于驚蟄,邱建橋,周 嵐,方仁東,陳雪蕾

萊姆病(Lyme disease)又名伯氏疏螺旋體病,是一種由不同基因型伯氏疏螺旋體(Borreliaburgdorferisensu lato)經(jīng)蜱叮咬傳播引起的人獸共患自然疫源性疾病[1]。人、犬、貓、馬、牛、鹿等多種動(dòng)物易感[2]。萊姆病分布范圍十分廣泛,遍布全球70多個(gè)國(guó)家和地區(qū)[3]。對(duì)人類和易感動(dòng)物產(chǎn)生了極大威脅,現(xiàn)已成為全球范圍內(nèi)均具有較高關(guān)注度的一類人獸共患病[4]。

萊姆病的發(fā)生和傳播極易損害畜牧業(yè)的發(fā)展,因此國(guó)內(nèi)學(xué)者一直在關(guān)注萊姆病在動(dòng)物中的流行情況。為了解青海省牛、羊萊姆病感染狀況,馬睿麟等[5]對(duì)青海省27個(gè)縣(市、區(qū))中的畜牧場(chǎng)進(jìn)行了萊姆病抗體調(diào)查,發(fā)現(xiàn)牛、羊血清陽性率分別為12.06%、9.98%。張衛(wèi)忠等[6]采用間接熒光抗體法對(duì)采集自青海省部分草場(chǎng)的715頭牛血清和555只羊血清進(jìn)行了萊姆病抗體檢測(cè),結(jié)果顯示牛和羊的萊姆病平均感染率分別為12.45%和9.37%。葉鋒等[7]對(duì)新疆維吾爾自治區(qū)5種宿主動(dòng)物(牛、綿羊、山羊、馬和犬)共814份血清樣品中萊姆病IgG抗體進(jìn)行了檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果為牛、綿羊、山羊、犬和馬血清樣本的萊姆病IgG抗體陽性率分別為1.1%、4.4%、18.7%、60.5%和0%。畜牧動(dòng)物可以被攜帶病原體的蜱蟲叮咬而感染萊姆病,臨床癥狀常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹,跛行等,母畜感染萊姆病可導(dǎo)致其降低或停止產(chǎn)奶并出現(xiàn)繁殖障礙,影響家畜的生產(chǎn)和發(fā)育,從而對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生嚴(yán)重威脅。此外,張愛勤等[8]指出,感染后的動(dòng)物宿主也會(huì)成為病原攜帶者,當(dāng)人接觸到感染動(dòng)物的排泄物、血液、乳類或肉和內(nèi)臟時(shí),均具有感染萊姆病的風(fēng)險(xiǎn)。因此,關(guān)注萊姆病在動(dòng)物,特別是家畜以及寵物中的流行狀況并積極發(fā)展萊姆病的預(yù)防及診斷等技術(shù),對(duì)畜牧業(yè)發(fā)展以及人體健康具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

當(dāng)前,動(dòng)物患萊姆病的臨床癥狀表現(xiàn)多樣,但尚無規(guī)范的診斷、治療方法,臨床上很容易造成誤診、漏診和治療不徹底的情況。因此,為了提高公眾對(duì)動(dòng)物患萊姆病的關(guān)注并降低家畜以及寵物患萊姆病的概率,本文對(duì)動(dòng)物萊姆病診斷和防治技術(shù)的研究進(jìn)展作一綜述。

1 萊姆病概述

1.1 病原學(xué) 伯氏疏螺旋體是由單細(xì)胞疏松盤繞而成的左旋螺旋體,其4部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)分別為表層、外膜、鞭毛和原生質(zhì),細(xì)胞長(zhǎng)度約為10～40 μm,直徑約0.2～0.3 μm[9],運(yùn)動(dòng)形式多樣,有旋轉(zhuǎn)、扭曲、抖動(dòng)等[10]。

