陽(yáng)成琳 陳利 馮喬芳 冉志玲

摘要：目的 通過(guò)免疫因子及蛋白表達(dá)水平變化探討三寶護(hù)童羹制劑（SBHTG）對(duì)卵蛋白（OVA）致SD幼鼠過(guò)敏性鼻炎（AR）肺脾氣虛型模型的治療作用及機(jī)制研究。方法 將 32 只2-3周齡SPF級(jí) SD 大鼠分為A組：空白組，B組：模型組，C組：西藥組，D組：中藥組，每組各8只。適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后，除A組給予生理鹽水模擬造模外，其余各組給予全身致敏+局部致敏法共計(jì)21d，自第15d起開(kāi)始給藥物干預(yù)，14d后處理。通過(guò)HE染色法評(píng)價(jià)鼻黏膜的病理形態(tài)學(xué)，以ELISA檢測(cè)鼻炎相關(guān)細(xì)胞因子水平變化，取脾臟運(yùn)用Western blot法檢測(cè)炎癥相關(guān)蛋白水平變化。結(jié)果 與A組比較，B組幼鼠鼻部癥狀評(píng)分、血清IL-4及IgE含量顯著升高（P<0.01），三寶護(hù)童羹制劑及氯雷他定干預(yù)后顯著回調(diào)；血清中INF-γ含量及脾臟中Foxp3蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），三寶護(hù)童羹制劑及氯雷他定干預(yù)后顯著上升。C、D組幼鼠鼻部癥狀評(píng)分、血清Ig E及IL-4水平下降明顯（P<0.01）；C、D組幼鼠血清INF-γ含量顯著降低（P<0.01）；C、D組脾臟組織中Foxp3蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01）；C、D組鼻黏膜上皮纖毛較模型組整齊連續(xù)，上皮水腫情況、杯狀細(xì)胞及EOS浸潤(rùn)較B組減輕。結(jié)論 推斷三寶護(hù)童羹可有效調(diào)控變應(yīng)性鼻炎模型幼鼠免疫功能，這可能與上調(diào)INF-γ水平及Foxp3蛋白表達(dá)水平，下調(diào)IL-4、IgE水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞：變應(yīng)性鼻炎；三寶護(hù)童羹；Foxp3蛋白；γ干擾素；白細(xì)胞介素 4；免疫球蛋白E

中圖分類(lèi)號(hào)：R765.21

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2024）01-0085-08

Effect of Sanbao Hutong Decoction on Cellular Immune Mechanism

of Allergic Rhinitis In Young Rat Model

YANG Cheng-lin，CHEN Li，F(xiàn)ENG Qiao-fang，RAN Zhi-ling

（1. Southwest Medical University，Luzhou 646000，Sichuan，China; 2. Changning Hospital of Traditional Chinese Medicine，

Changning 644300，China;3. The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine，Southwest Medical University，Luzhou 646000，China）

【Abstract】Objective： To study the therapeutic effect and mechanism of Sanbao Hutong Decoction （SBHTG） on allergic rhinitis （AR） model of qi deficiency of lung and spleen in SD young mice induced by OVA through the changes of immune factors and protein expression levels. Methods： 32 SPF SD rats aged 2-3 weeks were divided into blank group A，model group B，western medicine group C and Chinese medicine group D，8 rats each group. After 5 days of adaptive feeding，except for group A，the other groups were given systemic sensitization+local sensitization method for 21 days，drug intervention began on the 15th day，and the treatment was given 14 days later. The pathological morphology of nasal mucosa was evaluated by HE staining，the changes of rhinitis related cytokines were detected by ELISA，and the changes of inflammatory related proteins were detected by Western blot. Results： Compared with those of group A，the nasal symptom score，serum IL-4 and IgE contents were significantly increased in group B （P<0.01），and significantly decreased after intervention with Sanbao Hutong Decoction and loratadine. INF-γ content in serum and Foxp3 protein expression in spleen were significantly decreased （P<0.01），and were significantly increased after intervention with Sanbao Hutong Decoction and loratadine. Nasal symptom scores，serum IgE and IL-4 levels of the rats in groups C and D were significantly decreased （P<0.01）. Serum INF-γ content in groups C and D was significantly decreased （P<0.01）. The expression of Foxp3 protein in spleen tissues of groups C and D was significantly increased （P<0.01）. The nasal mucosal cilia in groups C and D were more orderly and continuous than those in the model group，and the epithelial edema，goblet cells and EOS infiltration were less severe than those in group B. Conclusion： It is concluded that Sanbao Hutong Decoction can effectively regulate the immune function of young mice with allergic rhinitis model，which may be related to up-regulating INF-γ level and Foxp3 protein expression level，and down-regulating IL-4 and IgE level.

