趙曉斌，秦亞娟，厲廷有

南京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 211166

次氯酸（hypochlorous acid，HClO）是一種活性氧（reactive oxygen species，ROS），憑借其對多種蛋白質(zhì)側(cè)鏈和肽的特異性反應(yīng)，在溶酶體吞噬過程中破壞生物系統(tǒng)中的病原體。因此HClO 是免疫系統(tǒng)對抗入侵細(xì)菌和多種病原體的有效抗菌劑［1］。在健康情況下，HClO在維持生物體氧化平衡的生理活動和免疫保護(hù)中起著重要的作用。但是由于HClO 具有很強的氧化性，異常水平的HClO 會對機體造成嚴(yán)重的損害，從而導(dǎo)致許多疾病，如心血管疾?。?-3］、神經(jīng)炎癥［4］、肝損傷［5］、帕金森?。?］、癲癇［7］、阿爾茨海默?。?-9］，甚至癌癥［10］等。因此，開發(fā)生物系統(tǒng)中HClO 高靈敏度和選擇性檢測工具，對闡明HClO 在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用具有重要意義。

在生物體中，內(nèi)源性HClO 主要通過過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2）與Cl-的反應(yīng)產(chǎn)生，該反應(yīng)由髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）催化。近年來，人們開發(fā)了多種檢測HClO的方法，如電化學(xué)分析、化學(xué)發(fā)光分析、比色法、高效液相色譜法等［11］。雖然這些分析方法具有很高的靈敏度，對HClO 也有一定的選擇性，但這些檢測需要復(fù)雜的設(shè)備和專業(yè)的操作技術(shù)。此外，這些測試的樣品制備復(fù)雜，檢測費用昂貴，生物樣本經(jīng)常在樣品前處理中遭到破壞，不適合檢測活細(xì)胞、組織和體內(nèi)的HClO。近幾十年來熒光成像技術(shù)受到廣泛關(guān)注。雖然熒光成像設(shè)備價格昂貴，但熒光成像具有靈敏度高、選擇性高、時空分辨率高、無創(chuàng)、實時分析、操作簡單等優(yōu)點［12-13］。熒光成像在觀察活細(xì)胞的功能和分子識別方面具有獨特的優(yōu)勢，已成為在亞細(xì)胞水平監(jiān)測生物分子、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位和運動的不可替代的技術(shù)。隨著熒光分析技術(shù)的發(fā)展，用于檢測HClO的熒光探針的種類和數(shù)量不斷增多。探針分子中常含有對HClO 具有選擇性反應(yīng)的基團(tuán)或原子，如碳氮雙鍵［14］、碳碳雙鍵［15］、硫原子［16-17］、苯環(huán)［7］等。

不同的熒光探針有不同的激發(fā)和發(fā)射模式，如單光子/雙光子、開關(guān)/比率等。與單光子熒光探針相比，雙光子熒光探針波長較長，具有更深的組織穿透力，減少活細(xì)胞和組織中的背景熒光，同時產(chǎn)生更少的光損傷和更小的背景干擾［18］。同時，與短波長光相比，長波長光的光損傷和光漂白更小，對細(xì)胞的毒性也更?。?9］。

雙光子熒光探針利用雙光子顯微鏡（two-photon microscopy，TPM）進(jìn)行高分辨率成像。這種長波長激發(fā)（約800 nm）并利用TPM 成像是提高生物成像應(yīng)用中檢測靈敏度的一種重要方法，可以減少自吸收和背景熒光。在成像技術(shù)方面，雙光子超分辨率熒光顯微鏡技術(shù)成功克服了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡無法獲得200 nm以下空間分辨率的局限［20］。此外，超分辨率熒光顯微鏡可用于實時觀察亞細(xì)胞器與HClO反應(yīng)前后的變化［17，21］，方便科學(xué)家進(jìn)一步了解HClO在生物和病理過程中的作用。目前科學(xué)家們已經(jīng)開發(fā)出一些基于TPM 技術(shù)的雙光子（two-photon，TP）HClO探針。

本文總結(jié)了近年來用于檢測HClO 的小分子熒光探針的設(shè)計策略、識別機制、響應(yīng)類型（比例、靶向）、傳感機制和在生物成像中的應(yīng)用，助益更優(yōu)HClO探針的發(fā)現(xiàn)。