根據(jù)目前的相關(guān)研究,結(jié)合多種分型方法,伯氏疏螺旋體至少可分為23個(gè)基因型[1,12-13],且至少有以下10種對(duì)人具有致病性的基因型:B.afzelii、B.bavariensis、B.burgdorferis.s、B.garinii、B.mayonii、B.kurtenbachii、B.andersonii、B.bissettiae、B.lusitaniae、B.spielmanii[12-13]。此外,不同基因型的伯氏疏螺旋體在不同地區(qū)分布狀況存在差異。在我國(guó),至少存在6種伯氏疏螺旋體基因型,其中B.afzelii和B.garinii是我國(guó)萊姆病的主要致病性基因型,且兩種基因型在我國(guó)的空間分布同樣存在差異,B.garinii主要分布于我國(guó)北方,而B.afzelii在我國(guó)北方和南方均存在[14-15]。

1.2 流行病學(xué) 萊姆病病原體的宿主動(dòng)物較多,白足鼠和花栗鼠等小型嚙齒類動(dòng)物以及野生鹿類是其主要宿主[16]。牛、馬等多種家畜,犬、貓等伴侶動(dòng)物[17]以及包括兔、狐貍、狼、浣熊等在內(nèi)的部分野生脊椎動(dòng)物以及多種鳥類對(duì)萊姆病均有易感性,其中鳥類的易感性導(dǎo)致萊姆病可進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播[18]。由于人類的生產(chǎn)、生活方式復(fù)雜多樣,所以人類也具有感染萊姆病的風(fēng)險(xiǎn)。

萊姆病是主要的病媒傳播疾病之一,蜱,特別是硬蜱是伯氏疏螺旋體的主要傳播媒介。蜱在吸食具有帶菌動(dòng)物的血時(shí)被感染,當(dāng)帶病原體的蜱叮咬宿主時(shí),粘附在蜱蟲中腸的伯氏疏螺旋體移動(dòng)到唾液腺,并隨其唾液進(jìn)入宿主體內(nèi)[19],因此,萊姆病的流行與蜱蟲的活動(dòng)密切相關(guān)。首先,此病多發(fā)于能成為蜱棲息地的山區(qū)、林區(qū)以及牧區(qū);其次,此病隨蜱蟲的生活、繁殖周期而具有明顯的季節(jié)性,常見于氣候溫暖的季節(jié)(5-11月)。

此外,有研究表明伯氏疏螺旋體可以從感染動(dòng)物的尿液、血液和初乳中檢測(cè)到,所以萊姆病可能還存在包括接觸傳播、血液傳播等非生物媒介的傳播方式[8]。張德才等[20]從黑線姬胎鼠體內(nèi)分離到伯氏疏螺旋體,完善了伯氏疏螺旋體在鼠體內(nèi)的垂直傳播途徑,說明萊姆病可能會(huì)進(jìn)行垂直傳播。有關(guān)人類胎盤感染的相關(guān)研究顯示,伯氏疏螺旋體可導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局,例如胎兒早期死亡、流產(chǎn)或心功能不全[9]。目前,伯氏疏螺旋體引起牛、馬和鼠等動(dòng)物的胎盤感染已經(jīng)得到了證實(shí)[21]。因此,伯氏疏螺旋體還具有在人和動(dòng)物宿主中垂直傳播的能力。

1.3 臨床癥狀 萊姆病是一種全身感染性、多器官炎癥性疾病[22],其臨床表現(xiàn)多樣,在人和不同患病動(dòng)物種屬之間也有較大差異,常與心臟、皮膚、關(guān)節(jié)以及神經(jīng)系統(tǒng)等組織器官有關(guān)。根據(jù)病程的不同,可將萊姆病分為早期感染和晚期感染?；颊咴缙诟腥竞?蜱蟲叮咬后3～30 d內(nèi)),會(huì)發(fā)生局部皮膚感染,表現(xiàn)為局部游走性紅斑。數(shù)周或數(shù)月后會(huì)出現(xiàn)播散性感染,伯氏疏螺旋體會(huì)進(jìn)行血源性播散,紅斑會(huì)慢慢擴(kuò)散到全身以及表現(xiàn)出流感樣癥狀如輕微發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛、肌痛、頭痛、淋巴結(jié)病。晚期感染或持續(xù)性感染則多在疾病發(fā)生1年以后開始。