【Key words】Allergic Rhinitis; Sanbao Hutong Decoction; Foxp3 Protein; γ Interferon; Interleukin 4; Immunoglobulin E

兒童變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）以鼻癢、流涕、噴嚏為主要癥狀，常在接觸變應(yīng)原后發(fā)作，具有高發(fā)病率及高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)。兒童AR是由免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）介導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放化學(xué)介質(zhì)誘發(fā)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)炎性疾病。隨著分子免疫學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)已證實(shí)AR發(fā)病機(jī)制與Th1/Th2免疫失衡及Treg細(xì)胞分化下調(diào)密切相關(guān)。目前世界范圍內(nèi)AR患者已超過(guò)5億，我國(guó)華中地區(qū)兒童患病率最高（17.20%），華東地區(qū)患病率最低為（13.94%）。目前臨床治療兒童AR多用鼻內(nèi)激素及組胺藥物，雖起效快速但無(wú)法降低復(fù)發(fā)概率。相關(guān)文獻(xiàn)表明兒童AR降低了患兒的生活質(zhì)量，亦可誘發(fā)一系列變態(tài)反應(yīng)性疾病，因此盡快探尋長(zhǎng)效、經(jīng)濟(jì)、溫和的兒童AR的治療方法至關(guān)重要。

有研究表明，較于西藥來(lái)說(shuō)，中藥治療兒童AR毒副作用更小、遠(yuǎn)期療效穩(wěn)定。臨床小兒鼻鼽以脾肺兩虛證最為常見(jiàn)，導(dǎo)師在參苓白術(shù)散基礎(chǔ)上進(jìn)行加減化裁，得出治療小兒鼻鼽臨床療效顯著、具備良好的社會(huì)效益的三寶護(hù)童羹（SBHTG），其具有培土生金、肺脾同治之效。因此致力于開(kāi)展關(guān)于調(diào)控Th1/Th2細(xì)胞失衡及上調(diào)Treg細(xì)胞分化的免疫學(xué)研究，從中醫(yī)藥入手，積極尋找治療兒童AR的藥物關(guān)鍵靶點(diǎn)，為三寶護(hù)童羹有效治療兒童AR提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD雌性大鼠的2～3周幼鼠（50 g±5）g，32只，購(gòu)于西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物許可編號(hào)：SYXK（川）2018-065；飼養(yǎng)于西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物房，飼養(yǎng)環(huán)境：溫度20℃～26℃，濕度40%～70%，飼養(yǎng)期間正常進(jìn)食、飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

1.2.1 中藥 三寶護(hù)童羹（山藥10 g，黃精10 g，茯苓10 g，白扁豆10 g，薏苡仁10 g，陳皮6 g，蓮子6 g，大棗6 g）免煎顆粒劑型購(gòu)于西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院中藥房。將三寶護(hù)童羹制備為生藥量濃度10.12 g/mL。

1.2.2 西藥 氯雷他定片，購(gòu)自西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院第一西藥房，5mg/袋，海南普利制藥股份有限公司（批號(hào)：H20110018）。使用蒸餾水溶解后稀釋為濃度 0.1mg/mL。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 見(jiàn)表1。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 見(jiàn)表2。

1.5 方法

1.5.1 幼鼠AR造模 采用“全身致敏+局部致敏法”建立變應(yīng)性鼻炎模型后將卵白蛋白（OAV）30 mg、AL（OH）3 3 g和100 mL 0.9%生理鹽水混合后注釋計(jì)量為0.01 mL·g，腹腔注射初次免疫，第15 d雙側(cè)鼻孔給予 4%OVA 200μg（50 μL）滴鼻加強(qiáng)免疫。

1.5.2 肺脾氣虛造模 肺氣虛模型：參考《實(shí)用中醫(yī)證候動(dòng)物模型學(xué)》，購(gòu)置80cm×40cm×40cm PVC材料收納盒，一雙孔艾灸盒，每次點(diǎn)燃2根香煙固定在艾灸盒內(nèi)，將艾灸盒放置于收納盒中，進(jìn)行煙熏，每次煙熏30 min，每次8只，共14 d。脾氣虛模型：參考《實(shí)用中醫(yī)證候動(dòng)物模型學(xué)》，給予大黃苦寒泄下法建立，西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室熬制濃度15%大黃液，以0.1 mL/10 g進(jìn)行灌胃，每天1次，共7 d。