1 基于硫探頭的雙光子熒光探針

據(jù)報道，甲硫氨酸中的硫原子容易被HClO 氧化為亞砜和砜［16］。以此開發(fā)了很多含硫原子的HClO探針。

在水溶液中，咪唑啉-2-硫酮可與HClO 反應(yīng)產(chǎn)生咪唑衍生物，并伴有熒光開關(guān)。韓國科學(xué)家Juyoung Yoon團(tuán)隊設(shè)計并構(gòu)建了咪唑啉-2-硫酮類雙光子熒光探針PIS（圖1），用于檢測HClO 分子［16］。PIS探針可特異性地與HClO反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的咪唑熒光離子。2016 年，該課題組在PIS 設(shè)計思路上改造并合成了PNIS（圖1）雙光子HClO 熒光探針［17］。該PNIS分子中含線粒體靶向基團(tuán)——三苯基磷，咪唑啉-2-硫酮是HClO 的識別單元，使得PNIS具有檢測內(nèi)源性線粒體HClO的能力。值得指出的是PNIS具有良好的水溶性，不需要有機溶劑進(jìn)行助溶。該類型的PIS、PNIS 探針在與HClO 反應(yīng)后，熒光強度約提高100 倍，而對于其他ROS，如H2O2、NO·、ROO·、ONOO-、·OH 和叔丁基超氧化物，幾乎沒有熒光變化，即使在更高濃度的其他ROS 孵育30 min后，也不會引起探針溶液明顯的熒光變化。該類探針在HeLa 細(xì)胞和RAW 264.7 巨噬細(xì)胞中具有良好的選擇性成像。此外，利用TPM，PIS探針在小鼠海馬區(qū)有良好的成像效果，PNIS探針在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)線粒體共定位實驗中有良好的成像效果。PIS、PNIS的反應(yīng)機制如圖1所示。

圖1 PIS/PNIS化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 1 Chemical structure and reaction mechanism of PIS/PNIS

硫醚的富電子特性使硫原子能夠快速與HClO發(fā)生反應(yīng)，顯著改變硫原子的電子云密度，從而導(dǎo)致探針熒光強度發(fā)生明顯變化（圖2）。吩噻嗪中的硫原子對HClO 具有很強的反應(yīng)性。吩噻嗪的熒光性質(zhì)通過硫原子氧化成亞砜而改變。苯并噻唑是一種常見的吸電子基團(tuán)，王建勇團(tuán)隊則利用吩噻嗪和苯并噻唑構(gòu)建了一種新型的雙光子探針NS-ClO［22］。苯并噻唑在氧化還原條件下穩(wěn)定，保證了探針在過量的HClO 中的穩(wěn)定性。室溫條件下，NS-ClO 在PBS（pH=7.4，5%二甲基甲酰胺）中，360 nm激發(fā)時，450 nm 處沒有熒光發(fā)射；但當(dāng)加入HClO 后，其在360 nm 處出現(xiàn)吸收，且用360 nm 激發(fā)時在450 nm處出現(xiàn)強烈熒光（約860 倍）。經(jīng)實驗驗證，NS-ClO對其他ROS、活性氮（reactive nitrogen species，RNS）、生物硫醇等沒有反應(yīng)活性，說明探針對HClO表現(xiàn)出良好的選擇性。NS-ClO 在HeLa 細(xì)胞和RAW264.7巨噬細(xì)胞中具有良好的選擇性成像。利用TPM，NS-ClO 可對400 μm 厚的小鼠肝臟活體組織切片成像，且可以對活體斑馬魚成像。

圖2 NS-ClO化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 2 Chemical structure and reaction mechanism of NS-ClO

