王中杰,王寶杰,肖發(fā)沂,鄭立森,蘇 丹

(山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院,山東濰坊 261061)

中藥發(fā)酵作為炮制的重要工藝,是現(xiàn)代微生物技術(shù)和傳統(tǒng)中藥的有機(jī)融合,在現(xiàn)代養(yǎng)殖生產(chǎn)中發(fā)揮重要的疫病防治作用。研究和實(shí)踐表明,五倍子、山楂、厚樸等中藥發(fā)酵后添加于斷奶仔豬日糧中,機(jī)體內(nèi)的溶菌酶活性和免疫球蛋白會(huì)顯著增加,仔豬的腹瀉率下降,生長性能提高;青蒿葉渣進(jìn)行固體發(fā)酵后,粗蛋白及雙氫青蒿素含量大幅度提升,添加在蛋雞的飼料中,蛋殼的光澤度改善,糞便細(xì)膩,提高了飼料利用率和經(jīng)濟(jì)效[1-2]。

六君子湯具有健脾補(bǔ)氣、燥濕化痰的功效,在現(xiàn)代肉雞養(yǎng)殖中發(fā)揮了調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)機(jī)體生長的功能。但六君子湯發(fā)酵劑的研究較少,為更好地提高其療效,本課題組對(duì)六君子湯進(jìn)行了加味研究并制成發(fā)酵劑,添加于肉雞飼料中,測定料肉比、日增重、免疫器官指數(shù)、新城疫(ND)抗體效價(jià)和血清免疫球蛋白( IgG、IgA、IgM)等指標(biāo)變化,旨在探討其對(duì)白羽肉雞生長性能和免疫機(jī)能的作用,為該制劑的進(jìn)一步研究及應(yīng)用提供思路和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中草藥 試驗(yàn)所用中草藥有黨參、炒白術(shù)、茯苓、陳皮、法半夏、柴胡、芍藥、炙甘草,均購自濰坊市同仁堂藥店,按照君臣佐使原則配伍中草藥組方,參照張桂枝發(fā)酵復(fù)方中草藥混菌發(fā)酵劑的步驟及方法制備[3]。

1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物 健康良好、體重相近白羽肉雞400只,購自濟(jì)南斯帕法斯家禽有限公司。將試驗(yàn)雞隨機(jī)分為4組,每組設(shè)5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20只,試驗(yàn)期間各組采食、飲水等飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相同,符合國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及管理?xiàng)l例。

1.1.3 主要試劑 雞新城疫活疫苗(La Sota株),北京信得威特科技有限公司產(chǎn)品;新城疫標(biāo)準(zhǔn)濃縮抗原及標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供;IgG、IgA、IgM ELISA檢測試劑盒,長春匯力生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.1.4 主要儀器 高速離心機(jī)、96孔V型反應(yīng)板、微量移液器、酶標(biāo)儀、生化培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱等。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥 空白對(duì)照組(A)飼喂基礎(chǔ)日糧,中草藥對(duì)照組(B)添加1.2%未發(fā)酵加味六君子湯方劑,試驗(yàn)1組(C)和試驗(yàn)2組(D)分別在飼料中添加0.6%和1.2%加味六君子湯發(fā)酵劑。肉雞6日齡添加試驗(yàn)中草藥、發(fā)酵,連續(xù)使用7 d。免疫程序:各組雞分別在7日齡、21日齡免疫接種新城疫活疫苗(LaSota株)。

1.2.2 指標(biāo)檢測 按照以下方法分別測定平均日增重、階段料肉比、免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白濃度和抗體效價(jià)。

平均日增重=周增重量/7;階段料肉比=飼料消耗量/肉雞增重量

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量(g)/試驗(yàn)階段體重(kg)

免疫球蛋白濃度的測定分別按照試劑盒說明書操作步驟完成,新城疫抗體效價(jià)的測定采用微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)。

1.2.3 樣品采集 試驗(yàn)雞在8、15、22、29、36日齡時(shí),空腹稱重,統(tǒng)計(jì)喂料量、體重等數(shù)據(jù),采血后頸靜脈放血致死,收集脾臟、胸腺和法氏囊免疫器官,置-70℃超低溫冰箱保存待用。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示試驗(yàn)結(jié)果,用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件的One-Way ANOVA單因素方差分析試驗(yàn)數(shù)據(jù), Dun-can's 進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)白羽肉雞平均日增重的影響

15、22、29日齡時(shí)各組肉雞平均日增重差異不顯著(P>0.05),36日齡時(shí)試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組及中草藥對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),但與空白對(duì)照組相比校差異顯著(P<0.05)(表1)。

