顧 梅，徐華誠，段帥凱，陳連清，李泉丹，習本軍

1. 北大醫(yī)藥股份有限公司，重慶 401121；

2. 福安藥業(yè)集團重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司，重慶 401121；

3. 中南民族大學化學與材料科學學院，湖北 武漢 430074

4. 湖北三峽實驗室，湖北 宜昌 443007

替諾福韋，化學名R-9-（2-磷酸甲氧基丙基）腺嘌呤，通過研究表明，對多種病毒株都具有很好的抑制作用，是國內(nèi)外治療艾滋?。╤uman immunodeficiency virus，HIV）和慢性乙型肝炎（hepatitis B virus，HBV）的首選藥物之一［1-2］，且具有很高的安全性和很好的治療效果［3-5］。但因為它是單磷酸腺苷類似物，無水溶性，也無法經(jīng)胃腸道完全吸收，藥物作用很低。所以必須先酯化為富馬酸替諾福韋酯，是一種新型核苷酸類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑［6-8］，具有水溶性，經(jīng)口服吸入后迅速轉(zhuǎn)變成具有活性的替諾福韋。然后在蛋白激酶的作用下經(jīng)過磷酸化過程，轉(zhuǎn)化成活化的物質(zhì)替諾福韋雙磷酸鹽。主要以以下兩種方式來控制病毒：一是對抗性地與有機物脫氧核糖復合來控制病毒聚合酶；二是進入病毒DNA 后致使DNA 鏈不再延長［9］，從而達到醫(yī)治艾滋病和慢性乙肝的功效。

近年來，替諾福韋及其關鍵中間體的合成路線文獻報道很多。張杰等［10］以腺嘌呤和（R）-碳酸丙烯酯制備（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤［R-9-（2-Hydroxypropyl）adenine，HPA］，后處理用甲苯共沸蒸餾帶出N，N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethylformamide，DMF），甲醇/異丙醇混合體系結(jié)晶；HPA 與（二乙氧基磷?；┘谆?-甲基苯磺酸［Diethyl（tosyloxy）methylphosphonate，DESMP］在叔丁醇鎂作用下反應，得到（R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤（tenofovir diethyl ester，TDE），最后在溴化三甲基硅烷作用下水解，得到替諾福韋。但整個過程使用溶劑種類多，無法回收套用；且TDE 未做后處理，未去除鎂離子直接往下投料，會有大量鎂鹽殘留，導致大量鎂鹽包裹部分產(chǎn)物、不易抽濾分離，大大影響反應收率，產(chǎn)物收率達到50%。王志剛等［11］以腺嘌呤和（R）-1，2-亞丙基碳酸酯為原料，制備HPA，后處理采用甲醇/異丙醇混合體系結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶；然后HPA 與DESMP 在叔丁醇鎂作用下反應，得到TDE，在溴化鈉、氯化三甲基硅烷共同作用下水解得到替諾福韋。但該路線使用溶劑種類多，無法回收套用，在最優(yōu)條件下收率僅49.6%。劉嘉等［12］以S-環(huán)氧丙醇為主要反應原料合成替諾福韋，通過鈀碳的催化還原及催化加氫反應將S-環(huán)氧丙醇還原為（R）-1，2-丙二醇，與碳酸乙酯進一步反應制得（R）-碳酸丙烯酯。然后又通過與腺嘌呤反應得到產(chǎn)物HPA，在叔丁醇鈉作用下與DESMP 反應得TDE，最后TDE 在溴化三甲基硅烷催化劑作用下水解后得到最終產(chǎn)物替諾福韋。但此方法存在反應過程復雜，使用溶劑種類多，無法回收套用，原料S-環(huán)氧丙醇價格比較貴、難以貯存的問題，總收率僅30%。李陳等［13］以（R）-碳酸-1，2-丙二醇酯和腺嘌呤為原料，對替諾福韋的藥物合成過程進行了改進優(yōu)化，考察了分步合成法和一鍋法這兩種工藝的參數(shù)條件及優(yōu)劣，但從不同放大倍數(shù)對收率影響來看，收率為35.9%~37.8%，不易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