游走性紅斑是人萊姆病的典型癥狀,但游走性紅斑在患病動(dòng)物體表極為罕見,只在感染牛、馬等動(dòng)物的體表偶有局部皮膚斑疹,以及偶發(fā)局部癥狀如蹄葉炎、跛行、關(guān)節(jié)疾病,全身癥狀有發(fā)熱、疲乏、精神沉郁、厭食等[23]。此外,伯氏疏螺旋體通過全身循環(huán)進(jìn)入各器官或神經(jīng)系統(tǒng)時(shí),如心臟、腎臟、關(guān)節(jié)等處,就會(huì)在相應(yīng)的器官組織中引起病變或神經(jīng)癥狀的發(fā)生。例如,犬感染后可能表現(xiàn)出的癥狀有發(fā)熱、嗜睡、厭食、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎以及腎功能紊亂和神經(jīng)癥狀等[24]。馬屬動(dòng)物可能因患各種骨病特別是關(guān)節(jié)移位、關(guān)節(jié)炎性腫脹等引起散發(fā)性跛行,孕馬感染后可發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)弱仔或死胎[9]。

2 診斷與檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展

快速可靠的診斷對(duì)萊姆病患者的治療至關(guān)重要。臨床上萊姆病的診斷比較困難,因此就需要根據(jù)臨床綜合診斷以及先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)來進(jìn)行綜合診斷與鑒別。

2.1 萊姆病臨床綜合診斷 可依據(jù)萊姆病的流行病學(xué)特點(diǎn)和患者或患病動(dòng)物的臨床癥狀等特點(diǎn)進(jìn)行初步判斷,需明確患者或患病動(dòng)物是否在發(fā)病前有過疫區(qū)生活史,是否有蜱暴露或叮咬史[25]?；疾?dòng)物常表現(xiàn)出的非典型癥狀主要有流感樣癥狀、神經(jīng)癥狀、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕病癥狀等。

2.2 實(shí)驗(yàn)室檢查 目前,關(guān)于萊姆病檢測(cè)可應(yīng)用到的檢測(cè)技術(shù)主要有病原學(xué)診斷技術(shù)、血清學(xué)檢查技術(shù)、特異性基因檢測(cè)和生物標(biāo)志物檢測(cè)4大類型,表1為萊姆病現(xiàn)有的部分實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。

表1 萊姆病實(shí)驗(yàn)室診斷方法Tab.1 Laboratory diagnostic methods for Lyme disease

2.2.1 病原學(xué)檢測(cè) 在萊姆病的實(shí)驗(yàn)室診斷中,病原學(xué)檢測(cè)是最好的診斷依據(jù),病原學(xué)檢測(cè)包括病原的分離培養(yǎng)和特異性基因檢測(cè)。

2.2.1.1 伯氏疏螺旋體的分離培養(yǎng) 用改良的Barbour-Stoenner-Kelly培養(yǎng)基進(jìn)行直接檢測(cè)是萊姆病確診的金標(biāo)準(zhǔn)[26],是伯氏疏螺旋體感染的明確證據(jù)。但在診斷上很難做到及時(shí)準(zhǔn)確,因?yàn)椴鲜杪菪w的特性復(fù)雜,分離率低,生長(zhǎng)較緩,培養(yǎng)周期長(zhǎng)[27]。因此,通常只有在萊姆病的調(diào)查研究中才會(huì)采用病原體分離培養(yǎng)。

第1步:螺旋體培養(yǎng)。無菌收集宿主血液、腦脊液、滑液、尿液或初乳,在暗視野顯微鏡下觀察,采用BSK培養(yǎng)基和經(jīng)過改良的KP培養(yǎng)基培養(yǎng)病原。

第2步:熒光檢查。標(biāo)本經(jīng)吖啶橙染色,8～12周培養(yǎng)后,在熒光顯微鏡下觀察,觀察到螺旋體生長(zhǎng)即判斷為陽性。伯氏疏螺旋體屬革蘭氏陰性菌,姬姆薩染色呈藍(lán)色,長(zhǎng)度為10～40 μm,寬度為0.2～0.3 μm[28]。

