張國新,張志新,張曉曉,帕提古麗,玉努斯·阿不都,馬春江*

(1. 哈密市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,新疆 哈密 839000;2.伊州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,新疆 哈密 839000)

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)感染引起豬、牛和其它偶蹄動(dòng)物共患的急性、熱性、接觸性和高度傳染性疾病[1]。口蹄疫具有極強(qiáng)的傳染性,未接種疫苗的豬群發(fā)病率為100%。且不同物種、不同年齡段的死亡率不同,羔羊?yàn)?%～94%,犢牛為80%,哺乳仔豬為100%,大多數(shù)成年動(dòng)物為1%～5%[2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為須報(bào)告動(dòng)物傳染病,我國也將其列為一類動(dòng)物傳染病[1,3-4]。該病發(fā)病率高且受出口貿(mào)易限制,嚴(yán)重危害我國及世界畜牧業(yè)的發(fā)展,僅非洲由于該病導(dǎo)致的直接損失和疫苗接種損失就高達(dá)23.2×108美元[5-6]。

口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科,口蹄疫病毒屬,是一種單股正鏈RNA病毒[7]。目前已知口蹄疫病毒有7個(gè)血清型(O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1)和多個(gè)亞型[4,8],各血清型具有不同的免疫學(xué)、抗原性和遺傳特性,且不同血清型間無交叉保護(hù)作用[9-10],導(dǎo)致口蹄疫的防控更加困難?？谔阋逴型為全世界危害最大、流行最廣及影響最大的一個(gè)血清型,也是我國豬口蹄疫的主要流行血清型[11],廣泛分布于非洲、亞洲、中東地區(qū)和南美洲的許多國家,嚴(yán)重影響動(dòng)物及其產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易[8]。因此,口蹄疫的有效防控不僅對(duì)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展起關(guān)鍵作用,而且對(duì)全球公共衛(wèi)生安全和食品安全有重要意義。為準(zhǔn)確掌握不同廠家豬口蹄疫O型滅活疫苗的臨床免疫效果,篩選優(yōu)質(zhì)、可靠的豬口蹄疫O型滅活疫苗,本研究選擇針對(duì)本地流行株的豬口蹄疫O型滅活疫苗,利用口蹄疫液相阻斷ELISA法篩選出免疫保護(hù)效果最佳的口蹄疫疫苗,為哈密市生豬養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)范免疫程序和科學(xué)選擇疫苗提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

哈密市某生豬養(yǎng)殖場(chǎng)(存欄母豬在150頭以上),全場(chǎng)生豬飼養(yǎng)管理模式、養(yǎng)殖環(huán)境及飼料等均一致,豬群整體健康狀況良好。隨機(jī)選擇45 d～50 d 品種一致、體重相近,臨床觀察1周后確認(rèn)健康的未經(jīng)免疫的生豬60頭,經(jīng)ELISA檢測(cè)所有試驗(yàn)豬O型口蹄疫母源抗體低于1:64(表1)。

豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/Mya98/XJ/2021株+O/GX/09-7株),分別來源于目前國內(nèi)口碑相對(duì)較好的A、B、C 3個(gè)生產(chǎn)廠家。酶標(biāo)儀(型號(hào) ELx808)購自美國寶特公司;移液器均購自德國Eppendorf公司。口蹄疫液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒,購自蘭州獸研生物科技有限公司(試劑盒批號(hào)為:20210922101-7,抗原批號(hào)101/36)。

表1 免疫前試驗(yàn)豬母源抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1 Detection results of pig maternal antibody in pre-immunization test

1.3 方法

1.3.1 免疫分組和方法 將60頭試驗(yàn)豬隨機(jī)分成A、B、C 3組,每組20頭,分欄標(biāo)記。按照說明書要求分別對(duì)A、B、C 3組試驗(yàn)豬肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗(2 mL/頭),在首免間隔28 d 后進(jìn)行二免。

1.3.2 采血日齡 A、B、C 3組分別于首免、二免后28 d、二免后60 d 進(jìn)行前腔靜脈采血,收集血清,存于-20 ℃冰箱備檢。

1.3.3 檢測(cè)方法與結(jié)果判定 采用口蹄疫O型液相阻斷ELISA法檢測(cè)樣品,具體操作參照試劑盒說明書執(zhí)行。判定標(biāo)準(zhǔn):當(dāng)抗體效價(jià)≥1∶64,被檢血清的免疫抗體視為合格;抗體效價(jià)<1∶64,被檢血清的免疫抗體視為不合格。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用Excel對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、統(tǒng)計(jì),用GraphPad Prism 8.3 軟件對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本Kruskal-Wallis檢驗(yàn),比較各組免疫抗體滴度之間的差異性,P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 首免28 d后抗體檢測(cè)結(jié)果

由圖1可知,首免28 d 后,A、B、C各組之間差異顯著(P<0.05)。A組疫苗免疫抗體滴度的中位數(shù)明顯高于B、C 2組(P<0.05),表明A廠家疫苗首免28 d 后的免疫效果優(yōu)于B、C 2個(gè)廠家。

2.2 二免28 d 后抗體檢測(cè)結(jié)果

由圖2可知,二免28 d 后,A、B、C各組之間差異顯著(P<0.05)。且疫苗免疫抗體滴度均有不同程度的升高,A組疫苗免疫抗體滴度的中位數(shù)高于B、C 2組,集中程度明顯高于B、C 2組(P<0.05),表明二免28 d,后A、B、C 3個(gè)廠家的疫苗免疫抗體滴度均有所升高,A廠家疫苗免疫效果優(yōu)于B、C 2家。

圖1 首免28 d后免疫抗體滴度對(duì)比 *P<0.05,**P<0.01,***P<0.001, ****P<0.0001,下同。Fig. 1 Comparison of immune antibody titer 28 days after first immunization * means P<0.05,** means P<0.01, *** means P<0.001,**** means P<0.0001, the same below.