本文采用一鍋法合成替諾福韋，利用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）和熒光法對整個反應進程進行跟蹤監(jiān)測，合成路線如圖1 所示，先在三乙胺催化作用下，化合物1 亞磷酸二乙酯和多聚甲醛縮合，得到化合物2 羥亞甲基磷酸二乙酯，然后加入對甲苯磺酰氯發(fā)生?；磻野纷鳛榭`酸劑，制得化合物3 對甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯用于后續(xù)實驗。以化合物4 腺嘌呤和化合物5（R）-碳酸丙烯酯為起始原料，經(jīng)開環(huán)縮合反應生成化合物6（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤［14-16］；以異丙醇鎂為堿，化合物6與化合物3 發(fā)生取代反應生成化合物7（R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤［17-19］；化合物7 在酸性條件下水解得到替諾福韋［20-22］，即化合物8，利用化合物的熒光發(fā)射波長不同來監(jiān)測反應方向和反應程度，希望可以找到量產(chǎn)替諾福韋的最優(yōu)化工藝條件。

圖1 替諾福韋的合成路線Fig.1 Synthesis route of tenofovir

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

1）試劑：腺嘌呤、（R）-碳酸丙烯酯、碳酸鉀、異丙醇鎂、N，N-二甲基甲酰胺、丙酮、氫氧化鈉、氯化鈉、碳酸鈉、氫溴酸、亞磷酸二乙酯、多聚甲醛、對甲苯磺酰氯、甲苯、三乙胺、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙酸、甲醇、磷酸、磷酸氫二鈉。以上試劑和藥品均為市售化學純度，使用前未經(jīng)進一步純化。甲醇、叔丁醇為色譜純，購買于阿拉丁試劑，購買于國藥試劑。

2）儀器：核磁共振儀（德國Bruker AVANCE III 400 M 型）；顯微熔點儀（瑞士Buchi B-540 型）；高效液相色譜儀（日本島津SPD-20A 型）；傅里葉紅外光譜儀（日本島津FT-IR-8400 型）；熒光光譜儀（美國PerkinElmer PELS-55 型）；紫外-可見分光光度計（日本島津Perkin-Elmer Lambda-Bio35型）；電子天平（德國賽多利斯Practum224/313-1CN 型）；臺式真空干燥箱（上海一恒儀器DZF-6032 型）；真空泵（上海力辰科技2XZ-25B 型）；防爆旋蒸儀（東京理化N-1100V-W/WD 型）。

1.2 方 法

1.2.1 對甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯（化合物3）的制備 在N2保護下，將亞磷酸二乙酯110.40 g（0.80 mol）、甲苯320 mL 依次加入1 L 的三口反應瓶中，室溫攪拌20 min 后，加入多聚甲醛29.45 g（0.98 mol），緩慢滴加三乙胺64 mL，室溫下攪拌10 min 后緩慢升溫至80 ℃攪拌2 h，然后緩慢升溫至100~110 ℃回流反應2 h，旋蒸除去溶劑，得無色透明液體羥亞甲基磷酸二乙酯127.20 g，產(chǎn)率94.6%。然后在0 ℃條件下，依次將羥亞甲基磷酸二乙酯125.80 g、甲苯300 mL 加入到1 L 三口反應瓶中，通入N2保護，攪拌20 min 后，緩慢少量多次加入對甲苯磺酰氯156.44 g（0.82 mol），繼續(xù)攪拌反應1 h，滴加三乙胺110 mL，恒溫水浴10 ℃攪拌2 h 后，升溫至20 ℃，取樣進行HPLC 中控（要求羥亞甲基磷酸二乙酯質(zhì)量分數(shù)≤2%，否則延長反應時間1 h 再次取樣中控反應），用有機濾膜抽濾，然后先用甲苯洗滌，再用碳酸鈉溶液（質(zhì)量分數(shù)5%）洗滌濾餅，合并洗液和濾液，旋蒸除去溶劑，得到對甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯200.48 g，收率82.9%。HPLC 純度：96.80%，m.p.105~110 ℃。核磁共振氫譜（nuclear magnetic resonance，1H NMR）（400 MHz，CDCl3）：δ（化學位移）7.81（d，J=7.4 Hz，2H），7.38（d，J=6.2 Hz，2H），4.15~4.19（m，6H），2.46（s，3H），1.33（t，J=8.2 Hz，6H）。IR（KBr），vmax：3 072，2 990，2 907，1 334，1 159，768，1 625，1 592，1 560，1 456，1 273，1 454，1 218，1 078 cm-1；ESI-MS（m/z）：323［M+H］+。