2.2.1.2 特異性基因檢測(cè) 目前,萊姆病的特異性基因檢測(cè)并不是標(biāo)準(zhǔn)化的,僅適用于根據(jù)患者或患病動(dòng)物臨床癥狀和發(fā)病階段采集合適的病例樣本,如患病動(dòng)物的皮膚紅斑組織、滑膜液、血液或者腦脊液等樣本,繼而進(jìn)行伯氏疏螺旋體的特異性核酸片段擴(kuò)增檢查。常規(guī)PCR、巢式PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等都是目前常用的核酸檢測(cè)方法[29-30]。需要注意的是,核酸檢測(cè)陽性結(jié)果必須通過特異性分子生物學(xué)檢測(cè)方法(如探針雜交,擴(kuò)增測(cè)序)來進(jìn)行分析確認(rèn)。

2.2.2 血清學(xué)檢測(cè) 臨床上多采用萊姆病的血清學(xué)免疫診斷方法,目前國(guó)際上公認(rèn)的萊姆病確診方法是血清學(xué)的“兩步法”,也被稱為標(biāo)準(zhǔn)兩級(jí)檢測(cè)法(Standard two tiered testing,STTT)。即首先采用酶聯(lián)免疫分析(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)或免疫熒光試驗(yàn)(Immunofluorescence assay,IFA)進(jìn)行初步篩查,如果初篩結(jié)果呈陽性,則再用蛋白免疫印跡法(Western blot,WB)進(jìn)行確診[31]?！皟刹椒ā钡脑\斷特異性高,具體步驟如下:

第1步:ELISA法檢測(cè)血清或腦脊液中的特異性抗體。利用ELISA法檢測(cè)識(shí)別IgM和IgG抗體在早期感染患者或患病動(dòng)物的血清或者腦脊液中的含量,該法具有方便、快速、設(shè)備儀器要求低、成本低等特點(diǎn),可以用于診斷蜱蟲叮咬后伯氏疏螺旋體的感染情況。一般IgM抗體多在游走性紅斑發(fā)生后的14～28 d產(chǎn)生,42～56 d達(dá)到高峰,多于120～180 d內(nèi)降至正常水平,并且使用抗生素進(jìn)行治療后IgM抗體普遍更高。IgG抗體多在發(fā)病后42～56 d開始升高,晚期感染階段,也就是120～180 d時(shí)達(dá)到高峰,絕大多數(shù)患者都會(huì)產(chǎn)生高水平IgG抗體反應(yīng)并可持續(xù)數(shù)年以上[32]。目前,針對(duì)動(dòng)物血清流行病學(xué)調(diào)查,已有學(xué)者建立了萊姆病抗體檢測(cè)的間接ELISA方法[33],并用于動(dòng)物臨床血清樣本檢測(cè)。

第2步:WB法檢測(cè)血清或腦脊液中的特異性抗體。相對(duì)于上述ELISA法,它具有更好的特異性,并且不僅可以確認(rèn)初篩試驗(yàn)的結(jié)果,還可以通過免疫反應(yīng)辨別萊姆病的早期和晚期,用于經(jīng)ELISA法初篩陽性或可疑陽性患者或患病動(dòng)物的確診[34]。

2.2.3 生物標(biāo)志物檢測(cè) 多項(xiàng)研究顯示,一些與宿主免疫反應(yīng)有關(guān)的分子可作為萊姆病診斷的生物標(biāo)志物。趨化因子和細(xì)胞因子是炎癥和免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)的關(guān)鍵信號(hào)分子。其中,腦脊液中由抗原呈遞細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子CXCL13水平被認(rèn)為是神經(jīng)性萊姆病(Lyme neuroborreliosis,LNB)的潛在生物標(biāo)志物,且臨床上已有通過檢測(cè)腦脊液中CXCL13水平來進(jìn)行LNB早期診斷的病例[35]。此外,腦脊液中的CXCL13含量水平還被證實(shí),當(dāng)機(jī)體進(jìn)行抗生素治療后,其含量會(huì)迅速下降,因此也可將CXCL13的濃度水平用以反映機(jī)體進(jìn)行抗生素治療的監(jiān)測(cè)[36]。