1.5.3 分組及給藥 選取32只雌性幼鼠隨機(jī)成4組，每組8只，分別為A組：空白組，B組：模型組，C組：西藥組，D組：中藥組。C組予地氯雷他定干混懸劑0.525 g·kg，D組予三寶護(hù)童羹制劑7.14 g·kg。A組與B組同期給予等量生理鹽水。

1.5.4 檢測(cè)步驟

1.5.4.1 行為學(xué)觀察 AR造模評(píng)價(jià)：鼻部癥狀激發(fā)后觀察10min，采用疊加量化積分法見(jiàn)表3，總分≥5分則為造模成功。

1.5.4.2 肺脾氣虛造模評(píng)價(jià) 觀察幼鼠出現(xiàn)便溏、脫肛、飲食減少、體重增加較空白組減慢、倦臥、萎靡等脾氣虛及行動(dòng)遲緩、蜷伏不動(dòng)等氣虛癥狀則視為成功。

1.5.4.3 標(biāo)本采集及處理 在末次灌胃給藥24 h后取材。將大鼠麻醉成功后采集腹主動(dòng)脈血液約5 mL，靜置2 h，3500 r/min離心15 min后-80℃冰箱保存。剝離大鼠脾臟，裝入凍存管中置于-80℃冰箱保存。

取大鼠鼻黏膜，4%多聚甲醛固定，脫水石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅染色后觀察。

1.5.4.4 鼻組織形態(tài)學(xué)測(cè)定 取大鼠鼻黏膜進(jìn)行HE染色，顯微鏡下觀察鼻黏膜組織病理學(xué)改變。

1.5.4.5 細(xì)胞免疫因子測(cè)定 參照 ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)，按步驟檢測(cè)大鼠血清IL-4、INF-γ、IgE水平。

1.6 Western blot法檢測(cè)大鼠脾臟Foxp3蛋白表達(dá)水平 取大鼠脾臟組織，提取總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜后脫脂奶粉封閉1h，加入一抗Foxp3（1∶1000），4℃孵育過(guò)夜，二抗室溫孵育1h，TBST洗膜，二抗室溫孵育1h，TBST洗膜，加入ECL發(fā)光顯色液，放入暗室，置入凝膠成像系統(tǒng)（bio-rad）成像拍照，用凝膠成像系統(tǒng)分析蛋白及內(nèi)參β-actin表達(dá)條帶的灰度值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS27.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，樣本量<50，故選擇夏皮洛-威爾克（Shapiro-wilk，S-W）進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布以（x±s）表示，若方差齊則2組數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析；若方差不齊，采用t＇檢驗(yàn)；不服從正態(tài)分布者，采用非參數(shù)Kruskal-wallis檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠鼻部癥狀評(píng)分結(jié)果 A組、B組、C組、D組鼻部癥狀評(píng)分分別為（0.4±0.5）分、（6.9±0.6）分、（3.0±0.8）分、（3.1±0.8）分，B組、C組、D組評(píng)分差異顯著（P<0.001），C組及D組之間評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可以說(shuō)明D組及C組均可明顯減輕鼻部癥狀，見(jiàn)表 4、圖 1。C組及D組與B組之間評(píng)分差異顯著（P<0.001），C組及D組之間評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可以說(shuō)明D組及C組均可明顯減輕鼻部癥狀。

2.2 HE染色形態(tài)學(xué)觀察 變應(yīng)性鼻炎的炎癥損傷主要表現(xiàn)為鼻黏膜局部的組織重塑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型組鼻黏膜上皮結(jié)構(gòu)紊亂且不完整，纖毛粗細(xì)不一，出現(xiàn)上皮細(xì)胞固縮、壞死甚至脫落現(xiàn)象，可見(jiàn)明顯腺體增生、腫脹、出血及嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，顯示出鼻黏膜組織重塑特征；空白組大鼠鼻黏膜組織結(jié)構(gòu)完整、平滑且排列整齊，腺體大小正常，未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮壞死脫落及明顯血管擴(kuò)張或充血現(xiàn)象；與模型組相比，中藥、西藥組纖毛脫落現(xiàn)象減少，仍有少許腺體增生，血管稍擴(kuò)張，組織水腫較模型組明顯好轉(zhuǎn)，而上皮細(xì)胞排列較整齊，其組織重塑現(xiàn)象減輕，見(jiàn)圖 2。

