王鈁鍵　龍杰　高娜　馬小娟　李瑞?！≠Z天柱

【摘 要】 目的：以羥丙基甲基纖維素為緩釋材料制備白屈菜總生物堿緩釋薄膜衣片解決白屈菜有效成分藥物濃度不穩(wěn)定的缺點，并建立可靠的含量測定方法。方法：采用單因素實驗對白屈菜總堿緩釋薄膜衣片制備工藝進(jìn)行篩選，以釋放度為依據(jù)；采用高效液相色譜法（HPLC）建立了白屈菜總堿緩釋薄膜衣片中血根堿的含量測定方法。結(jié)果：優(yōu)化的緩釋片工藝處方：30%白屈菜總堿提取物、30%HPMC、20%可壓性淀粉、10%乳糖、10%微晶纖維素，擠壓制粒，加1%硬脂酸鎂，壓片，即得。結(jié)論：該工藝制得白屈菜總堿緩釋片釋藥曲線平緩，緩釋效果良好，方法簡單易行，所得薄膜衣片外觀和可壓性良好。

【關(guān)鍵詞】 白屈菜總堿；緩釋片；制備工藝；薄膜衣片

【中圖分類號】R283 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2024）04-0013-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.04.zgmzmjyyzz202404004

Study on Preparation Process of Chelidonium Majus Total Alkaloid Sustained-release Tablets

WANG Fangjian LONG Jie GAO Na MA Xiaojuan LI Ruihai* JIA Tianzhu

Abstract：Objective To prepare Chelidonium majus total alkaloid sustained-release film-coated tablets using hydroxypropyl methyl cellulose as sustained-release material to solve the shortcomings of unstable drug concentration of celandine active ingredient， and to establish a reliable content determination method. Methods A single-factor experiment was used to screen the preparation process of celandine total alkali sustained-release film-coated tablets， and the release degree was the basis. A method for determining the content of ethrogen in celandine total alkali sustained-release film-coated tablets was established by high performance liquid chromatography（HPLC）.Results The optimized process of sustained-release tablets was formulated： 30% celandine total alkali extract， 30% HPMC， 20% compressible starch， 10% lactose， 10% microcrystalline cellulose， extruded granulation， plus 1% magnesium stearate， tableting， that is. Conclusion The process yields a gentle slow-release curve of celandine total alkali sustained-release tablets， good sustained release effect， simple and easy method， and good appearance and compressibility of the resulting film-coated tablets.

Key words：Chelidonium Majus Total Alkali; Sustained-release Tablets; Preparation Process; Film-coated Tablets

白屈菜（Chelidonium majus L.）是用于鎮(zhèn)咳、止痛、利尿、解毒的傳統(tǒng)中藥，最早記載于《救荒本草》，最為人們所熟知的別名為斷腸草。生物堿成分是白屈菜的主要有效成分［1］。白屈菜紅堿和血根堿的血漿半衰期很短［2］，極大限制了白屈菜的臨床應(yīng)用，緩釋制劑能維持平緩血藥濃度，減少服藥次數(shù)，增加患者用藥依從性。

實驗室前期對白屈菜做了大量研究，建立醋制白屈菜的提取方法以及HPLC法測定白屈菜中生物堿含量的方法［3］?，F(xiàn)在前期工作的基礎(chǔ)上，以白屈菜總堿緩釋薄膜衣片為模型藥物，進(jìn)行薄膜衣片的處方設(shè)計和制備工藝研究，并用體外釋放度對其進(jìn)行了科學(xué)評價。以期為白屈菜緩釋制劑的應(yīng)用提供工作基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮）；SHZ－Ⅲ 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；RCZ-6N智能溶出儀（黃海藥檢）；FT-2000AF脆碎度儀（天大天發(fā)）；YPD-200C片劑硬度檢測儀（黃海藥檢）；ZP-5B壓片機(jī)（上海天凡藥機(jī)制造廠）；ME55電子天平（梅特勒精密電子天平）；小型家用粉碎機(jī)（美的）。

