劉義軍，李蓋，林麗靜，劉佳夢，陳嘉恩，黎智韻，陳港*

（1.華南理工大學輕工科學與工程學院，廣州 510641；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所海南省果蔬貯藏與加工重點實驗室，廣東 湛江 524001；3.廣東收貨罐頭食品有限公司，廣東 湛江 524100）

菠蘿是我國重要的熱帶水果，主要分布在廣東、海南、廣西和云南省等，全國種植面積突破6.7萬hm2[1]。菠蘿果實采收后，其副產(chǎn)品（如菠蘿根、莖和葉）大多被粉碎并返回農(nóng)田，利用程度較少[2-3]。菠蘿葉渣是指菠蘿葉通過機械刮麻獲得纖維后的剩余物。由于菠蘿葉渣含豐富的碳水化合物、菠蘿蛋白酶等成分，菠蘿葉渣具有良好的適口性和消化性能，有助于提高豬和羊等畜禽的生長性能、營養(yǎng)物質消化率[4-5]。此外，產(chǎn)沼氣微生物可以將菠蘿葉渣中碳水化合物轉化為丁醇、甲烷等[6]，因此其具有廣闊的應用前景。然而，如何提高菠蘿葉渣的附加值，如何提高菠蘿葉渣的利用率是迫切需要研究的問題。

靈芝是中國著名的藥用和食用真菌，其生長需要碳、氮、無機鹽和維生素等營養(yǎng)成分[7]。碳是至關重要的成分，為菌絲生長提供能量，但也參與菌絲體中維生素、蛋白質和氨基酸的形成[8]。氮對靈芝菌絲體的生長也是必需的，靈芝菌絲體主要吸收還原態(tài)的含氮化合物，如氨基酸、蛋白質、尿素、氨、銨鹽和硝酸鹽[9]。相關研究結果表明，熱處理、超聲波處理、NO濃度、氮源濃度等因素都會影響靈芝生長過程中相關功能基因的表達，導致代謝產(chǎn)物的顯著差異。pH值調節(jié)三萜類化合物、細胞內和細胞外多糖、菌絲體蛋白質和其他發(fā)酵代謝產(chǎn)物的分泌及其抗氧化活性[10]。NO可以調節(jié)甲羥戊酸途徑基因的表達，促進靈芝中三萜類化合物含量的增加[11]。錳離子可以提高靈芝子實體中錳過氧化物酶的活性，如兒茶酚和棕櫚酰乙醇酰胺[12]。超聲波處理導致菌絲體代謝和轉錄水平的顯著變化[13]。高溫脅迫導致與蛋白質組裝、運輸和降解、能量代謝等相關的基因上調和下調。熱脅迫后，靈芝子實體激活蛋白質組裝等過程，促進多糖產(chǎn)量顯著增加[14]。氮源的濃度可以影響靈芝中AreA轉錄因子的表達，AreA轉錄因子在靈芝的生長、次生代謝和抗細胞壁脅迫中起重要作用[15]。

菠蘿葉渣富含蔗糖等快速碳源，以及鈣、鎂等氨基酸、維生素和微量金屬元素[16-17]，可作為營養(yǎng)添加劑促進G.lucidum菌絲體生長，增加菌絲體蛋白含量[18]。中國菠蘿葉渣年產(chǎn)量巨大，例如，中國廣東省每年超過20萬t。如果菠蘿葉渣經(jīng)上述方法利用后，其附加值可提高15美元/t，當?shù)夭ぬ}產(chǎn)業(yè)將獲得300萬美元的收益，同時還可以緩解大量皮渣釋放到道路、田間等造成環(huán)境問題。氮源和碳源的種類和含量對靈芝的生長有影響。菠蘿葉渣含有靈芝快速生長所需的快速碳源（包括葡萄糖）和快速氮源（包括氨基酸）。與傳統(tǒng)栽培基質相比，靈芝的代謝途徑會發(fā)生變化。因此，刺激營養(yǎng)物質的含量也會隨著菠蘿葉渣添加量的不同而發(fā)生變化，從而導致靈芝代謝物質的種類和含量發(fā)生變化，由于不同菠蘿葉渣添加量對赤靈芝發(fā)酵基質營養(yǎng)成分及體外抗氧化活性效果尚不清楚，因此本研究采用靈芝進行固態(tài)發(fā)酵，使靈芝菌絲體在培養(yǎng)基質中生長，以獲得大量的靈芝菌絲體。通過分析不同比例菠蘿葉發(fā)酵靈芝后其基質中主要營養(yǎng)成分分析、氨基酸分析以及基質中差異性氨基酸挖掘，探討固態(tài)發(fā)酵對赤靈芝發(fā)酵基質營養(yǎng)成分以及體外抗氧化的影響，為菠蘿葉渣的進一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試驗材料與菌株