2.3 干預(yù)后各組IL-4、INF-Y、IgE水平比較 C組與D組IgE水平較B組水平顯著降低（P<0.05）；D組較C組IgE水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說(shuō)明地氯雷他定可有效降低IgE水平；地氯雷他定較三寶護(hù)童羹降低IgE水平效果明顯。見(jiàn)圖 3。與A組相比，B組血清中INF-γ含量顯著降低（P<0.05），IL-4含量顯著升高（P<0.05）；與B組相比，C、D組血清中INF-γ含量顯著升高（P<0.05），D組與C組IFN-γ水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與B組相比，C、D組血清中IL-4含量降低（P<0.05），且D組變化顯著于C組（P<0.05），兩者差異顯著（P<0.001）；說(shuō)明地氯雷他定及三寶護(hù)童羹均可有效降低IL-4水平、提高IFN-γ水平，三寶護(hù)童羹降低IL-4水平明顯于地氯雷他定，地氯雷他定提高IFN-γ水平明顯于三寶護(hù)童羹。見(jiàn)表5、圖4、圖5。

2.5 各組大鼠幼鼠脾臟中Foxp3蛋白表達(dá)水平比較

結(jié)果由圖6、表6所示，F(xiàn)oxp3蛋白表達(dá)水平H=25.636，P<0.001，說(shuō)明四組數(shù)據(jù)之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以中位數(shù)（P25，P75）做表。B組Foxp3蛋白表達(dá)水平較空白組明顯下降（P<0.001），C組及D組Foxp3蛋白表達(dá)水平均模型組上升（P<0.01），C組與D組之間Foxp3蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01）。

3 討論

文獻(xiàn)研究表明AR已經(jīng)成為兒童主要的呼吸道炎性疾病，且常伴發(fā)或繼發(fā)多種并發(fā)癥或疾病。近年來(lái)研究表明，中醫(yī)在治療AR方面具有長(zhǎng)效、安全、毒副作用小、價(jià)格低廉等西醫(yī)治療無(wú)法兼顧的優(yōu)勢(shì)。我們的前期研究已證實(shí)，三寶護(hù)童羹制劑對(duì)于機(jī)體的減少呼吸系統(tǒng)疾病發(fā)生、腸道免疫及細(xì)胞免疫功能都具有正向調(diào)節(jié)作用。多種炎癥及免疫細(xì)胞因子參與了在AR的發(fā)病過(guò)程，當(dāng)前Th1/Th2免疫失衡及Treg分化是AR發(fā)病的研究熱點(diǎn)。因此本研究繼承了前期研究的基礎(chǔ)，運(yùn)用三寶護(hù)童羹治療AR幼鼠（肺脾氣虛型）并觀察治療前后Th1/Th2免疫失衡的下游細(xì)胞因子INF-γ、IL-4及Treg細(xì)胞的上游轉(zhuǎn)錄因子Foxp3蛋白水平的變化情況，進(jìn)一步明確了三寶護(hù)童羹治療兒童AR與糾正Th1/Th2免疫失衡及上調(diào)Treg細(xì)胞分化有關(guān)，為三寶護(hù)童羹治療兒童 AR 提供免疫學(xué)相關(guān)依據(jù)。

兒童變應(yīng)性鼻炎在中醫(yī)屬于“鼻鼽”范疇，是內(nèi)外因共同作用的結(jié)果，外因責(zé)之于外感邪氣，內(nèi)因責(zé)于小兒肺、脾、腎不足的生理特點(diǎn)密切相關(guān)。導(dǎo)師冉志玲教授依據(jù)“百病皆由脾胃生”的觀點(diǎn)提出本病由肺脾腎三臟所致，其中以脾虛為核心。小兒臟腑嬌弱、脾本不足，加之生長(zhǎng)發(fā)育旺盛、脾胃負(fù)擔(dān)繁重，每當(dāng)飲食、用藥稍有不慎，脾胃受損，百病遂生；小兒肺本不足，脾肺為母子之臟，脾氣不足導(dǎo)致肺氣更虛、抗邪能力進(jìn)一步減弱；腎為先天之本，決定先天稟賦，稟賦不足則體質(zhì)虛弱不耐邪侵。凡表虛不能衛(wèi)外者，當(dāng)先建立中氣，以脾旺蔭護(hù)五臟，表自固而邪不干。導(dǎo)師冉志玲教授總結(jié)多年臨證經(jīng)驗(yàn)：小兒鼻鼽由肺脾氣虛為主，故治療上以培土生金，健脾益肺為主，使脾胃健而邪自去，同時(shí)正氣存內(nèi)，可減少?gòu)?fù)發(fā)；以“健脾益氣，補(bǔ)肺益腎”為法自擬藥膳方三寶護(hù)童羹治療過(guò)敏性鼻炎患兒，并在臨床上取得滿(mǎn)意療效，且因其藥食同源，味道甘美，簡(jiǎn)便價(jià)廉，為廣大患兒及家屬?gòu)V泛接受。