1.2 材料 白屈菜總生物堿提取物（由本課題組提取分離制備）；血根堿對照品（大連美侖生物）；HMPC K15M（吉林化工）；可溶性淀粉、微晶纖維素（滬試）；乳糖（北京奧博星01-025）；硬脂酸鎂（山河藥輔）；預(yù)混包衣粉（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮（西隴科學(xué)）；丙烯酸樹脂（南京都萊生物）；乙腈為色譜純（國藥集團(tuán)），甲醇為色譜純（大茂），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 白屈菜總生物堿緩釋片的含量測定說明 白屈菜中的生物堿作為其主要的有效成分在抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)咳平喘、抗氧化等多方面都有作用，其中血根堿和白屈菜紅堿在血液中的代謝速度很快，因此把白屈菜總堿做成緩釋片。又因為本實驗主要考察白屈菜總堿緩釋片對于糖尿病的降糖作用，通常以為糖尿病與炎癥有關(guān)，白屈菜生物堿血根堿抗炎活性最強(qiáng)。故以血根堿作為白屈菜總堿的一個代表性含量檢測指標(biāo)，在接下來白屈菜總生物堿緩釋片含量測定和釋放度測定中均以血根堿為代表物進(jìn)行檢測。血根堿對照品及供試品溶液應(yīng)在低溫、避光條件下儲存。

2.2 液相色譜條件 色譜柱：Kromasil ODS-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）中匯達(dá)分析柱；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸鹽緩沖溶液（B，pH=3），0～12 min，15%A；12～32，15%A→25%A條件進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為270 nm；流速1 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取血根堿對照品0.5 mg，置于2 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成0.25 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

2.3.2 供試品溶液的制備 取10片白屈菜總生物堿緩釋片，置于研缽中快速研勻后，精密稱定1.0 g，加入50 mL甲醇，超聲30 min，加2 moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH=11，抽濾，濾液加氯仿萃取3次，每次50 mL；合并氯仿層，回收溶劑；濃縮液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度。過0.45 μm的微孔濾膜備用。

2.3.3 陰性溶液的制備 按處方比列及方法制備不含白屈菜總堿浸膏粉的陰性樣品，同法制備陰性溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性實驗 分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液以及陰性溶液20 μL，注入液相色譜儀，按“2.2”項下色譜條件分析，色譜圖如圖1所示。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取血根堿對照品2 mg，置于2 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液（1 mg/mL）。移取1 mL于2 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，續(xù)取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)液1 mL于2 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，續(xù)取兩次；然后各精密吸取20 μL注入液相色譜儀中，測定峰面積，以進(jìn)樣量的對數(shù)與峰面積積分值做線性處理，得回歸方程：y=13567x+663.46，R=0.9998。進(jìn)樣量在0.0625 mg范圍內(nèi)，峰面積積分值與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系，樣品的峰面積積分值在此范圍內(nèi)，即可用回歸方程推算進(jìn)樣量及樣品濃度。

2.4.3 精密度實驗 精密吸取0.25 mg/mL的血根堿對照品20 μL測定峰面積積分值，在穩(wěn)定條件下重復(fù)測定5次。峰面積積分值平均值為4086.8，RSD=1.93%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性實驗 按照“2.3.2”項制備供試品溶液（BQC-1），精密吸取20 μL在不同時間進(jìn)樣，峰面積積分值平均值為2099.8，RSD=1.72%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 重復(fù)性實驗 對樣品BQC-1取五份進(jìn)行測定，結(jié)果RSD=2.1%，表明樣品的重現(xiàn)性較好。

2.4.6 加樣回收實驗 取已知含量的樣品5份（含血根堿1 mg/g），約0.25 g，精密稱定，分別精密加入血根堿對照品甲醇液（0.385 mg/mL）各4.0 mL，然后移取加入46 mL甲醇，按“2.3.2”制備供試品溶液，測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4.7 含量測定 依“2.3.2”項制備供試品，“2.2”色譜條件對白屈菜總生物堿緩釋片（20230225；20230226；20230227）進(jìn)行含量測定。結(jié)果見表2。

本文建立了白屈菜總生物堿緩釋片的HPLC含量測定方法，方法學(xué)考察表明該法簡單可靠，以該法測定白屈菜總生物堿緩釋片中血根堿含量，平均值為1.08 mg/g，證明白屈菜總堿緩釋片中血根堿含量穩(wěn)定，可以作為白屈菜總生物堿緩釋片的含量測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