表1 加味六君子湯發(fā)酵劑對(duì)肉雞平均日增重的影響

2.2 對(duì)白羽肉雞料肉比的影響

各試驗(yàn)組雞25、22日齡時(shí)差異均不顯著(P>0.05),29、36日齡時(shí)C組與D組相比差異不顯著(P>0.05),但與B組和A組相比差異顯著(P<0.05)(表2)。

表2 加味六君子湯發(fā)酵劑對(duì)肉雞料肉比的影響

2.3 對(duì)白羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響

4個(gè)組肉雞15日齡時(shí)免疫器官指數(shù)差異不顯著(P>0.05),22日齡時(shí)B～D組肉雞的胸腺指數(shù)均明顯增高,與A組相比差異顯著(P<0.05),29、36日齡時(shí)C組肉雞的全部免疫器官指數(shù)均高于A組和B組,且差異顯著(P<0.05), 29 日齡時(shí),與D組相比較,C組免疫器官指數(shù)差異不顯著(P>0.05),36日齡時(shí)C組法氏囊指數(shù)顯著高于D組(P<0.05)(表3)。

表3 加味六君子湯發(fā)酵劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.4 對(duì)白羽肉雞新城疫抗體效價(jià)的影響

4個(gè)組肉雞在15日齡、22日齡時(shí)新城疫抗體效價(jià)差異不明顯(P>0.05);29日齡、36日齡時(shí)B～D組的新城疫抗體效價(jià)明顯高于A組(P<0.05),C組、D組的新城疫抗體效價(jià)明顯高于B組(P<0.05),但C組和D組之間無明顯差異(P>0.05)(表4)。

表4 加味六君子湯發(fā)酵劑對(duì)肉雞新城疫抗體效價(jià)的影響

2.5 對(duì)白羽肉雞血清免疫球蛋白的影響

4個(gè)組肉雞IgG、IgA、IgM指標(biāo)在15日齡時(shí)無明顯差異(P>0.05);IgG濃度在22日齡時(shí)明顯升高,與B組和A組相比較,差異顯著(P>0.05); B～D組IgA濃度在22日齡時(shí)明顯高于A組(P<0.05); B～D組IgG和IgA濃度在29日齡時(shí)顯著高于A組(P<0.05);與A組和B組相比較,C組IgM濃度29日齡時(shí)顯著升高,差異明顯(P<0.05);與A組相比較,B～D組IgG濃度36日齡時(shí)顯著升高,差異明顯(P<0.05),且C組、D組與B組相比差異顯著(P<0.05); C組的IgA 濃度明顯高于A組和B組(P<0.05)(表5)。

表5 加味六君子湯發(fā)酵劑對(duì)白羽肉雞血清免疫球蛋白的影響

3 討論

本試驗(yàn)以肉雞脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)作為衡量機(jī)體免疫機(jī)能的重要指標(biāo),其數(shù)值增加說明肉雞免疫器官發(fā)育良好,免疫機(jī)能強(qiáng)[4-6]。試驗(yàn)結(jié)果顯示,在白羽肉雞飼料中添加一定比例的加味六君子湯發(fā)酵劑,試驗(yàn)雞的免疫器官指數(shù)比中草藥對(duì)照組顯著提高,說明加味六君子湯發(fā)酵后可健脾胃、養(yǎng)氣血、化濕濁,提高肉雞免疫器官細(xì)胞分裂增殖,提升肉雞的生產(chǎn)及免疫力。

本試驗(yàn)1組的新城疫抗體效價(jià)29、36日齡時(shí)明顯高于中草藥對(duì)照組和空白對(duì)照組,抗體作為介導(dǎo)體液免疫的重要分子,其效價(jià)提高說明該方劑發(fā)酵后可提升肉雞的體液免疫能力,防止傳染病的暴發(fā)和流行,這與文獻(xiàn)[7]研究結(jié)果相吻合。在白羽肉雞飼料中添加一定比例的加味六君子湯發(fā)酵劑,機(jī)體的IgG、IgA和IgM的濃度顯著提高,體液免疫功能顯著增強(qiáng)。這與該方劑增強(qiáng)脾胃運(yùn)化機(jī)能有關(guān),進(jìn)而合成機(jī)體免疫球蛋白的能力增加,促進(jìn)機(jī)體體液免疫功能增強(qiáng)[7]。介導(dǎo)體液免疫的主要抗體是免疫球蛋白,具有抗菌、抗外毒素或抗病毒的免疫功能,其含量升高可以增強(qiáng)機(jī)體的抵抗能力[8-9]。本研究中加味六君子湯經(jīng)過發(fā)酵后促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育、增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等作用明顯提高,生產(chǎn)實(shí)踐中在肉雞日糧中以添加0.6%量為宜,可以提高肉雞養(yǎng)殖效益。