三寶護(hù)童羹組成為山藥10 g，黃精10 g，茯苓10 g，白扁豆10 g，薏苡仁10 g，陳皮6 g，蓮子6 g，大棗6 g。據(jù)研究顯示，山藥的主要成分為山藥多糖，山藥蛋白及皂苷類(lèi)：其中山藥多糖可有效減少炎癥因子分泌，阻斷炎癥信號(hào)通路以抗炎；還能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖及分化從而強(qiáng)化T淋巴細(xì)胞的增殖，提高優(yōu)勢(shì)細(xì)胞因子分泌水平，最終能使機(jī)體免疫力增強(qiáng)。黃精中多糖及皂苷是起作用的主要成分，其中黃精多糖可正向調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的免疫球蛋白分泌能力。茯苓中有效成分：茯苓多糖能增加血清中免疫球蛋白水平，從而增強(qiáng)免疫；茯苓多糖和茯苓三萜亦可通過(guò)抑制傷處肉芽腫的形成而起到抗炎作用。薏苡仁多糖能促進(jìn)NK細(xì)胞活性及增殖功能，增強(qiáng)免疫、降低血管通透性及炎癥因子分泌水平起到抗炎作用。有研究指出了陳皮“走竄”之性，故其能起到運(yùn)脾之效，其主要成分為陳皮苷，其中陳皮揮發(fā)油可解痙平喘，抗組胺。蓮子多酚具有抗氧化、抑制沙門(mén)氏菌及大腸桿菌的作用。體外實(shí)驗(yàn)表明大棗多糖能抑制促炎因子的釋放、增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫。

IgE即是免疫球蛋白E，是免疫球蛋白類(lèi)型中的一種主要，其介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生，與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲(chóng)感染及皮膚過(guò)敏等有關(guān)。IgE在AR發(fā)病機(jī)制：變應(yīng)原進(jìn)入機(jī)體后，被抗原呈遞細(xì)胞吞并激活B淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致變應(yīng)原特異性IgE的產(chǎn)生，IgE附著于肥大細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表面，當(dāng)再次接觸變應(yīng)原后，IgE與受體結(jié)合交聯(lián)，激活肥大細(xì)胞、EOS釋放組胺和白三烯等炎癥遞質(zhì)，進(jìn)而刺激鼻黏膜引發(fā)鼻癢、噴嚏、流涕等癥狀。本文實(shí)驗(yàn)表明，與模型組比較，西藥、中藥組血清中IgE含量顯著降低，且中藥組比西藥組IgE含量降低變化顯著，表明三寶護(hù)童羹能夠通過(guò)減少變應(yīng)原特異性IgE的產(chǎn)生，抑制了IgE介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，從而有效阻止AR發(fā)生。