在溫和條件下，HClO可以介導(dǎo)硫代螺內(nèi)酰胺苯酚轉(zhuǎn)化為苯并噁唑（圖3）。毛國江團(tuán)隊利用羅丹明類似物為基礎(chǔ)，研制了一種用于HClO生物成像的長波長（630 nm）雙光子熒光探針HN2-TP［1］。HN2-TP在PBS緩沖液（pH=7.4，5%二甲基亞砜）中，沒有特征吸收和發(fā)射。但當(dāng)加入HClO 后，90 s 內(nèi)HClO 誘導(dǎo)重排反應(yīng)，檢測到在630 nm處的熒光發(fā)射。HN2-TP探針在體外檢測HClO 時表現(xiàn)出較大的熒光增強，且具有良好的線性范圍、高靈敏度（檢測下限：40 nmol/L）和快速響應(yīng)的優(yōu)點。HN2-TP探針溶液與各種ROS、RNS、生物硫醇不發(fā)生反應(yīng)，探針只對HClO 有高選擇性。利用單光子顯微鏡，HN2-TP 可以對HeLa 細(xì)胞內(nèi)的外源性HClO 成像，也可以對巨噬細(xì)胞RAW 264.7內(nèi)源性HClO成像。利用TPM，HN2-TP可以對大鼠肝臟冷凍切片組織進(jìn)行HClO顯像。

圖3 HN2-TP化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 3 Chemical structure and reaction mechanism of HN2-TP

2 氧硫雜環(huán)戊縮醛（酮）類雙光子熒光探針

HClO 雙光子探針中，熒光團(tuán)大多數(shù)是典型的“推-拉”（胺酮）結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)可以產(chǎn)生優(yōu)異的光物理性質(zhì)。Acdan是一種雙光子熒光團(tuán)（圖4）。利用2-巰基乙醇對Acdan 的酮羰基進(jìn)行保護(hù)，使其變?yōu)檠趿螂s環(huán)戊縮酮結(jié)構(gòu)，降低羰基“拉”的作用，而導(dǎo)致熒光強度降低或淬滅。作為HClO 分子的反應(yīng)位點，探針分子中的S 原子先被HClO 氧化為亞砜，再進(jìn)一步氧化為砜，最后使縮酮結(jié)構(gòu)水解成羰基，使熒光團(tuán)恢復(fù)熒光或者熒光增強（圖4）。

圖4 Acdan化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 4 Chemical structure and reaction mechanism of Acdan

溶酶體是細(xì)胞的循環(huán)中心，催化分解各種廢物，如蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物、脂質(zhì)和細(xì)胞碎片，其內(nèi)含有豐富的HClO。2015 年，Young-Tae Chang團(tuán)隊利用Acdan 分子骨架，設(shè)計并合成了第一個靶向溶酶體的HClO 雙光子熒光探針LYSO-TP（圖5）［23］。LYSO-TP 是一種反應(yīng)時間極短（幾秒內(nèi)），選擇性良好，靈敏度高（16.6 nmol/L）的雙光子探針，并通過雙光子成像成功地應(yīng)用于炎癥小鼠模型的溶酶體HClO 成像。除此之外，將靶向基團(tuán)換成三苯基磷開發(fā)了具有線粒體靶向性質(zhì)的探針MITO-TP（圖5）。兩種探針在對HeLa 外源性HClO和巨噬細(xì)胞內(nèi)源性HClO 存在的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（溶酶體和線粒體）都有較好的靶向性，能成功識別兩種細(xì)胞器中的HClO。

圖5 氧硫雜環(huán)戊縮醛（酮）類雙光子熒光探針化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure 5 Chemical structure of two-photon fluorescence probes of oxychlorothyroxal