1.2.2 （R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤（化合物6）的制備 向2 L 三口瓶中加腺嘌呤100 g（0.74 mol），碳酸鉀10.50 g（0.074 mol），DMF 1 L，通入N2保護，室溫攪拌20 min 后再添加（R）-碳酸丙烯酯100 g（0.98 mol），添加完畢后開始升溫，待內(nèi)溫升至120 ℃，計時反應?？販?20 ℃反應直到體系溶清，取樣進行HPLC 中控（要求腺嘌呤質(zhì)量分數(shù)≤2%，否則延長反應時間2 h 再次取樣中控反應），反應合格后降溫至80 ℃以下，測定體系熒光，并開啟真空減壓蒸餾DMF，蒸出650 mL 后停止蒸餾，將剩余物料加熱升溫至120 ℃，待體系溶清后自然冷卻至室溫，再用冰鹽水繼續(xù)降溫至5 ℃以下，保溫析晶2 h 后減壓過濾，用100 mL 預冷的DMF 洗滌濾餅，合并濾液。在70 ℃下將濾餅干燥12 h，得到類白色固體。濾液在80 ℃下，真空減壓蒸餾DMF，當蒸出350 mL 后停止蒸餾，再將剩余物料加熱升溫至120 ℃，待體系溶清后自然冷卻至室溫，然后用冰鹽水繼續(xù)降溫至5 ℃以下，保溫析晶2 h 后減壓過濾，用20 mL 預冷的DMF 洗滌濾餅，在70 ℃下將濾餅干燥12 h，得到類白色固體。將兩次固體合并，共得126.40 g，收率88.4%。HPLC純度：98.20%，m.p.193~195 ℃。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：δ（化學位移）8.20（s，1H），8.03（s，1H），7.13（s，2H），5.01（d，J=6.8 Hz，1H），3.8（m，3H），1.08（d，J=6.4 Hz，3H）。IR（KBr），vmax：3 418，3 320，3 181，2 930，1 664，1 610，1 574，1 473，1 415，1 298，1 182，943，718，645 cm-1；ESI-MS（m/z）：194［M+H］+。

1.2.3 （R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤（化合物7）的制備 在N2的保護下，向1 L 的三口反應瓶中加入（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤102.10 g（0.53 mol），異丙醇鎂51.60 g（0.36 mol），DMF 500 mL，開啟攪拌，升溫至50~55 ℃，開始添加對甲苯磺酰氧基磷酸二乙酯200 g（0.62 mol），約40 min 添加完成，然后逐漸升溫至60 ℃，同時開啟真空減壓蒸餾，計時反應，反應6 h 后取樣進行HPLC 中控［要求（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤質(zhì)量分數(shù)≤2%，否則延長反應時間1 h 再次取樣中控反應］，反應完成后升溫至80 ℃左右，測定體系熒光，減壓蒸餾DMF，待減壓蒸餾至無餾分流出時，冷卻至室溫，得到黃色油狀化合物7，不需要處理直接進行下一步反應。

1.2.4 替諾福韋（化合物8）的制備 繼上一步一鍋法合成替諾福韋，向反應瓶中加入500 mL 丙酮攪拌溶解，加入氫溴酸（質(zhì)量分數(shù)48%）122 g（0.72 mol），過濾除鹽，用400 mL 丙酮洗滌濾餅，合并濾液，減壓濃縮至無餾分流出后，向濃縮物中加入氫溴酸（質(zhì)量分數(shù)48%）350 g（2.07 mol）攪拌溶解。加熱升溫至75 ℃反應20 h，取樣HPLC 中控（要求磷酸單酯質(zhì)量分數(shù)< 2%，否則延長反應時間2 h 再次取樣中控反應），反應合格后，測定體系熒光，用質(zhì)量分數(shù)40% NaOH 溶液調(diào)節(jié)pH 至3.0，降溫至0~5 ℃，漸漸有固體析出，2 h 后，抽濾，然后用100 mL 預冷的純化水洗滌，于70 ℃減壓真空干燥12 h，得類白色粉末狀固體123.21 g，再用純化水重結(jié)晶，得白色粉末狀固體103.35 g，總收率69.2%。HPLC 純度：98.31%，m.p.278~290 ℃。1H NMR（400 MHz，CDCl3）：δ（化學位移）8.25（s，1H），8.06（s，1H），7.30（s，1H），4.20（m，3H），3.85（m，3H），3.45（d，J=6.4 Hz，2H），1.19（d，J=5.8 Hz，3H）。 IR（KBr），vmax：3 390，3 106，2 964，1 697，1 410，1 236，1 104，1 075，934，750，715，480 cm-1；ESI-MS（m/z）：288［M+H］+。