IL-4主要是由CD4T或活化的肥大細(xì)胞產(chǎn)生，其能促進(jìn)T、B細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)黏附分子表達(dá)。IL-4能增強(qiáng)B細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的抗原遞呈作用，抑制嗜酸粒細(xì)胞凋亡，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答，特別是促進(jìn)IgE介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。研究表明，IL-4為Ig E的正性調(diào)節(jié)因子，IL-4的過(guò)度分泌，可導(dǎo)致AR患者血清中IgE合成過(guò)多。有實(shí)驗(yàn)證明IL-4、Ig E均參與AR的免疫發(fā)病機(jī)制，所以降低IL-4含量，可減少I(mǎi)gE合成，成為了防治AR的重要途徑之一。INF-γ又稱(chēng)免疫干擾素或Ⅱ型干擾素，是抗原或有絲分裂原等刺激T細(xì)胞而產(chǎn)生的具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒及抗腫瘤活性的糖蛋白，它能廣泛地使各種類(lèi)型的細(xì)胞表達(dá)，放大免疫應(yīng)答的識(shí)別階段，促進(jìn)T和B淋巴細(xì)胞分化，促進(jìn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞成熟并刺激B細(xì)胞分泌抗體，激活中性粒細(xì)胞，除此之外它還是單核吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活因子及IgE的拮抗因子。它可以阻止IL-4過(guò)度分泌而介入的IgE的生成，從而壓制機(jī)體內(nèi)IgE的產(chǎn)生，減少AR發(fā)生概率或緩解AR癥狀。INF-γ和IL-4分別是Th1和Th2細(xì)胞分泌的標(biāo)志因子，在正常機(jī)體中，INF-γ主要由Th1細(xì)胞產(chǎn)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫；IL-4主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，調(diào)節(jié)體液免疫。Th2型細(xì)胞的一個(gè)重要作用機(jī)制是生成IgE和形成以IgE為基礎(chǔ)的嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil，EOS）與肥大細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，如：變應(yīng)性鼻炎，Th2細(xì)胞因子在AR的免疫病因?qū)W中起著重要的作用。Th1/Th2細(xì)胞因子分泌失調(diào)也是多種免疫炎癥疾病的發(fā)病基礎(chǔ)，如反復(fù)上呼吸道感染。前期孫漣瑋研究表明研究表明三寶護(hù)童羹可有效的提高反復(fù)呼吸道感染患兒的免疫力，降低呼吸道感染的發(fā)生率；呂茂林研究表明三寶護(hù)童羹可捅過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群及免疫功能防治反復(fù)呼吸道感染。同樣劉慧霞研究表明患兒免疫力的提升與變應(yīng)性鼻炎治療呈正相關(guān)。本文實(shí)驗(yàn)表明，與模型組比較，西藥、中藥組血清中INF-γ含量顯著升高，IL-4及IgE含量顯著降低，且中藥組比西藥組IL-4含量降低變化顯著，這說(shuō)明三寶護(hù)童羹能夠逆轉(zhuǎn)變應(yīng)性鼻炎幼鼠血清中Th2細(xì)胞因子相對(duì)Th1細(xì)胞因子的免疫反應(yīng)優(yōu)勢(shì)，使二者趨于正常。表明三寶護(hù)童羹能夠通過(guò)抑制Th2細(xì)胞因子，上調(diào)Th1細(xì)胞因子表達(dá)，從而糾正Th1/Th2免疫失衡，有效的增加抗炎細(xì)胞因子分泌、抑制炎性介質(zhì)，抑制了過(guò)度免疫反應(yīng)，最終一定程度上阻斷AR發(fā)病途徑、減輕AR發(fā)病癥狀、降低AR發(fā)病概率。

Foxp3是Treg細(xì)胞的特征性轉(zhuǎn)錄因子，是Treg細(xì)胞發(fā)育和功能維持的關(guān)鍵性調(diào)節(jié)基因，對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育和健康的生理功能有著決定性的作用。而Treg細(xì)胞作為T(mén)細(xì)胞亞群的一種承擔(dān)了維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)和限制過(guò)度免疫反應(yīng)的重任，F(xiàn)oxp3的過(guò)表達(dá)最終可促進(jìn)機(jī)體免疫耐受。就AR來(lái)說(shuō)Foxp3是Treg上游的特異性轉(zhuǎn)錄因子，可促進(jìn)Treg分化和成熟，發(fā)揮炎癥和免疫負(fù)向調(diào)控作用，維持免疫穩(wěn)態(tài)。有研究證實(shí)Foxp3的數(shù)量減少和功能減弱都可以刺激AR的發(fā)病。近期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，采用蛆提取物干預(yù) AR模型小鼠后，F(xiàn)oxp3的表達(dá)增加，發(fā)現(xiàn)Treg分化也隨之增加，結(jié)果提示小鼠AR相關(guān)癥狀明顯緩解，并由此推斷Foxp3表達(dá)增加促進(jìn)Treg分化，從而抑制AR過(guò)度的炎癥反應(yīng)。Zhu X等有關(guān)哮喘的研究提示存在Treg和Foxp3 mRNA表達(dá)在哮喘機(jī)體中比例降低的現(xiàn)象，因此該團(tuán)隊(duì)提出哮喘的發(fā)病概率和嚴(yán)重程度與Foxp3、Treg成負(fù)相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)Foxp3蛋白表達(dá)下調(diào)竟樣出現(xiàn)在AR發(fā)病過(guò)程中，因此從發(fā)病機(jī)制角度來(lái)說(shuō)，AR與支氣管哮喘相似度極高。由此推斷，AR炎癥反應(yīng)的加劇，可能與Foxp3表達(dá)下調(diào)而導(dǎo)致Treg的分化減少呈正相關(guān)。本文經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，西藥、中藥組脾臟組織中Foxp3蛋白表達(dá)顯著升高，且西藥組與中藥組無(wú)差別，這說(shuō)明三寶護(hù)童羹和氯雷他定均可有效上調(diào)AR幼鼠脾臟中Foxp3蛋白表達(dá)。因此，綜合文獻(xiàn)報(bào)道和我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們合理推測(cè)AR幼鼠在經(jīng)三寶護(hù)童羹治療后上調(diào)Foxp3蛋白表達(dá)，使得Treg細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)，最終下調(diào)Th2細(xì)胞因子從而抑制了AR的發(fā)生；變應(yīng)性鼻炎幼鼠經(jīng)三寶護(hù)童羹治療后Foxp3蛋白表達(dá)顯著上升，提示三寶護(hù)童羹對(duì)Treg細(xì)胞具有直接或者間接的調(diào)節(jié)作用，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，三寶護(hù)童羹可有效減輕變應(yīng)性鼻炎幼鼠癥狀，其機(jī)制可能與調(diào)控Th1/Th2細(xì)胞免疫失衡和上調(diào)Treg細(xì)胞表達(dá)有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