喹諾酮也是一種優(yōu)良的雙光子熒光團(tuán)［7，24-25］。2018 年劉志洪和李春涯團(tuán)隊利用喹諾酮類設(shè)計了第一個用于監(jiān)測小鼠傷口愈合過程中HClO 生成的雙光子熒光探針QClO（圖5）［24］。該探針的設(shè)計基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移（intramolecular charge transfer，ICT）原理，是一種雙光子比例熒光探針。QClO 探針自身在492 nm 處顯示出一個發(fā)射峰，在與HClO反應(yīng)后，QClO 的氧硫雜環(huán)戊基團(tuán)脫保護(hù)，形成典型的“推-拉”結(jié)構(gòu)6-（二甲氨基）喹啉-2-甲醛。“推-拉”結(jié)構(gòu)有利于雙光子吸收的產(chǎn)生，并且可以增強“ICT效應(yīng)”，而顯示出紅移熒光發(fā)射，導(dǎo)致492 nm處熒光減弱，562 nm 處熒光發(fā)射增強。因此，該探針為高靈敏度的HClO 檢測提供了比率信號，且該探針在生理pH 范圍內(nèi)對HClO 表現(xiàn)出高靈敏、高選擇性的響應(yīng)。雙光子激發(fā)的性質(zhì)也使探針在檢測活細(xì)胞內(nèi)源性和外源性HClO 方面具有良好的性能，并能夠通過TPM監(jiān)測小鼠損傷組織中HClO的細(xì)微變化，熒光穿透深度達(dá)180 μm。該雙光子比率探針在1 min 內(nèi)響應(yīng)HClO 的存在，492 nm 處藍(lán)色發(fā)射下降，562 nm處綠色發(fā)射增加，這為HClO 提供了比率檢測方式。該探針可在體外實現(xiàn)HClO的比例檢測，線性范圍為0.8～12.0 mmol/L，檢測下限為89 nmol/L。此外，該探針還可以在雙光子顯微鏡下分別觀察活細(xì)胞中外源性和內(nèi)源性HClO 水平的波動，由于優(yōu)異的傳感性能和雙光子激發(fā)特性，該探針成功揭示了受傷組織區(qū)域中HClO的過量產(chǎn)生。

He 等［26］通過引入四氫喹喔啉基團(tuán)作為電子供體來增強ICT效應(yīng)，設(shè)計了一種具有大斯托克斯位移的雙光子比例熒光探針TQC-HClO（圖5）。該探針具有長波長比率發(fā)射（I650/I583）。與QClO 類似，探針TQC-HClO 在PBS 緩沖液（pH=7.4，30% CH3CN）中，以485 nm 為激發(fā)波長，在583 nm 處有熒光發(fā)射。但當(dāng)加入HClO 后，檢測到在649 nm 處的熒光發(fā)射。作者研究了探針TQC-HClO在720～880 nm不同輸出波長下的雙光子吸收截面，發(fā)現(xiàn)探針TQC-HClO在800～840 nm的激發(fā)光譜區(qū)域具有超過100 GM的雙光子吸收截面，表明探針具有良好的雙光子性質(zhì)，并成功應(yīng)用在HeLa 細(xì)胞和斑馬魚HClO成像中。

同樣基于ICT 機制，吳養(yǎng)潔團(tuán)隊利用乙酰香豆素這一重要的雙光子熒光團(tuán)，對乙?；M(jìn)行修飾開發(fā)了探針CMOS（圖6）［27］。雙光子熒光探針CMOS合成簡單，對HClO表現(xiàn)出高靈敏度、快速響應(yīng)的特點，是一種“開-關(guān)-開”探針。CMOS 對其他不同的ROS、RNS 和活性硫無反應(yīng)活性，僅對HClO 有活性，說明CMOS 對HClO 具有高度的選擇性。HClO可以使CMOS 原有熒光淬滅，其淬滅原理是硫原子被HClO 氧化為亞砜，而引起原有熒光的淬滅。細(xì)胞實驗證實，用5 μmol/L CMOS 孵育SKVO-3 細(xì)胞30 min，在425～525 nm 光學(xué)窗口中觀察到SKVO-3細(xì)胞強烈的熒光，這就證明探針可以透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。再將該細(xì)胞用100 μmol/L NaClO 孵育3 min 則發(fā)現(xiàn)細(xì)胞熒光猝滅。用PBS 洗滌3 次后，再分別加入5 μmol/L Cys/Hcy 孵育1 h，然后熒光明顯恢復(fù)。這就說明CMOS 被HClO 氧化成亞砜后，又被Cys/Hcy 還原成了CMOS。其反應(yīng)機制如圖6。

圖6 CMOS化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 6 Chemical structure and reaction mechanism of CMOS

3 基于C＝C和C＝N裂解機制的雙光子熒光探針

HClO具有很強的氧化和親核能力，可以氧化裂解共軛的C＝C 雙鍵和C＝N 雙鍵釋放出醛基，從而導(dǎo)致探針分子熒光信號的顯著變化（圖7）。探針分子的羰基可以和丙二腈通過Knoevenagel 反應(yīng)生成C＝C 雙鍵［15］，C＝N 雙鍵可以通過羰基和肼類化合物反應(yīng)生成［14］。