菠蘿葉渣（菠蘿品種為‘巴里’）來源于海南省果蔬貯藏與加工重點實驗室機械刮纖維后剩余的副產(chǎn)物，菠蘿葉渣C/N比為185，含水量85%；赤靈芝原種從江蘇高郵食用菌研究所購買；玉米粒從糧油批發(fā)市場購得。

總抗氧化能力（T-AOC）/鐵還原能力試劑盒（FRAP法）、DPPH自由基清除能力、羥自由基清除能力試劑盒，蘇州格銳思生物科技有限公司。?；撬?、蛋氨酸砜、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸和脯氨酸等氨基酸標準品濃度為100 nmol/mL，德國曼默博爾公司。

1.1.2 試驗儀器與設備

YXQ-LS-50S 立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業(yè)有限公司）；Millrock ST85B3冷凍干燥機（美國Millrock公司）；A300全自動氨基酸分析儀（德國曼默博爾公司）；DHG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海林頻儀器股份有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品制備

將菠蘿葉渣、玉米粒等按照一定比例（菠蘿葉渣比例為0%、10%、12.5%、25%、50%）混合均勻，調節(jié)物料的水分含量至55%（干基），然后裝入17×33×0.05的聚丙烯袋中，蓋上海綿菌蓋套環(huán)，得到菌棒。菌棒置于121 ℃滅菌鍋中滅菌30 min，待溫度降低至80 ℃取出，冷卻至室溫。已完全冷卻好的菌棒，在接種箱中采用煙霧消毒劑（有效成分為二氯異氰尿酸鈉，有效率330～400 g/kg）消毒30 min，接入已培養(yǎng)好的2%赤靈芝固態(tài)菌種，接種后的靈芝菌棒在24～28 ℃暗光培養(yǎng)，待發(fā)酵菌絲體長滿菌袋后，取出，置于-40 ℃下凍干，即得赤靈芝發(fā)酵基質，粉碎后置于4 ℃保存待用。

1.2.2 總萜含量的測定

赤靈芝發(fā)酵基質中總萜含量的測定參考劉等[19]所述方法，略有修改。精密吸取濃度為0.2 mg/mL的齊墩果酸對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mL置于15 mL具塞試管中，依次加入0.2 mL 0.05 g/mL的香草醛冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸，充分混勻，在70 ℃水浴中加熱15 min，立即取出，冰浴中冷卻5 min，取出，加入4 mL乙酸乙酯，充分搖勻。以相應試劑作為空白，546 nm處測量吸光度，以吸光度（A）為縱坐標，質量濃度（c, μg/mL）為橫坐標，得到標準曲線回歸方程A=0.049 5c-0.045 4，R2=0.991 2。稱取2 g赤靈芝發(fā)酵基質粉末置于具塞錐形瓶中，加乙醇50 mL，超聲處理（功率140 W，頻率42 kHz）45 min，過濾，濾液置100 mL量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇置刻度，搖勻，取0.2 mL提取液參考上述標準曲線制備方法，測量溶液中齊墩果酸含量。