圖2 二免28 d后免疫抗體滴度對(duì)比Fig. 2 Comparison of immune antibody titer 28 days after second immunization

2.3 二免60 d 后抗體檢測(cè)結(jié)果

由圖3可知,二免60 d 后,A、B、C各組之間差異顯著(P<0.05)。且疫苗免疫抗體滴度均有不同程度的下降,A組疫苗免疫抗體滴度的中位數(shù)高于B、C 2組(P<0.05),表明二免60 d 后A廠家疫苗免疫抗體維持效果優(yōu)于B、C 2家。

圖3 二免60 d后免疫抗體滴度對(duì)比Fig. 3 Comparison of immune antibody titer 60 days after second immunization

3 討 論

口蹄疫發(fā)病率高,傳染性強(qiáng)且有多種血清型和廣泛的宿主范圍[12],可感染牛、豬、山羊、綿羊等70多種偶蹄類動(dòng)物[13-14]?？谔阋叩呐R床癥狀包括發(fā)熱,口鼻黏膜、趾間、冠狀帶、乳房和乳頭上皮等部位出現(xiàn)水皰病變,還會(huì)導(dǎo)致晚期妊娠動(dòng)物流產(chǎn)、食欲不振,體重和產(chǎn)奶量下降[15],其中很大一部分康復(fù)的動(dòng)物成為口蹄疫病毒的攜帶者[16]。此外,由于口蹄疫受動(dòng)物種類[17]、動(dòng)物品種、宿主免疫狀態(tài)、病毒感染滴度等因素影響[14],可能導(dǎo)致長期、無癥狀和持續(xù)感染,給口蹄疫的控制和根除帶來極大的困難[18]。我國針對(duì)口蹄疫的防控政策主要是預(yù)防為主、撲殺為輔,對(duì)口蹄疫實(shí)行強(qiáng)制免疫。目前廣泛使用的豬口蹄疫疫苗包括:滅活疫苗[19]、合成肽疫苗[20]和基因工程疫苗等。臨床生產(chǎn)中主要使用的是口蹄疫滅活疫苗[21]。然而,由于國內(nèi)口蹄疫滅活疫苗生產(chǎn)廠家眾多,質(zhì)量良莠不齊,如何選擇優(yōu)質(zhì)、可靠且適合當(dāng)?shù)氐目谔阋咭呙缛匀皇且粋€(gè)巨大的挑戰(zhàn)[22]。

本研究選擇A、B、C 3個(gè)廠家的豬口蹄疫O型疫苗對(duì)母源抗體保護(hù)水平較低的斷奶育肥豬(45 d～50 d)免疫接種,試驗(yàn)豬均未出現(xiàn)免疫副反應(yīng),表明本研究使用的疫苗安全系數(shù)相對(duì)較高,免疫人員操作得當(dāng),對(duì)試驗(yàn)對(duì)象造成的應(yīng)激相對(duì)較小。對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本K-W檢驗(yàn),結(jié)果顯示A、B、C各組間差異顯著。3個(gè)廠家豬口蹄疫O型疫苗有效免疫后均能產(chǎn)生一定的免疫保護(hù)作用,但可能受母源抗體水平、疫苗抗原含量、保存條件和加工工藝等多種因素的影響,A廠家的免疫抗體滴度上升水平較高、離散度較低、抗體衰減速度相對(duì)較慢,育肥豬出欄時(shí)免疫抗體依舊維持在較高水平,野毒感染保護(hù)力較強(qiáng),優(yōu)于B、C 2個(gè)廠家。

目前,政府部門供應(yīng)的豬口蹄疫O型疫苗均能對(duì)豬群提供良好保護(hù)作用,養(yǎng)殖場(chǎng)戶可放心使用。建議生豬出欄前至少開展1次強(qiáng)化補(bǔ)免,可有效保護(hù)豬群免受野毒侵襲;定期采血檢測(cè),了解免疫抗體水平,為科學(xué)防控提供參考依據(jù);養(yǎng)殖場(chǎng)戶還應(yīng)結(jié)合實(shí)際,科學(xué)規(guī)范建立免疫程序,提升疫苗免疫保護(hù)效果。

4 結(jié) 論

建議哈密市生豬養(yǎng)殖場(chǎng)宜選用A廠家口蹄疫O型滅活疫苗,生豬45 d～50 d時(shí)開始首免,且在間隔28 d實(shí)行二免,避免育肥后期因補(bǔ)免而影響生豬正常生長,保證生豬在出欄時(shí)仍對(duì)豬口蹄疫O型野毒具有較高的保護(hù)作用。