圖7 基于C＝C和C＝N的設(shè)計策略Figure 7 Design strategy based on C＝C and C＝N

基于6-羥基-2-萘醛熒光團(tuán)，尤進(jìn)茂團(tuán)隊開發(fā)了一種可以靶向線粒體的雙光子熒光探針DNB（圖8）［15］。該探針中的C＝C鍵在與HClO反應(yīng)后斷裂，導(dǎo)致共軛結(jié)構(gòu)被破壞，釋放出醛基，而產(chǎn)生高強度熒光。釋放出的醛基會進(jìn)一步與反應(yīng)產(chǎn)生新的化學(xué)結(jié)構(gòu)，而產(chǎn)生藍(lán)移光學(xué)現(xiàn)象。因此，作者將探針DNB 作為靶向線粒體檢查細(xì)胞內(nèi)源性HClO/SO2的一種雙光子比率探針。同時，還將此探針成功運用到斑馬魚SO2與HClO 之間的氧化還原循環(huán)監(jiān)測中。在對DNB 探針反應(yīng)機制探究中，作者發(fā)現(xiàn)SO2不僅可以與醛基發(fā)生反應(yīng)生成，還可以與吸電子丙二腈部分發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生（圖8）也可與HClO發(fā)生反應(yīng)，釋放醛基，醛基可進(jìn)一步與反應(yīng)產(chǎn)生令作者意外的是，無論先檢測HClO 還是SO2，每個檢測過程都有自己獨特的光譜變化，完全滿足了細(xì)胞內(nèi)和體內(nèi)協(xié)同檢測SO2/HClO的要求，是一種良好的雙光子比率探針。該探針具有雙光子作用截面大、細(xì)胞毒性低、選擇性好、靈敏度高的特點，可協(xié)同檢測細(xì)胞內(nèi)和體內(nèi)的SO2/HClO。此外，DNB 探針可用于實時成像HeLa 和RAW 264.7細(xì)胞線粒體SO2/HClO 的連續(xù)變化。該探針還可以通過雙光子顯微鏡估計斑馬魚體內(nèi)200 μm 深度處的SO2/HClO。

圖8 DNB化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 8 Chemical structure and reaction mechanism of DNB

6-（二甲氨基）喹啉-2-醛具有雙光子發(fā)射、良好的光穩(wěn)定性和典型的“推-拉”電子體系，是一種良好的雙光子熒光團(tuán)。付強團(tuán)隊利用噻吩肼修飾喹啉中的醛基，得到Q-HOCl（圖9）［14］。該探針與HClO反應(yīng)后，噻吩酰肼基團(tuán)被脫保護(hù)，生成具有典型雙光子熒光信號的喹啉醛。Q-HOCl 探針對HClO 具有良好的選擇性和快速的響應(yīng)（20 s），檢測下限達(dá)12.5 nmol/L。作者利用該探針通過雙光子成像觀察了內(nèi)毒素引起的PC12 細(xì)胞內(nèi)HClO 值的波動。此外，Q-HOCl 探針可以通過血腦屏障（blood brain barrier，BBB），可以分析大腦中HClO 的水平。作者利用該探針監(jiān)測到阿爾茲海默病模型小鼠大腦中HClO 水平比正常小鼠高。同時作者基于腦片雙光子成像和Morris 水迷宮實驗，給予MPO抑制劑治療，發(fā)現(xiàn)可有效改善阿爾茲海默病模型小鼠的認(rèn)知能力。

圖9 Q-HOCl化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 9 Chemical structure and reaction mechanism of Q-HOCl

類似地，王建勇團(tuán)體基于香豆素雙光子熒光團(tuán)構(gòu)建了新型雙光子探針CuO-ClO（圖10）［28］，HClO可識別分子中的C＝N 雙鍵，該探針雙光子性質(zhì)良好、選擇性好、穩(wěn)定性好、響應(yīng)速度快（約30 s）、細(xì)胞毒性低。同時，利用CuO-ClO成功地對HeLa細(xì)胞中外源性HClO 和RAW 264.7 細(xì)胞中內(nèi)源性HClO 進(jìn)行了成像。此外，利用雙光子顯微鏡，CuO-ClO 在800 nm 激發(fā)條件下，可以對55 μm 深的小鼠組織進(jìn)行HClO 檢測，并且可用于斑馬魚的HClO 熒光成像。