1.2.3 多糖含量的測定

赤靈芝發(fā)酵基質中多糖含量的測定參考劉均發(fā)等[20-22]所述方法，略有修改。分別吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mL葡萄糖標準溶液（0.1 mg/mL）于10 mL比色管中，補水至1.0 mL，加入0.5 mL 5%苯酚和2.5 mL濃硫酸，旋渦振蕩20 s，然后100 ℃水浴15 min，冷卻至室溫，于490 nm處測定吸光值，以1.0 mL純水按同樣顯色操作為空白，以葡萄糖含量（C, μg/mL）為橫坐標，吸光值（A）為縱坐標,葡萄糖標準曲線為A=0.009 8C+ 0.036 3，R2=0.993。稱取發(fā)酵基質粉末樣品1 g放入具塞試管中，按料液比1∶40加入水，90 ℃水浴3 h，5 000 r/min離心15 min，取上清液，加入5倍量無水乙醇，于4 ℃冰箱中靜置過夜，沉淀物加水溶解，定容于100 mL容量瓶中，即得樣品多糖溶液。取0.05 mL樣品多糖溶液于25 mL具塞試管中，加入0.5 mL 5%苯酚溶液和2.5 mL濃硫酸溶液，旋渦振蕩20 s，100 ℃水浴15 min,冷卻至室溫，于490 nm處測定吸光值，平行測定3次。根據(jù)標準曲線，計算樣品多糖含量。

1.2.4 粗纖維含量的測定

參考GB/T 8310—2013《茶粗纖維測定》方法。

1.2.5 水解氨基酸的測定

稱取發(fā)酵基質0.150 00 g（精確至0.02 g）于水解管中加入15 mL HCl溶液（水∶HCl=1∶1），置于110 ℃烘箱中水解24 h，待冷卻后過濾，濾液定容于25 mL容量瓶中，取1 mL于10 mL離心管中氮吹干，加入2 mL樣品稀釋液，漩渦震蕩使其充分溶解，后用注射器吸取，過0.22 μm有機相濾頭加至進樣瓶中，置于-20 ℃保存待用。

水解氨基酸測定采用T749-7N型鈉鹽分離柱（4.0 m×125 mm），V603N型除氨柱。儀器測定過程中柱溫箱溫度范圍30～70 ℃，分析流速250 μL/min，進樣體積20 μL，反應器溫度115 ℃，檢測波長為570 nm和440 nm。

1.2.6 游離氨基酸的測定

稱取發(fā)酵基質5 g（精確至0.01 g）于50 mL錐形瓶中，加入40 mL 0.01 mol/L鹽酸，旋渦混勻5 min，超聲提取5 min，定容于50 mL容量瓶中，混勻，避光靜置2 h，取5 mL提取液4 000 r/min離心10 min，取1 mL上清液，加入1 mL 4%磺基水楊酸，渦旋1 min，避光靜置1 h，12 000 r/min離心20 min，取上清液，0.22 μm有機相濾頭過濾，加至2 mL進樣瓶中，置于-20 ℃保存待用。

游離氨基酸測定采用T735-7型鋰鹽分離柱（4.0 m×125 mm），V602型除氨柱。儀器測定過程中柱溫箱溫度范圍30～70 ℃，分析流速250 μL/min，進樣體積20 μL，反應器溫度115 ℃，檢測波長為570 nm和440 nm。

1.2.7 體外抗氧化活性的測定

總抗氧化能力（T-AOC）的測定、DPPH自由基清除能力的測定和羥自由基清除能力的測定采用劉等[20]所述方法。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用德國曼默博爾公司的Aminopeak譜圖軟件對游離氨基酸和水解氨基酸數(shù)據(jù)進行分析。采用SPSS 20.0對表中數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析及顯著性分析。采用OriginPro 2021、SIMCA 14.1和Photoshop進行OPLS-DA模型驗證、S-plot圖繪制、柱形圖以及Venn diagram的繪圖等。

2 結果與分析

2.1 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中主要營養(yǎng)成分分析

由圖1可知，不同菠蘿葉渣添加量所得赤靈芝發(fā)酵基質中粗纖維含量為55%～61%，與未添加菠蘿葉渣相比，發(fā)酵基質粗纖維含量是降低的，可能源于赤靈芝生長過程中將栽培基質中粗纖維轉化為自身代謝所需的糖類等其他物質[17-18]。菠蘿葉渣添加量為25%時，粗纖維含量有最大值，為57.84%。顯著性分析結果表明，不同菠蘿葉渣添加量對粗纖維含量的差異性不顯著。發(fā)酵基質中總糖含量為19%～37%，其中10%～25%所得發(fā)酵基質中總糖與空白對照相比存在顯著性差異，且菠蘿葉渣添加量為12.5%時，多糖含量有最大值，為37.36%?？傒坪砍尸F(xiàn)出先增加后減少的趨勢，12.5%～50%與所得發(fā)酵基質中總萜與空白對照相比存在顯著性差異。蛋白質含量呈現(xiàn)出先減少后增加的趨勢，10%～50%與所得發(fā)酵基質中蛋白質含量與空白對照相比存在顯著性差異。