有學(xué)者指出,在機(jī)體急性感染萊姆病時(shí),血清中CXCL9、CXCL10和C-C基序趨化因子配體19 (C-C motif chemokine ligand 19, CCL19)的濃度水平隨感染嚴(yán)重程度的升高而顯著升高,但在接受一些治療手段后其水平通常會(huì)降低[37]。由于常規(guī)血清學(xué)檢測(cè)方法存在多方面的局限性,這些趨化因子的開發(fā)將為診斷和了解萊姆病以及優(yōu)化治療方案提供更多重要依據(jù)。當(dāng)前,現(xiàn)有針對(duì)生物標(biāo)志物的研究?jī)H聚焦于人體感染萊姆病,針對(duì)動(dòng)物感染萊姆病的生物標(biāo)志物開發(fā)鮮有報(bào)道。為提高動(dòng)物,特別是畜牧動(dòng)物感染萊姆病的確診率,尋找動(dòng)物感染萊姆病后的生物標(biāo)志物亟待進(jìn)行。

除了監(jiān)測(cè)上述趨化因子的水平外,近年來,隨著相關(guān)組學(xué)研究的發(fā)展,代謝組學(xué)分析也逐漸被應(yīng)用于尋找和確定可作為特定疾病狀態(tài)的生物標(biāo)記或生物特征的分子[38]。生物系統(tǒng)的代謝活動(dòng)受到包括感染在內(nèi)的環(huán)境因素的強(qiáng)烈影響。因此,改變的代謝譜可以反映一種疾病狀態(tài),并可用于開發(fā)診斷方法[39]。采用光譜法和液相/氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)患者或患病動(dòng)物的尿液、血液或腦脊液中的相關(guān)化合物進(jìn)行鑒定,有助于萊姆病的早期診斷[40]。Molins等[41]通過采集萊姆病患者血清,使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法篩選出了44種代謝分子特征,可有效診斷出萊姆病早期患者。盡管目前基于代謝組學(xué)手段檢測(cè)萊姆病的方法尚不完善,但其高效、靈敏的優(yōu)勢(shì)使其有巨大潛力成為人或動(dòng)物患萊姆病的早期診斷方法。

3 防治技術(shù)研究進(jìn)展

3.1 疫苗 與許多細(xì)菌性疾病類似,人和動(dòng)物由于缺乏對(duì)萊姆病的持久免疫力,可能會(huì)發(fā)生重復(fù)感染。因此,如果被感染的蜱蟲叮咬,人和動(dòng)物宿主可能會(huì)多次患萊姆病。疫苗免疫是預(yù)防萊姆病最有效的方式,采用疫苗來阻斷伯氏疏螺旋體傳播的經(jīng)驗(yàn)逐年增加,并且也取得了重要進(jìn)展,由于致病性伯氏疏螺旋體的種類較多,今后研制安全有效的多價(jià)亞單位混合疫苗仍是重要的研究方向。

目前研制的疫苗主要有全菌疫苗、DNA 疫苗、亞單位疫苗、病毒載體疫苗等。但有研究顯示,動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的萊姆病疫苗的有效性會(huì)隨著外界因素的改變而改變[24],因此,當(dāng)前獸用萊姆病疫苗的開發(fā)形勢(shì)依然十分嚴(yán)峻。

3.1.1 全菌疫苗 目前,美國(guó)已經(jīng)批準(zhǔn)了幾種以全菌疫苗為主的犬用萊姆病疫苗投入市場(chǎng)[9]。但是采用直接滅活菌體的方法研制成的全菌疫苗,含有多種未知的菌體蛋白,會(huì)使動(dòng)物機(jī)體受到大量菌體蛋白的刺激,產(chǎn)生許多無法控制的副作用,同時(shí)干擾后續(xù)的診斷結(jié)果。

3.1.2 DNA疫苗 DNA疫苗系通過重組技術(shù),可在體內(nèi)可以表達(dá)的質(zhì)粒載體中插入編碼誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)的外源性抗原的細(xì)菌 DNA 成分,再將含外源性 DNA 插入片段的載體 DNA 直接接種到機(jī)體,使其在體內(nèi)表達(dá),進(jìn)而刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生具有特異性的保護(hù)抗體。早期的萊姆病疫苗會(huì)以基因工程的方式來構(gòu)建DNA疫苗,但DNA疫苗會(huì)以潛在危害身體的方式在機(jī)體內(nèi)不斷進(jìn)行復(fù)制和增殖[31]。