圖10 CuO-ClO和CoPh-ClO化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure 10 Chemical structures of CuO-ClO and CoPh-ClO

該團(tuán)隊對CuO-ClO 進(jìn)行繼續(xù)改造，制備了另外一種C＝N 雙鍵型特異性檢測HClO 的雙光子熒光探針CoPh-ClO（圖10）［11］。相比于CuO-ClO 雙光子探針，CoPh-ClO 探針具有靈敏度更高、選擇性良好和穩(wěn)定性更好（10 min以上）、響應(yīng)更快（20 s）、開啟信號更大（45倍）、細(xì)胞毒性低和良好的雙光子性能的優(yōu)點。其主要原因是該探針在熒光團(tuán)和響應(yīng)點之間引入苯環(huán)，使CoPh-ClO 更加靈敏、可修飾和穩(wěn)定，這將為其他多功能探針的開發(fā)提供新的思路。CoPh-ClO 成功地應(yīng)用于HeLa 活細(xì)胞外源性HClO和活RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)源性HClO 的監(jiān)測。此外，利用雙光子顯微鏡該探針CoPh-ClO 成功地實現(xiàn)了對穿透深度約為65 μm 的組織和斑馬魚中HClO 的成像。

4 基于苯環(huán)氯取代機制的探針

受到喹諾酮類的神經(jīng)保護(hù)藥物［29-30］和顯像劑［24-25］的啟發(fā)，錢勇團(tuán)隊基于ICT 原理利用喹諾酮構(gòu)建了HCP雙光子熒光探針（圖11）［7］。在HCP中，共軛電子受體二氨基馬來腈基團(tuán)削弱了喹諾酮類熒光團(tuán)的“推-拉”電子效應(yīng)，使其僅產(chǎn)生微弱的黃色熒光。當(dāng)在HClO 存在下，HCP 結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)通過氯化反應(yīng)生成HCP-Cl，改變分子間的電子效應(yīng)，實現(xiàn)藍(lán)移，熒光發(fā)射增強。HCP-Cl 在800 nm 激發(fā)態(tài)條件下?lián)碛凶畲箅p光子吸收截面（13.4 GM）。HCP雙光子性質(zhì)良好、選擇性好、穩(wěn)定性好、響應(yīng)速度快（約5 s）、細(xì)胞毒性低。HCP可以實時跟蹤活細(xì)胞中的HClO。HCP可以透過血腦屏障，對癲癇模型小鼠活體腦中MPO 產(chǎn)生的HClO 進(jìn)行高靈敏檢測成像，且不受其他物質(zhì)干擾。該團(tuán)隊通過使用HCP，構(gòu)建了一種高通量篩選方法，可以快速篩選潛在的抗癲癇藥物來控制MPO介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。

圖11 HCP化學(xué)結(jié)構(gòu)及其反應(yīng)機制Figure 11 Chemical structure and reaction mechanism of HCP

5 結(jié)論和展望

綜上所述，本文介紹了近年來用于HClO 成像的雙光子熒光探針，重點介紹了它們的響應(yīng)機制及應(yīng)用。根據(jù)C＝N 裂解響應(yīng)機制構(gòu)建的HClO 探針在疾病模型中具有更深遠(yuǎn)的意義，部分探針可以對活體疾病模型小鼠成像。相比之下，由C=C裂解機制、酮和硫化物構(gòu)建的探針在組織成像和疾病模型中的應(yīng)用較差，僅停留在組織或者斑馬魚體內(nèi)HClO成像。大多數(shù)探針在幾秒鐘內(nèi)對HClO 作出反應(yīng)，檢測下限達(dá)到nmol/L 級。由于HClO 在復(fù)雜的生物環(huán)境中含量低、壽命短，一些HClO探針的選擇性需要進(jìn)一步提高。因此迫切需要設(shè)計更高靈敏度和更好選擇性的探針。