2 結(jié)果與討論

2.1 對甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯（化合物3）反應條件的篩選

在三乙胺（TEA）催化作用下，由羥亞甲基磷酸二乙酯120.80 g（0.72 mol）和對甲苯磺酰氯136.61 g（0.72 mol）合成化合物3，為研究產(chǎn)物產(chǎn)率與TEA 用量、反應時間的關系，分別量取100、105、110、115 和120 mL TEA 進行反應。為促進反應的正向進行，TEA 除催化作用外，還會中和反應過程中產(chǎn)生的鹽酸。在相當反應條件下，產(chǎn)物產(chǎn)率與TEA 用量、反應時間的關系如圖2 所示。

圖2 不同因素對DESMP 產(chǎn)率的影響：（a）TEA 用量，（b）反應時間Fig.2 Effects of factors on DESMP yield：（a）TEA dosages，（b）reaction time

當TEA 用量100 mL 時，對甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯產(chǎn)率只有76.8%。當TEA 用量110 mL時，產(chǎn)物產(chǎn)率達到80.2%，隨后產(chǎn)物產(chǎn)率有所降低，且基本趨于穩(wěn)定，綜合考慮，選TEA 用量110 mL。在反應過程中，隨著溫度升高，反應速率加快，當反應溫度升高至20 °C 時，反應20 h，收率提高至82.4%，當反應進行20 h 以上時，產(chǎn)率有所降低且趨于穩(wěn)定，考慮到成本及反應時間，認為在TEA 用量110 mL，20 ℃下反應20 h 為最佳條件。

2.2 （R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤反應條件的HPLC 中控篩選

在化合物6 的合成中，反應溫度有差別，腺嘌呤參與反應時會有不同的異構(gòu)體產(chǎn)生，從而影響反應的收率和純度，如N-1、N-3、N-7、N-9 和N-10這幾種同分異構(gòu)體，其分子結(jié)構(gòu)式如圖3 所示。

圖3 幾種同分異構(gòu)體的分子結(jié)構(gòu)Fig.3 Molecular structure of several isomers

本研究通過HPLC 來檢測不同反應溫度、不同原料比例和不同溶劑比例下反應液中產(chǎn)品的純度，如圖4 所示。

圖4 不同因素對化合物6 含量的影響：（a）反應溫度，（b）原料比，（c）溶劑比Fig.4 Effects of factors on content of compound 6：（a）reaction temperatures，（b）ratios of raw materials，（c）solvent ratios

當原料腺嘌呤的質(zhì)量分數(shù)≤2%時停止反應，確定反應時間，同時得到化合物6 的含量，實驗結(jié)果如表1 所示。

表1 （R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤的最佳反應條件的篩選Tab.1 Screening of optimum reaction conditions for（R）-9-（2-hydroxypropyl）adenine

適當升高反應溫度，發(fā)現(xiàn)副反應的反應速率加快，副產(chǎn)物含量增加，產(chǎn)品含量降低，當反應溫度為120 ℃時，產(chǎn)品含量最高；隨著溶劑用量增加，副反應反應速度減緩，產(chǎn)品純度逐漸提高，當溶劑比例為10 g/g 時，產(chǎn)品含量最高；當（R）-碳酸丙烯酯用量為1.30 mol 時，產(chǎn)品含量最高。因此，本研究選取120 ℃作為最佳反應溫度，（R）-碳酸丙烯酯1.30 mol，DMF 10 g/g，碳酸鉀0.10 mol，反應22 h，化合物6 含量達到98.56%，HPLC 圖譜見圖5。通過減壓濃縮除溶劑DMF，先升溫溶解，再降溫結(jié)晶，最后過濾得到產(chǎn)物，收率88.4%。因為采用反應溶劑作為結(jié)晶溶劑，所以單一溶劑可回收再利用，節(jié)約生產(chǎn)成本，提高了產(chǎn)能。