2.2 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中氨基酸分析

由表1可知，發(fā)酵基質中水解氨基酸主要由?；撬岷吞K氨酸等19種氨基酸組成，其中必需氨基酸17種、非必需氨基酸1種，甲硫氨酸氧化產(chǎn)物1種。隨著菠蘿葉渣添加量的增加，氨基酸含量整體呈現(xiàn)先降低后增加的趨勢。水解氨基酸主要以亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸等組成，異亮氨酸含量最高。顯著性分析結果表明，與未添加菠蘿葉渣相比，發(fā)酵基質中賴氨酸和甘氨酸含量存在顯著性差異。脯氨酸差異不顯著，說明菠蘿葉渣添加量對賴氨酸和甘氨酸代謝路徑具有顯著的調節(jié)作用。對脯氨酸代謝路徑不具備顯著的調節(jié)作用。

表1 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中氨基酸種類Table 1 The amino acids in fermentation substrate of Ganoderma lucidum with different addition of pineapple leaf residue

由表1可知，發(fā)酵基質中游離氨基酸主要由天冬酰胺、鵝肌肽、谷氨酸、丙氨酸和精氨酸等29種游離氨基酸組成。隨著菠蘿葉渣添加量的增加，肌氨酸、a-氨基己二酸呈現(xiàn)出增加的趨勢，其他氨基酸整體上呈現(xiàn)出下降的趨勢。顯著性分析結果表明，與未添加菠蘿葉渣相比，發(fā)酵基質中天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、γ-氨基正丁酸、組氨酸、3-甲基-L-組氨酸、鳥氨酸和精氨酸等8種游離氨基酸含量存在顯著性差異，說明在菠蘿葉渣作用下，上述8種游離氨基酸作為合成蛋白質的中間體異?；钴S。

2.3 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中差異性氨基酸挖掘

采用OPLS-DA結合S-plot圖進一步挖掘不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中的差異性氨基酸。不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中差異氨基酸OPLS-DA的分數(shù)散點情況如圖2（A）所示，置換檢驗結果如圖2（B）所示。由圖2A可知，OPLS-DA模型中R2X=0.838，R2Y=0.807，Q2=0.557，其中R2X=0.838表示該模型對X矩陣數(shù)據(jù)的解釋度為83.8%的數(shù)據(jù)變化，R2Y=0.807表示該模型對Y矩陣數(shù)據(jù)的解釋度為80.7%，Q2大于0.5，說明該模型可接受[23]。由圖2B可知，模型經(jīng)過200次交叉驗證后，模型過程中，R2和Q2均低于1.0，且Q2回歸線與橫坐標交叉，且與縱坐標交叉的截距小于0，說明該模型沒有出現(xiàn)過擬合[23]。同時交叉驗證分析結果中顯著性概率小于0.05，說明該模型穩(wěn)定可靠，具有統(tǒng)計學意義。由圖2A可知，菠蘿葉渣添加量為0%、10%、12.5%、25%和50%彼此之間，且與其他樣本之間都具有較好的分散度。當菠蘿葉渣添加量大于12.5%時，發(fā)酵基質所產(chǎn)生的氨基酸差異性越來越小。

圖2 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中氨基酸得分Figure 2 The scores of amino acids under different pineapple leaf residue addition