［1］孫漣瑋，冉志玲，杜淵，等.三寶護(hù)嬰羹治療兒童反復(fù)呼吸道感染緩解期（肺脾氣虛證）臨床觀察［J］.家庭醫(yī)藥，2019（3）：15-16.

［2］WU WW，CHIA TS，LU J，et al.IL-2Rα-biased agonist enhances antitumor immunity by invigorating tumor-infiltrating CD25+CD8+T cells［J］.Nature cancer，2023.

［3］胡情，蘇嘉琪，樓金成，等.針刺對(duì)穴“迎香-合谷”對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠Th1、Th2細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA-3［J］.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2023（15 vo 29）：1135-1143.

［4］羅向前，劉大波.兒童過(guò)敏性鼻炎的流行病學(xué)［J］.中國(guó)實(shí)用兒科雜志，2019，34（3）：197-199.

［5］ZHANG X，ZHANG M，SUI H，et al.Prevalence and risk factors of allergic rhinitis among Chinese adults：A nationwide representative cross-sectional study［J］.The World Allergy Organization journal，2023（3 vo 16）：12-14.

［6］鄭曉駿，陳旭青，蔣中秋，等.中西醫(yī)結(jié)合中西醫(yī)結(jié)合治療過(guò)敏性鼻炎的臨床研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2022，10（28）：1983-1987.

［7］陳茜，楊一民.中醫(yī)藥治療兒童變應(yīng)性鼻炎臨床研究綜述［J］.中醫(yī)兒科雜志，2023，19（4）：96-100.

［8］姚百會(huì)，冉志玲，杜淵.冉志玲教授食療經(jīng)驗(yàn)方三寶護(hù)嬰羹方藥分析之我見(jiàn)［J］.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2021，21（49）：279-280，282.

［9］孔德弟，王俊，向明亮，等.利拉魯肽對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠模型的治療作用［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，39（5）：487-493.

［10］胡思潔，魏萍，寇巍，等.變應(yīng)性鼻炎患病率及危險(xiǎn)因素Meta分析［J］.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2018，31（19）：1485-1491

［11］王沖，俞蘭，劉曉玲，等.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與氣道變應(yīng)性炎癥關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志，2023，29（2）：121-126.

［12］王馨，李林，李小薇，等.過(guò)敏性鼻炎的中醫(yī)治療綜述［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2019，47（2）：122-125.

［13］楊雁，孫羽靈，孫建梅，等.山藥活性成分藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)野生植物資源，2022，41（12）：55-60.

［14］李若男，鄧金蘭，陳小立，等.黃精化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第十五屆全國(guó)營(yíng)養(yǎng)科學(xué)大會(huì)論文匯編，2022：1.

［15］馬偉，鄭通，鄭懿，等.基于“肺脾同治”理論探索肺脾氣虛型過(guò)敏性鼻炎患者用藥規(guī)律及作用機(jī)制［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2023，47（8）：956-968.

［16］李曉凱，顧坤，梁慕文，等.薏苡仁化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中草藥，2020，51（21）：5645-5657.

［17］羅春花，莫斯銳，黃杰連，等.陳皮的藥理作用及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2023，19（9）：229-234.

［18］龍文靜，余武.蓮子多酚藥理作用研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代園藝，2021，44（2）：10-11.

［19］汪晶.基于文獻(xiàn)挖掘的大棗現(xiàn)代研究分析［J］.中國(guó)合理用藥探索，2021，18（9）：20-23.