圖5 化合物6 最佳反應條件下的HPLC 圖譜Fig.5 HPLC chromatogram of compound 6 under optimal reaction conditions

本研究采用HPLC 進行監(jiān)控反應過程，所有HPLC 分析采用C18 柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）色譜柱；流動相：以甲醇-0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 至5.0）-叔丁醇（體積比16∶21∶4）為流動相A，以甲醇-0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 至5.0）-叔丁醇（體積比29∶8∶4）為流動相B；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：260 nm；進樣量為10 μL。通過液相圖譜可知，腺嘌呤與（R）-碳酸丙烯酯反應時，整個反應體系有較多異構(gòu)體生成，主產(chǎn)物化合物6 純度98.56%（18.208 min），原料腺嘌呤余0.10%（9.875 min），N-1 異構(gòu)體純度0.46%（6.896 min），N-3 異構(gòu)體純度0.04%（7.625 min），N-7 異構(gòu)體純度0.05%（8.345 min），N-9 異構(gòu)體純度0.18%（15.417 min），N-10 異構(gòu)體純度0.28%（18.683 min）。

2.3 （R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤反應條件的HPLC 中控篩選

在化合物7 的合成中，考察了反應溫度及常壓、減壓蒸餾對反應時間和化合物7 含量的影響，如圖6 所示。

圖6 反應溫度對反應時間和化合物7 含量的影響Fig.6 Influence of reaction temperature on reaction time and compound 7 content

采用HPLC 進行監(jiān)控反應過程，結(jié)果如表2 所示。在相同反應時間條件下，隨著反應溫度升高，反應液含量降低，常壓下60 ℃，反應17 h，產(chǎn)品含量最高；通過減壓蒸餾除去副產(chǎn)物異丙醇，可明顯加快反應速度，反應時間由原來17 h 縮短至6 h，反應液含量也提高到98.29%。

表2 （R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤的最佳反應條件的篩選Tab.2 Screening of optimal reaction conditions（R）-9-［2-（diethoxyphosphoryl methoxy）propyl］adenine

從圖7 可以看出，產(chǎn)品化合物7 純度98.29%（25.655 min），33.425 min 處為過量原料3 的峰，20.276、24.358、26.952 min 等雜質(zhì)峰為原料化合物6 殘留異構(gòu)體與原料3 反應生成的副產(chǎn)物的峰。在后處理中采用丙酮做溶劑，加氫溴酸后與鎂離子生成溴化鎂在體系中析出，高效快速地除去鎂離子，且副產(chǎn)物溴化鎂可回收，溶劑丙酮可回收套用，后處理工藝利于放大生產(chǎn)，節(jié)約生產(chǎn)成本。

圖7 化合物7 最佳反應條件下的HPLC 圖譜Fig.7 HPLC chromatogram of compound 7 under optimal reaction conditions

2.4 替諾福韋反應條件的HPLC 中控篩選

在替諾福韋（化合物8）的合成過程中，測定了通過HPLC 中控反應時間對反應的影響結(jié)果，如表3 所示。

表3 替諾福韋反應條件的篩選Tab.3 Screening of tenofovir reaction conditions

化合物7 的水解過程如圖8 所示，在阿倫尼烏斯酸酸性條件下分步水解，首先得到磷酸單酯化合物9，再進一步水解得到化合物8，化合物7、8 和9 含量和反應時間的關系如圖9 所示。

圖8 化合物7 水解過程Fig.8 Hydrolysis process of compound 7

圖9 化合物7、8 和9 含量和反應時間的關系Fig.9 Relationship between content of compounds 7，8 and 9 and reaction time

本研究中當反應進行8 h 后，磷酸二乙酯已基本水解完，液相圖譜見圖10，從圖中可以看出，原料化合物7 基本水解，剩余1.65%（25.889 min），產(chǎn)品化合物8 純度50.72%（16.694 min），磷酸單酯9含量45.87%（21.342 min）。

圖10 化合物7 水解8 h HPLC 圖譜Fig.10 HPLC chromatogram of compound 7 after hydrolysis for 8 h