2.5 釋放度測定方法 取白屈菜總生物堿緩釋片6片，按《中國藥典》2020年版（四部）溶出度與釋放度測定法，通則第一法（轉(zhuǎn)籃法）操作［4］，1.0%十二烷基硫酸鈉溶液（SDS） 800 mL作為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，溫度為（37±0.5） ℃，分別于2 h、4 h、6 h、8 h、10 h取樣5 mL， 30 s內(nèi)用0.45 μm微孔濾膜過濾，同時補(bǔ)充等體積的同溫介質(zhì)，精密移取續(xù)濾液4 mL于10 mL 具塞試管中，揮干溶劑，加入60%乙醇適量溶解后，搖勻，定容至10 mL，照 “2.4.7”項下測定方法測定生物堿含量，以為血根堿代表物進(jìn)行檢測，并按下式計算緩釋片的累積釋放度。Q=cnVt+Vs∑cn-1其中，Q表示緩釋片的累積釋放度; cn表示實測濃度;Vt表示溶出介質(zhì)體積;Vs表示取樣體積。

2.6 白屈菜總生物堿緩釋片制備工藝 加入處方量的白屈菜總堿浸膏粉與HPMC K15M、乳糖、可壓性淀粉、微晶纖維素，于家用粉碎機(jī)中混勻，加入適量的90%乙醇制軟材，用60目篩網(wǎng)擠壓制粒，60 ℃干燥45 min，干顆粒過60目篩網(wǎng)整粒。稱取處方量硬脂酸鎂加入干顆?；旌暇鶆?。調(diào)節(jié)片重0.3 g，壓力40～50 N，以直徑8 mm弧形沖頭壓片。素片過10目篩網(wǎng)選片，測定片重差異和硬度和脆碎度，合格品60 ℃干燥120 min。8%卡樂康預(yù)混包衣粉100 mL，包衣鍋溫度60 ℃，噴液壓力-0.4 MPa，取出合格素片置包衣鍋內(nèi)，調(diào)節(jié)噴嘴至合適角度，緩慢包衣5～10層，置60 ℃烘干6 h，即得。

2.7 處方因素的考察

2.7.1 不同緩釋材料對釋放度的影響 分別以HPMC K15M、丙烯酸樹脂、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）作為緩釋材料，三種材料用量一致，其余輔料也一致，按照“2.6”制備緩釋片，測定釋放度。由圖2可知，以HPMC K15M為緩釋材料效果最好，PVP的緩釋效果不理想，在6 h時累積釋放度高于70%不符合要求，而丙烯酸樹脂釋藥緩慢亦不是最佳選擇。綜合來看，HPMC K15M為制備白屈菜總生物堿緩釋片最佳緩釋材料。

2.7.2 不同比例HPMC K15M對釋放度的影響 其余輔料不變，調(diào)節(jié)HPMC K15M占比分別為20%、30%、40%，按照“2.6”制備緩釋片，測定釋放度。由圖3可知，HPMC K15M占比20%時，血根堿突釋，可能引起中毒，30%釋藥曲線較為平緩，累計釋放度亦在理想范圍內(nèi)，當(dāng)占比達(dá)到40%時，樣片明顯釋藥遲緩，10 h累計釋放度不足70%。HPMC K15M占比30%最佳。

2.7.3 不同比例的輔料對釋放度的影響 保持其他輔料的用量不變，調(diào)節(jié)乳糖與可壓性淀粉的比例分別為1∶1、2∶1、1∶2，按照“2.6”制備工藝制備緩釋片，測定釋放度。由圖4可知，乳糖和可壓性淀粉的比例升高都會使得釋放度堿緩，且二者結(jié)果相差不大，由于乳糖比較昂貴，最終采用乳糖∶[KG-*3/5]可壓性淀粉為1∶[KG-*3/5]2制備緩釋片。

2.7.4 不同含量硬脂酸鎂對釋放度的影響 保持其他輔料不變，分別以1%、3%、5%硬脂酸鎂做潤滑劑制備緩釋片，測定釋放度。由圖5可知，隨著硬脂酸鎂的含量升高，前期釋放度升高了，但是6 h以后的釋放度呈負(fù)相關(guān)。1%的硬脂酸鎂作為潤滑劑效果最好。