3.1.3 OspA疫苗 使用伯氏疏螺旋體外膜蛋白A(OspA)免疫小鼠可誘導(dǎo)其產(chǎn)生長(zhǎng)期的保護(hù)性免疫應(yīng)答[47]。當(dāng)蜱蟲叮咬免疫小鼠后,在抗OspA抗體存在的情況下,伯氏疏螺旋體在蜱蟲的中腸內(nèi)就被殺死了[48]。在20世紀(jì)90年代有學(xué)者開發(fā)了兩種基于OspA的疫苗[49-50],并通過了人[51]和犬[52]的臨床試驗(yàn),于1988年獲得了美國(guó)食品和藥物管理局(food and drug administration,FDA)批準(zhǔn)。這種疫苗雖然有效,但在接種疫苗后高抗體滴度持續(xù)時(shí)間短,且需要添加疫苗增強(qiáng)劑來維持抗體滴度。

此外,還有學(xué)者對(duì)幾種基于OspA的犬用疫苗進(jìn)行了比較,結(jié)果表明:相比于兩劑抗原接種,3劑疫苗接種程序顯著提高了抗體應(yīng)答反應(yīng)[53]。但是,在一些萊姆病患病率的調(diào)查中推翻了這一研究結(jié)果,關(guān)于OspA疫苗的有效性仍需進(jìn)一步研究。

3.1.4 OspB疫苗 伯氏疏螺旋體的外膜蛋白B(OspB)在其進(jìn)入蜱蟲腸道定植時(shí)起關(guān)鍵作用[54],一些研究表明,接種OspB疫苗可引起動(dòng)物宿主對(duì)伯氏疏螺旋體的保護(hù)性反應(yīng)[55]。并且,一種針對(duì)OspB的特異性抗體可以不依賴補(bǔ)體而直接對(duì)伯氏疏螺旋體產(chǎn)生殺滅作用[56]。該抗體能夠破壞伯氏疏螺旋體的外膜,導(dǎo)致其發(fā)生滲透性溶解,引起不依賴于補(bǔ)體的殺菌抗體反應(yīng)。加之硬蜱機(jī)體內(nèi)有幾種具有補(bǔ)體抑制特性的蛋白質(zhì)[57],即使在沒有功能性補(bǔ)體的情況下,非補(bǔ)體依賴性殺菌抗體也可殺死蜱體內(nèi)的伯氏疏螺旋體。這表明基于OspB疫苗的研發(fā)是可行的。

3.1.5 OspC疫苗 伯氏疏螺旋體外膜蛋白C(OspC)一直是萊姆病常用的候選疫苗。OspC的合成是在蜱蟲吸食過程中誘導(dǎo)產(chǎn)生的。在早期感染過程中,宿主抗體介導(dǎo)的對(duì)OspC的免疫可以阻止同源伯氏疏螺旋體向宿主傳播[58],由于OspC類型的多樣性,這種保護(hù)是菌株特異性的。然而,在世界范圍內(nèi)已經(jīng)鑒定出30多個(gè)不同的OspC類型[69]。所以,基于OspC疫苗的研究已經(jīng)從最初只包含單一多態(tài)位點(diǎn)發(fā)展到包含多個(gè)多態(tài)位點(diǎn)[60]。還有其他研究表明,OspC具有免疫優(yōu)勢(shì)和潛在保護(hù)性的表位位于高突變區(qū)[60],這種結(jié)構(gòu)具有較高的免疫原性,并且可以誘導(dǎo)、識(shí)別8種合并的OspC表位的特異性抗體以及與補(bǔ)體依賴的殺菌活性相關(guān)的抗體同型[55]。這些結(jié)果表明了根據(jù)OspC表位來開發(fā)具有廣泛保護(hù)性的多價(jià)嵌合疫苗是可行的。目前,由OspC表位嵌合蛋白(嵌合體)和OspA組成的用于預(yù)防犬萊姆病的雙抗原疫苗已經(jīng)得到了美國(guó)農(nóng)業(yè)部的批準(zhǔn)許可[59]。