S-plot圖用于挖掘兩組發(fā)酵基質中差異性氨基酸，差異顯著的變量分布在“S”兩端，差異較小的變量聚集在原點附近[24]。菠蘿葉渣添加量0與10%、0與12.5%、0與25%、0與50%、10%與12.5%以及12.5%與25%的S-plot圖分別如圖3A、3B、3C、3D、3E和3F所示，且圖中紅點表示VIP>1的氨基酸，又稱之為差異顯著的氨基酸。由圖3A可知，10%菠蘿葉添加量與0%相比，存在谷氨酸（25，游離氨基酸）、脯氨酸（19，水解氨基酸）、天冬氨酰（24，游離氨基酸）、異亮氨酸（12，水解氨基酸）和精氨酸（18，水解氨基酸）等19種VIP大于1的差異性氨基酸成分，其中谷氨酸（25，游離氨基酸）的差異最為顯著（VIP>2）。由圖3B可知，12.5%菠蘿葉添加量與0%相比，存在3-甲基-L-組氨酸（43，游離氨基酸）、苯丙氨酸（38，游離氨基酸）、亮氨酸（36，游離氨基酸）、絲氨酸（5，水解氨基酸）和苯丙氨酸（15，水解氨基酸）等35種VIP大于1的差異性氨基酸成分。由圖3C可知，25%菠蘿葉添加量與0%相比，存在苯丙氨酸（38，游離氨基酸）、天冬氨酸（21，游離氨基酸）、蘇氨酸（22，游離氨基酸）、?；撬幔?0，游離氨基酸）和3-甲基-L-組氨酸（43，游離氨基酸）等25種VIP大于1的差異性氨基酸成分。由圖3D可知，50%菠蘿葉添加量與0%相比，存在鵝肌肽（45，游離氨基酸）、亮氨酸（36，游離氨基酸）、丙氨酸（30，游離氨基酸）、纈氨酸（10，水解氨基酸）和異亮氨酸（12，水解氨基酸）等20種VIP大于1的差異性氨基酸成分。由圖3E可知，10%菠蘿葉添加量與12.5%相比，存在蘇氨酸（22，游離氨基酸）、酪氨酸（37，游離氨基酸）、絲氨酸（23，游離氨基酸）、天冬氨酸（21，游離氨基酸）和3-甲基-L-組氨酸（43，游離氨基酸）等30種VIP大于1的差異性氨基酸成分。由圖3F可知，12.5%菠蘿葉添加量與25%相比，存在?；撬幔?0，游離氨基酸）、鳥氨酸（46，游離氨基酸）、賴氨酸（17，水解氨基酸）、蘇氨酸（22，游離氨基酸）和甲硫氨酸（11，游離氨基酸）等25種VIP大于1的差異性氨基酸成分。

圖3 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中氨基酸的S-plot圖Figure 3 The S-plot of amino acids in Ganoderma lucidum fermentation substrate

由圖4A可知，隨著菠蘿葉渣添加量的增加，發(fā)酵基質中差異性氨基酸個數(shù)呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢。Venn圖被用于挖掘不同樣本之間是否存在交叉性，不同菠蘿葉渣發(fā)酵基質中差異性氨基酸所得Venn圖如圖4B所示。由圖4B可知，12.5%存在6種特有差異性氨基酸成分，25%存在1種特有差異性氨基酸成分，50%存在1種特有差異性氨基酸成分。4組樣本共有差異性成分7種（1111）。10%與12.5%、25%、50%分別存在共有且特有差異性氨基酸成分2種、0種、5種。12.5%與25%、50%分別存在13種（0110）和1種（1010）共有且特有差異性氨基酸成分。25%與50%不存在共有且特有差異性氨基酸成分。說明，隨著菠蘿葉添加量的增加，差異性氨基酸數(shù)量差異越來越小。

圖4 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質中差異氨基酸種類圖（A）和Venn圖（B）Figure 4 The number of different aminos (A) and Venn diagram (B) in the fermentation substrate of G.lucidum with different pineapple leaf residues

0010表示化合物11、37、27、3、40和13。0011表示化合物1和9。0100表示化合物33。0110表示化合物43、38、21、48、22、23、20、47、44、35、46、26和29。0111表示化合物17。1000表示化合物8。1001表示化合物25、19、24、4和42。1010表示化合物31。1011表示化合物2、6和14。1101表示化合物45。1110表示化合物30和28。1111表示化合物12、18、10、5、7、36和15。

0010表示11、37、27、3、40和13。0011表示1和9。0100表示33。0110表示43、38、21、48、22、23、20、47、44、35、46、26和29。0111表示17。1000表示8。1001表示25、19、24、4和42。1010表示31。1011表示2、6和14。1101表示45。1110表示30和28。1111表示12、18、10、5、7、36和15。

