查未發(fā)現(xiàn)因藥害產(chǎn)生的畸形谷粒，安全性好。50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑施用劑量300、400、500 mL·hm-2對小麥安全性良好。

在小麥的防治效果上，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑制劑量300、400、500 mL·hm-2病穗率分別為4.40%、1.80%、0.20%，防治效果分別為91.76%、97.03%、99.77%，病穗率和防治效果顯著優(yōu)于市場上常規(guī)藥劑25%多菌靈可濕性粉劑、36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑以及單劑20%丙硫菌唑懸浮劑、30%氟唑菌酰羥胺懸浮劑(表2)。

表2 田間藥效Table 2 Efficacy in the field

在田間調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑不但對小麥赤霉病有非常好的預防和防治效果，同時還可以兼治白粉病和銹病。

3 討論

小麥赤霉病俗稱小麥爛麥頭、小麥紅麥頭、小麥麥穗枯，從苗期到穗期均可發(fā)病，可引起苗腐、莖基腐、稈腐和穗腐，以穗腐為害最大。小麥赤霉病可由多種鐮刀菌侵染引起。近年來，隨著我國土地流轉(zhuǎn)及集約化程度的提高，無人機噴霧、大型機械化噴霧普及以及統(tǒng)防統(tǒng)治面積逐漸擴大，丙硫菌唑?qū)θ梭w危害的風險基本可控，丙硫菌唑在我國迎來了登記高峰，取得原藥登記證的企業(yè)累計有11家，可見市場對它的期望和追捧。但是由于丙硫菌唑的作用靶標突變，目前已出現(xiàn)一些具有抗性的病原真菌突變體，為了延緩丙硫菌唑的抗性產(chǎn)生和發(fā)展。本研究由室內(nèi)毒力測定證實，丙硫菌唑?qū)π←湷嗝共【z的EC50值為22.44 mg·L-1，氟唑菌酰羥胺對小麥赤霉病菌菌絲的EC50值為0.33 mg·L-1，氟唑菌酰羥胺的毒力指數(shù)是丙硫菌唑的6倍以上，比丙硫菌唑?qū)π←湷嗝共【z的抑制率更強，混配1∶1、2∶3、1∶2的共毒系數(shù)值均大于120，表明丙硫菌唑和氟唑菌酰羥胺的3種混配比例對小麥赤霉病菌菌絲抑制表現(xiàn)增效作用，且2∶3混配時增效最為顯著。由田間試驗證實，50%丙硫菌唑·氟唑菌酰羥胺懸浮劑施用劑量300、400、500 mL·hm-2，21 d后病指防治效果分別為91.76%、97.03%、99.77%，顯著高于市場上常規(guī)藥劑25%多菌靈可濕性粉劑、36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑。因此，丙硫菌唑和氟唑菌酰羥胺混配防治由鐮刀菌引起的小麥赤霉病可行，研究結(jié)果為生產(chǎn)中農(nóng)藥復配使用提供理論依據(jù)。