3.1.6 脂質(zhì)免疫原 除伯氏疏螺旋體外膜蛋白外,作為伯氏疏螺旋體膜成分的糖脂也是有前景的候選疫苗。目前,已有學(xué)者研究了小鼠和人體內(nèi)伯氏疏螺旋體糖脂的作用,結(jié)果表明它們具有免疫反應(yīng)性[55]。但是對(duì)于伯氏疏螺旋體糖脂的抗體是否具有保護(hù)作用還不清楚,這些機(jī)制問題仍有待于更深入的研究。

3.1.7 突變活疫苗 減毒突變體活疫苗已被證實(shí)對(duì)多種傳染病均能達(dá)到有效免疫。在萊姆病感染方面,伯氏疏螺旋體的弱毒無鞭毛突變體和p66突變體可引起小鼠部分或完全保護(hù)性免疫[61],這些活突變體比失活的螺旋體更有效。但這種活突變體不能在哺乳動(dòng)物宿主體內(nèi)建立感染,所以這種方法不太可能用于哺乳動(dòng)物上。不過,它可以用于識(shí)別一些具有保護(hù)效力的個(gè)體靶點(diǎn),用于開發(fā)新的重組候選疫苗。此外,這些突變體還可以用于開發(fā)其他宿主的靶向疫苗或其他動(dòng)物疫苗。

3.1.8 阻斷傳播疫苗 人們已經(jīng)探索了減少蜱數(shù)量、減少蜱體內(nèi)伯氏疏螺旋體含量和切斷傳播途徑的生態(tài)學(xué)方法。阻斷傳播疫苗包括針對(duì)宿主的疫苗和針對(duì)蜱的疫苗,開發(fā)阻斷傳播疫苗有希望降低萊姆病感染率。隨著人們對(duì)潛在萊姆病風(fēng)險(xiǎn)或暴露的生態(tài)流行病學(xué)理解的深入,將有效的阻斷傳播策略作為控制萊姆病感染率的公共衛(wèi)生工具變得更為可行。目前,阻斷萊姆病傳播的研究主要是借助蜱蟲蛋白誘導(dǎo)蜱蟲免疫。

“蜱蟲免疫”是指蜱蟲在遭受幾次感染后無法成功進(jìn)食的現(xiàn)象,Trager W于1939年首次描述了這一現(xiàn)象[62]。有學(xué)者利用伯氏疏螺旋體的傳播媒介(肩胛硬蜱)和其宿主(豚鼠)的模型證明[63],針對(duì)蜱吸食后24 h內(nèi)表達(dá)的唾液蛋白免疫足以引起宿主的獲得性蜱免疫,阻止蜱攝食,阻斷伯氏疏螺旋體的傳播。此外,還有研究發(fā)現(xiàn),人和動(dòng)物在反復(fù)被蜱叮咬后會(huì)出現(xiàn)即刻和遲發(fā)性皮膚超敏反應(yīng),使其感染伯氏疏螺旋體的可能性降低[64]。

這些觀察結(jié)果進(jìn)一步指出,蜱蟲蛋白可作為疫苗用于阻斷萊姆病的傳播。借助蜱蟲蛋白免疫,在蜱蟲叮咬部位和/或蜱蟲內(nèi)部誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,阻止蜱蟲叮咬也是一種設(shè)計(jì)萊姆病疫苗的新方法。

萊姆病的傳染方式是非傳染性媒介傳播感染。公共衛(wèi)生的目標(biāo)是保護(hù)人群免受高度傳染性疾病的影響,接種萊姆病疫苗是個(gè)人的自主選擇,對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)的人和動(dòng)物來說是可取的。決定是否接種疫苗應(yīng)基于科學(xué)依據(jù),例如暴露在萊姆病流行地區(qū)的人和動(dòng)物應(yīng)廣泛接種疫苗以防止萊姆病傳播,反之則不需要接種。

3.2 治 療

3.2.1 蜱叮咬后的處理 由于包括伯氏疏螺旋體在內(nèi)的大量病原體是經(jīng)蜱蟲口器傳播,所以當(dāng)動(dòng)物宿主被蜱叮咬后,需將附著在皮膚上的蜱連同其口器一并去除,并且應(yīng)在當(dāng)?shù)孬F醫(yī)的指導(dǎo)下使用抗生素進(jìn)行預(yù)防。