2.4 不同菠蘿葉渣添加量下赤靈芝發(fā)酵基質水提物體外抗氧化活性分析

由表2可知，當菠蘿葉渣添加量為12.5%時，羥基自由清除能力有最大值（58.51%），且與10%、25%所得赤靈芝發(fā)酵基質水提物的羥基自由基清除能力差異不顯著，與50%和0%所得赤靈芝發(fā)酵基質水提物的羥基自由基清除能力差異顯著。當菠蘿葉渣添加量為50%時，總抗氧化能力有最大值（0.27 μg Trolox/mL），與0%和10%所得赤靈芝發(fā)酵基質水提物的總抗氧化能力差異顯著，與12.5%和25%所得發(fā)酵基質水提物的總抗氧化能力差異不顯著。添加菠蘿葉渣有助于提高赤靈芝發(fā)酵基質水提物的羥基自由基清除能力和總抗氧化能力，降低DPPH自由基清除能力。

3 討論

氮源、碳源和無機鹽等營養(yǎng)成分是靈芝生長所必須的營養(yǎng)成分，其種類和含量對靈芝的生長有影響[7]。菠蘿葉渣含葡萄糖、蔗糖、鈣、鎂等氨基酸、維生素和微量金屬元素[17]等促進靈芝快速生長的營養(yǎng)，本研究中菠蘿葉渣添加量不同，發(fā)酵基質中粗纖維、總糖、總萜、總蛋白等營養(yǎng)成分發(fā)生不同程度的變化規(guī)律。由于在原有發(fā)酵基質中添加不同含量的菠蘿葉渣，改變原有栽培基質中碳源、氮源等營養(yǎng)成分的組成和含量，干擾了靈芝菌絲生長過程中的相關代謝路徑，導致粗纖維等營養(yǎng)成分呈現(xiàn)出不同的變化規(guī)律。與未添加菠蘿葉渣相比，發(fā)酵基質粗纖維含量是降低的，總萜含量呈現(xiàn)出先增加后減少的趨勢，在菠蘿葉渣添加量為25%下，總萜含量有最大值，為1.36%。菠蘿葉渣添加量為12.5%時，多糖含量有最大值，為37.36%。蛋白質含量呈現(xiàn)出先減少后增加的趨勢，但含量均低于未添加菠蘿葉渣下蛋白質的含量。

氨基酸可以滿足動物需要促進動物生長，提高飼料利用率等[25]。本研究結果表明，發(fā)酵基質水解氨基酸和游離氨基酸的差異性因菠蘿葉渣的添加量不同而發(fā)生變化，整體上菠蘿葉渣添加量對賴氨酸和甘氨酸代謝路徑具有顯著的調節(jié)作用，與Liu Y.等[18]研究結果一致。對脯氨酸代謝路徑不具備顯著的調節(jié)作用。賴氨酸被稱為生長性氨基酸，是參與合成機體蛋白，包括骨骼肌、多肽激素、血漿蛋白以及酶等多種關鍵蛋白質，在魚類飼料、畜禽類等飼料中具有廣泛的應用，且也是比較缺乏的氨基酸[26]。菠蘿葉渣脅迫下，發(fā)酵基質不僅對氨基酸有所保留，同時促進粗纖維等成分轉化為功能性三萜等功能性成分，而靈芝總萜在大鼠的高膽固醇飼料中加入靈芝的菌絲體，可顯著降低血清和肝臟中膽固醇和甘油三酯的含量[27-28]。同時菠蘿葉渣脅迫下，發(fā)酵基質不僅營養(yǎng)成分有所改善，抗氧化能力也羥基自由基清除能力和總抗氧化能力顯著提高。靈芝發(fā)酵菠蘿葉渣，可作為抗氧化類功能性食品的生產(chǎn)原料，以提高豬、羊等畜禽的生長性能及營養(yǎng)物質消化率，提高菠蘿葉渣的附加值和利用率。上述研究結果可為菠蘿葉渣合理利用和開發(fā)提供基礎數(shù)據(jù)支撐。

4 結論

菠蘿葉渣干擾了赤靈芝菌絲體生長過程中代謝產(chǎn)物氨基酸的釋放，且菠蘿葉渣添加量不同，基質營養(yǎng)成分及體外抗氧化活性存在差異。菠蘿葉渣脅迫下促進赤靈芝發(fā)酵基質中粗纖維降解、釋放多糖含量；有助于提高赤靈芝發(fā)酵基質水提物的羥基自由基清除能力和總抗氧化能力，降低DPPH自由基清除能力對氨基酸組成及氨基酸組成以及相關代謝路徑具有不同的調節(jié)作用。