［20］蔡青，汪瑩.屋塵螨變應(yīng)原制劑治療兒童變應(yīng)性鼻炎的效果及對(duì)總IgE和Th17水平的影響［J］.臨床合理用藥，2023，16（22）：27-30.

［21］魏肖云，汪受傳.消風(fēng)宣竅湯對(duì)變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型IgE、IL-4、IFN-γ、組胺的調(diào)控作用［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，38（7）：881-884.

［22］RYU SH，SHIN HS，EUM HH，et al.Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor Produces a Splenic Subset of Monocyte-Derived Dendritic Cells That Efficiently Polarize T Helper Type 2 Cells in Response to Blood-Borne Antigen［J］.Frontiers in Immunology，2022.

［23］沈琳，劉俊.T淋巴細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平在小兒支氣管哮喘中的變化和臨床意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與健康研究電子雜志，2021，5（24）：107-110.

［24］吳革平，章如新，溫武，等.地塞米松對(duì)實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物血清IgE、IL-4和IL-17含量影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志，2006（2）：69-72+138.

［25］江占良，唱文娟.過(guò)敏性鼻炎患者血清IL-4與IgE水平及其關(guān)系的研究［J］.山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000（2）：14-15.

［26］李彥華，張新日，亞生江，等.歐博鼻炎沖劑對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠血清總IgE、Th2細(xì)胞因子活性的影響［J］.陜西中醫(yī)，2012，33（3）：369-370.

［27］TLAKAFUM O，YUKARI A，TAKAKO，et al.The Role of Distinct T Cell Subsets in Periodontitis—Studies from Humans and Rodent Models［J］.Current Oral Health Reports，2014，1（2）：70.

［28］ZHOU M，QU RY，YIN XW，QIU Y，et al.Prednisone acetate modulates Th1/Th2 and Th17/Treg cell homeostasis in experimental autoimmune uveitis via orchestrating the Notch signaling pathway［J］.International Immunopharmacology，2023.

［29］楊屈揚(yáng)，乾恩樂(lè)，劉麗洋.微生態(tài)環(huán)境與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病的關(guān)系及發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2022，32（10）：134-136.

［30］RADULOVIC S，JACOBSON M R，DURHAM S R，et al.Grass pollen immunotherapy induces Foxp3-expressing CD4+CD25+cells in the nasal mucosa［J］.Journal of Allergy and Clinical Immunology，2008，121（6）：1467-1472.

［31］呂茂林.三寶護(hù)童羹調(diào)節(jié)腸道菌群及免疫功能防治反復(fù)呼吸道感染的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究［D］.瀘州：西南醫(yī)科大學(xué)，2022.

［32］劉慧霞，田甜，吳躍，等.玉屏風(fēng)散治療呼吸道變應(yīng)性疾病研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)眼耳鼻喉雜志，2020，10（4）：222-225.

［33］WEST EE，MERLE NS，KAMI＇NSKI MM，et al.Loss of CD4T cell-intrinsic arginase 1 accelerates Th1 response kinetics and reduces lung pathology during influenza infection［J］.Immunity，2023.

［34］HORI S，NOMURA T，SAKAGUCHI S.Pillars Article：Control of Regulatory T Cell Development by the Transcription Factor Foxp3.Science 2003.299：1057-1061［J］.Journal of immunology，2017，198（3）：5-8.

［35］ZHU XH，CHEN Q，LIU ZQ，et al.Low expression and hypermethylation of FOXP3 in regulatory T cells are associated with asthma in children［J］.Experimental and therapeutic medicine，2020，19（3）：20-23.

［36］BACCHETTA R，BARZAGHI F，RONCAROLO M-G.From IPEX syndrome to FOXP3 mutation：a lesson on immune dysregulation［J］.Annals of the New York Academy of Sciences，2018，1417（1）：5-22.

［37］LIU L，DENG YQ，JIAO WE，et al.Maggot extracts promote regulatory T cell differentiation by upregulating Foxp3 in allergic rhinitis［J］.American journal of translational research，2021，13（12）：19-21.

［38］劉冰，李曉瑜，萬(wàn)禮霞.FOXP3基因在人類(lèi)變應(yīng)性鼻炎中的表達(dá)［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（22）：4065-4067.

［39］SAKAGUCHI S，SAKAGUCHI N，ASANO M，et al.Pillars article：immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor α-chains（CD25）.Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases.J.Immunol.1995［J］.Journal of immunology（Baltimore，Md.：1950），2011，186（7）：4-7.

（收稿日期：2023-08-21）