2.8 白屈菜總生物堿緩釋片處方優(yōu)化［5］ 根據(jù)單因素考察的結(jié)果，處方為30%的浸膏粉與30%HPMC K15M加入10%乳糖、10%微晶纖維素、20%可壓性淀粉混勻，以適量90%乙醇為潤濕劑，擠壓制粒，干燥整粒后加1%硬脂酸鎂做潤滑劑，壓片即得。

2.9 白屈菜總生物堿緩釋片處方優(yōu)化驗證 以優(yōu)化后的處方制備緩釋片，測定釋放度，結(jié)果見表3。結(jié)果說明優(yōu)化后的處方穩(wěn)定可行，可以達(dá)到很好的緩釋效果。

3 討論

研究以血根堿為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立了白屈菜總生物堿緩釋片的含量測定的方法，方法學(xué)考察證明該法簡單可靠。以釋放度對緩釋片的輔料進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明不同的緩釋材料、緩釋材料的占比、填充劑的比列、潤滑劑的含量都會對緩釋片的釋放度造成影響，其中影響最明顯的是緩釋材料的種類和占比。

通過控制擴(kuò)散速度的方法制備白屈菜生物堿緩釋片。將白屈菜生物堿做鹽化處理增加其溶解度（一般認(rèn)為緩釋制劑溶解度的低限為0.1 mg/mL）與親水性緩釋材料HPMC混合，再以由HPMC為成膜材料的卡樂康包衣粉包衣，制成骨架片。以乳糖、淀粉、微晶纖維素為填充劑改善可壓性，硬脂酸鎂為潤滑劑增加片劑成型度。先制粒再壓片而不是直接粉末壓片使藥物白屈菜浸膏粉本身可壓性較差，易吸濕，不易與輔料混合均勻，直接壓片效果差，制顆粒后可壓性與均勻度均得到改善。緩釋制劑的緩釋方法大致分為：控制溶出速度、控制擴(kuò)散速度、利用溶蝕作用、利用滲透作用（滲透泵片）、離子交換法［6］。

藥物的輔料是制劑的重要組成部分，輔料要求適合所選制劑類型的要求，羥丙基甲基纖維素（HPMC）是近來常用的一種親水性緩釋材料，是一種毒性低，安全性高的藥用輔料［7］。HPMC的緩釋原理為遇水或消化液親水性骨架會快速膨脹，形成凝膠包裹藥物減緩藥物的釋放［8］。研究者用HPMC共噴霧干燥很好地解決了干姜醇提物難以壓縮成型的問題，為中藥制劑原料壓縮成型差的共性找到了新思路［9］。HPMC作為一種熱門材料，在農(nóng)業(yè)、食品、生物醫(yī)藥領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

乳糖作為一種優(yōu)良的藥用輔料，在應(yīng)用時需要注意的是其可能與含胺的活性藥物發(fā)生美拉德反應(yīng)。實驗結(jié)果出現(xiàn)的乳糖的比列增加引起了釋放速率的加快可能是因為乳糖與緩釋材料和藥物的相容性好，從而加快了藥物溶出［10］。

本文通過對白屈菜總生物堿進(jìn)行成鹽處理，解決了其水溶性差的問題。加入了適量的微晶纖維素很好地解決了前期輔料可壓性差、易松片的問題。另白屈菜總生物堿浸膏粉易吸濕，用薄膜包衣的方法很好地解決了這一問題，提高了所制白屈菜總生物堿緩釋片的穩(wěn)定性，利于儲存。綜上，以HPMC作為緩釋材料制備親水型凝膠骨架片法制備白屈菜生物堿緩釋片的方法切實可行，單因素實驗優(yōu)化的處方工藝穩(wěn)定有效，HPMC作為緩釋材料有明顯優(yōu)勢。所制白屈菜生物堿緩釋片符合藥典緩釋制劑釋放度要求，釋藥曲線平緩，緩釋效果良好?？房殿A(yù)混包衣粉是理想包衣材料，操作簡單，包衣效果良好。

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（收稿日期：2023-05-11 編輯：劉 斌）

基金項目：國家藥典委員會項目（20180604005）。

作者簡介：王鈁鍵（1998—），男，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為中藥學(xué)。E-mail：2368769792 @qq.com

通信作者：李瑞海（1973—），男，漢族，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向為中藥活性成分及中藥炮制。E-mail：1801517231@qq.com