隨著反應的不斷進行，主產(chǎn)物替諾福韋含量逐步增加，同時副產(chǎn)物磷酸單酯含量逐步減少，當反應經(jīng)過20 h 后，磷酸單酯含量減少到1.75%，替諾福韋含量達到96.21%，液相圖譜見圖11，此時磷酸單酯含量＜2%，認為反應結(jié)束，因此水解最佳時間為20 h。

圖11 化合物7 水解20 h HPLC 圖譜Fig.11 HPLC chromatogram of compound 7 after hydrolysis for 20 h

2.5 熒光監(jiān)測反應數(shù)據(jù)

化合物6（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤、化合物7（R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤和化合物8 替諾福韋溶液的紫外-可見吸收波長和熒光發(fā)射波長數(shù)據(jù)如表4 所示。由于化合物6、7和8 分別連接不同類型的取代基，因此具有推動和拉動電子的不同感應效應，得到了不同的紫外-可見吸收波長和熒光發(fā)射波長；另外，分子結(jié)構(gòu)中不同共軛程度也對其有影響，當具有更大共軛體系時，紫外-可見吸收波長和熒光發(fā)射波長均會產(chǎn)生一定程度的紅移。從光物理測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物6、7 和8 均具有一定的熒光量子產(chǎn)率，能夠?qū)⑽盏墓饽苻D(zhuǎn)變成熒光發(fā)射。因此，可以通過紫外-可見吸收波長和熒光發(fā)射波長的差異，來監(jiān)測合成工藝中化合物6、7 和8 反應方向和反應程度。

表4 化合物6、7 和8 的紫外-可見吸收波長和熒光發(fā)射波長數(shù)據(jù)Tab.4 UV-vis absorption wavelength and fluorescence emission wavelength data of compounds 6，7 and 8

2.6 抗菌活性評價

化合物6（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤、化合物7（R）-9-［2-（二乙氧基磷酰甲氧基）丙基］腺嘌呤和化合物8 替諾福韋對金黃色葡萄球菌的抗菌效果如表5 所示。由表5 可見：化合物6、7 和8 的抗金黃色葡萄球菌（P. vulgarisCMCC49102）活性均表現(xiàn)出較高活性，隨著濃度的降低，所有化合物的抗菌活性逐漸減弱，但仍有一定程度的活性，且化合物8 的抗菌活性明顯高于化合物6 和7。

表5 化合物6、7 和8 對金黃色葡萄球菌的抗菌活性評價Tab.5 Evaluation of antibacterial activity of compounds 6，7 and 8 against Staphylococcus aureus

3 結(jié) 論

本文對替諾福韋合成工藝優(yōu)化進行了一定探討，通過HPLC 對整個反應進程進行監(jiān)控，熒光進行了監(jiān)測。先以亞磷酸二乙酯和多聚甲醛為原料，三乙胺為催化劑和縛酸劑，經(jīng)縮合、?；频脤妆交酋Ｑ跫谆⑺岫阴ビ糜诤罄m(xù)實驗。以腺嘌呤和（R）-碳酸丙烯酯為原料，在碳酸鉀作用下經(jīng)開環(huán)縮合得到（R）-9-（2-羥基丙基）腺嘌呤，在異丙醇鎂作用下，采用減壓蒸餾除副產(chǎn)物異丙醇，在丙酮體系中，加氫溴酸除鹽，氫溴酸水解反應經(jīng)一鍋法制得替諾福韋。通過紫外-可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜探討其光物理性能，發(fā)現(xiàn)可以根據(jù)化合物的熒光發(fā)射波長不同來監(jiān)測反應方向和反應程度；通過抗菌活性測試，發(fā)現(xiàn)低濃度的替諾福韋溶液對金黃色葡萄球菌也有一定的抗菌活性。通過研究得到反應最佳工藝條件為：制備對甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯中，三乙胺最佳用量110 mL，最佳反應溫度20 ℃，最佳反應時間20 h；在碳酸鉀作用下開環(huán)縮合，最佳反應溫度120 ℃，最佳反應時間22 h；將異丙醇鎂作為堿，反應最佳溫度60 ℃，減壓蒸餾條件下，最佳的反應時間為6 h；在氫溴酸作用下水解，最佳反應時間為20 h。在最優(yōu)化條件下，一鍋法合成替諾福韋總收率達到69.2%，整個研究為尋求量產(chǎn)替諾福韋的最佳化工藝條件和即時監(jiān)測和中控反應過程提供了實驗依據(jù)。