3.2.2 藥物 動(dòng)物萊姆病目前還沒有進(jìn)行藥物臨床試驗(yàn)。針對(duì)患萊姆病的動(dòng)物,用藥標(biāo)準(zhǔn)主要是參照人類臨床藥物試驗(yàn)結(jié)果以及患萊姆病動(dòng)物的藥物治療經(jīng)驗(yàn)而得出?？股仡愃幬锎蠖嗄馨l(fā)揮有效作用,使用抗生素對(duì)處于急性期的患病動(dòng)物進(jìn)行早期治療,對(duì)晚期并發(fā)癥的預(yù)防起到一定作用,并可迅速有效地改善動(dòng)物臨床癥狀。不過要注意的是,針對(duì)動(dòng)物使用抗生素要注意其年齡、既往病史、用藥史、生產(chǎn)周期等,例如對(duì)懷孕牛、乳牛不能用四環(huán)素,可改用頭孢菌素。

3.2.3 支持治療 抗生素的使用不能逆轉(zhuǎn)動(dòng)物機(jī)體的實(shí)質(zhì)性損傷,只能抑制或殺滅血液和組織中的伯氏疏螺旋體。對(duì)于患有發(fā)熱、皮膚損傷處疼痛癥狀的患病動(dòng)物可以采用解熱鎮(zhèn)痛劑進(jìn)行支持治療。

3.3 綜合性防控措施 優(yōu)化環(huán)境衛(wèi)生管理和加強(qiáng)專業(yè)知識(shí)普及是降低萊姆病感染率的重要措施之一。林場(chǎng)、牧場(chǎng)等工作、養(yǎng)殖場(chǎng)所應(yīng)加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生管理措施,加強(qiáng)滅蜱工作,避免蜱蟲感染;林區(qū)工人、農(nóng)民及放牧人員應(yīng)提高防護(hù)意識(shí),做好動(dòng)物體外驅(qū)蟲工作,預(yù)防家畜經(jīng)蜱蟲叮咬感染萊姆病;完善動(dòng)物養(yǎng)殖生活場(chǎng)所的生物安全措施,定期進(jìn)行清掃和消毒,對(duì)于已經(jīng)感染的動(dòng)物應(yīng)立即隔離并進(jìn)行抗生素治療等相應(yīng)措施,以防傳染病進(jìn)一步擴(kuò)散。

4 展 望

萊姆病是重要的蜱媒傳染病之一,其發(fā)病率和疫源地在全球范圍內(nèi)呈增長(zhǎng)和擴(kuò)大態(tài)勢(shì),我國(guó)對(duì)萊姆病的防控仍處于初級(jí)階段,直到2019年才發(fā)布了第一個(gè)職業(yè)性萊姆病的診斷標(biāo)準(zhǔn),然而對(duì)于動(dòng)物萊姆病,有關(guān)部門尚未發(fā)布統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)與防治措施。隨著人們生活水平的日益改善,寵物犬貓的飼養(yǎng)逐漸普及,牧區(qū)養(yǎng)殖也逐漸規(guī)模化。由于動(dòng)物主人對(duì)萊姆病的專業(yè)知識(shí)了解程度較低,有關(guān)部門對(duì)萊姆病的防治措施宣傳較少,導(dǎo)致該病的感染率和發(fā)病率日益增加。并且,隨著我國(guó)城市綠化、旅游業(yè)以及野外露營(yíng)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展,人們親近自然、接觸自然的意愿不斷增強(qiáng),普通居民感染萊姆病的潛在風(fēng)險(xiǎn)也在不斷增大?？紤]到萊姆病可能對(duì)人及動(dòng)物造成的不良影響,必須通過多學(xué)科多部門的通力合作來加強(qiáng)此病的宣傳與教育。對(duì)于畜牧業(yè)相關(guān)從業(yè)人員必須提高動(dòng)物萊姆病的防治與診斷能力,促進(jìn)家畜產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

利益沖突：無