袁 暢,李 蔚,黃玉英,何蘋萍,鄭玉斯,李 鑫,盧智發(fā),張圣杰,李文紅,彭金霞,王大鵬

(1.廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院/廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南寧 530021;2.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,南寧 530004)

【研究意義】克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)原產(chǎn)于北美洲,20世紀(jì)30年代引進(jìn)中國,如今已成為重要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蝦類之一,主要靠自然繁殖供給苗種[1]。自然繁殖親本主要是捕撈殘留的成蝦,大多個體小,生長速度慢,繁殖速度慢且繁殖時間長[2]。當(dāng)克氏原螯蝦生活環(huán)境發(fā)生巨大變化(如干旱、高溫酷暑)時,其種族延續(xù)與繁殖需求將變成生存的首要選擇,這種情況下繁殖性能將產(chǎn)生一定變化,如在環(huán)境脅迫下克氏原螯蝦會出現(xiàn)早繁、多繁現(xiàn)象[3]。曬田環(huán)境脅迫是一種人工誘導(dǎo)繁殖的常用方法,近年來在生產(chǎn)上廣泛使用,但其技術(shù)尚未標(biāo)準(zhǔn)化,曬田起始時間和曬田時長主要依靠生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)決定。因此,急需研究曬田環(huán)境脅迫下克氏原螯蝦體內(nèi)生理調(diào)節(jié)機(jī)制,為改進(jìn)生產(chǎn)操作提供理論依據(jù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】在不同脅迫環(huán)境下,水產(chǎn)動物將從神經(jīng)內(nèi)分泌、生理生化、免疫調(diào)節(jié)等方面進(jìn)行協(xié)同調(diào)控,以維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[4]。如青海湖裸鯉(Gymnocyprisprzewalskii)在堿度脅迫下,AKP/ALP和ACP活性隨堿度升高或降低均呈先下降后上升的變化趨勢;GSH-Px活性隨堿度升高呈先上升后下降的變化趨勢,隨堿度降低則呈先下降后上升的變化趨勢[5];太平洋白蝦(Pacificwhiteshrimp)的PGF2α和PGE2濃度在3.0%鹽度下顯著高于1.5%鹽度[6];隨著褪黑激素濃度的增大,鋸緣青蟹(Scyllaserrata)體內(nèi)MF與Ecdysone水平顯著增加[7];凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)在急冷與空氣暴露聯(lián)合脅迫下,隨著脅迫時間的延長,其Cortisol含量呈下降趨勢[8];在使用雙酚A脅迫福壽螺的研究中,性類固醇激素(Estrone、17β-E2、T和PROG)含量隨著雙酚A濃度持續(xù)升高而顯著降低[9]。關(guān)于環(huán)境脅迫下水產(chǎn)動物高血糖家族激素(CHH、GIH、MIH和MOIH)含量變化的研究則鮮見報(bào)道?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】克氏原螯蝦抵抗惡劣環(huán)境的能力較強(qiáng),對曬田環(huán)境脅迫具有獨(dú)特的適應(yīng)能力,在此過程中可促進(jìn)卵巢發(fā)育及繁殖,但目前鮮見關(guān)于曬田環(huán)境脅迫下克氏原螯蝦體內(nèi)生化與激素調(diào)節(jié)機(jī)制的報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究對比分析曬田環(huán)境脅迫下克氏原螯蝦各項(xiàng)生化指標(biāo)變化、激素調(diào)節(jié)機(jī)制及對卵巢發(fā)育的影響,為曬田環(huán)境脅迫促進(jìn)克氏原螯蝦卵巢成熟這一生產(chǎn)操作的改良和標(biāo)準(zhǔn)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用克氏原螯蝦取自廣西來賓市的一個商業(yè)養(yǎng)殖場。2022年9月,分別選取50 kg克氏原螯蝦(雌雄比1∶1,雌雄各25 kg)放至2個池塘中,1周后開始正式試驗(yàn)。其中1個池塘改造后作為曬田池塘,池內(nèi)所有試驗(yàn)蝦為曬田組,另一池塘為不曬田的對照池塘,池內(nèi)所有試驗(yàn)蝦為對照組。2個池塘投放數(shù)量均大于2000尾。曬田池塘和對照池塘面積均約為1300 m2,底質(zhì)均為稻田壤土,土壤保水力較強(qiáng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)期間天氣晴朗,無降雨。將曬田池塘的田面(300 m2)用塑料圍子和鐵管圍牢,防止逃逸,對照池塘不需改造。2個池塘水深30～40 cm,提前1周放蝦入池至田面。正式試驗(yàn)開始后將曬田池塘田面水排干,使田面自然曝曬,對照池塘正常養(yǎng)殖。田面在白天日照時間約12.5 h、平均溫度34.1 ℃的條件下自然暴曬,其底泥在排水時仍為軟泥底,但不足以使蝦躲避,經(jīng)1～3 d自然暴曬,達(dá)到田塊中間不陷腳,田邊表土無裂縫和發(fā)白的板結(jié)狀態(tài),期間可發(fā)現(xiàn)蝦挖掘洞穴進(jìn)行躲避。

1.2.2 樣品采集 在曬田脅迫0、3、7、10 d時分別從曬田組和對照組中采集30只雌性克氏原螯蝦。曬田組中蝦平均24.61 g,對照組中蝦平均23.56 g,二者規(guī)格接近。曬田組從田面挖掘蝦洞進(jìn)行采集(曬田脅迫0 d采集初始樣本,無需挖洞采集),對照組在環(huán)溝中放置蝦籠進(jìn)行采集。記錄樣品體重、卵巢重量、肝胰腺重量和卵巢顏色,根據(jù)Zhong等[10]對克氏原螯蝦卵巢發(fā)育分期的鑒定方法,卵巢發(fā)育至IV期鑒定為卵巢成熟。每個采樣時間段隨機(jī)取5只雌性克氏原螯蝦的組織作為一個混樣(每個時間段3個混樣),在冰上取出肝胰腺和卵巢一并放入凍存管,所有組織均置于液氮中保存?zhèn)溆?。從每只蝦的圍心腔抽取1 mL血淋巴放入抗凝管,同一混樣血淋巴進(jìn)行混合,于4 ℃冰箱靜置20 min,4 ℃下2500 r/min離心10 min,取其上清液分裝至離心管,得到血清。檢測卵巢、肝胰腺和血清的生化指標(biāo),并檢測血清激素。

性腺指數(shù)(GSI)=卵巢重量/體重×100%

肝體指標(biāo)(HSI)=肝胰腺重量/體重×100%

1.2.3 生化指標(biāo)與激素檢測 堿性磷酸酶(AKP/ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)采用蘇州科銘生物技術(shù)有限公司試劑盒檢測;前列腺素 F2α(PGF2α)、前列腺素 E2(PGE2)、雌酮(Estrone)、17β-雌二醇(17β-E2)、睪酮(T)、孕酮(PROG)、高血糖激素(CHH)、性腺抑制激素(GIH)、蛻皮抑制激素(MIH)、大顎器抑制激素(MOIH)、蛻皮激素(Ecdysone)、甲基法尼酯(MF)和皮質(zhì)醇(Cortisol)則采用江蘇晶美生物科技有限公司ELISA 試劑盒檢測。以上每個生化指標(biāo)或激素檢測均進(jìn)行3次重復(fù)。

1.3 分析方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2019和SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 曬田環(huán)境脅迫前后克氏原螯蝦卵巢發(fā)育情況

如表1所示,曬田脅迫0 d時,曬田組與對照組雌性克氏原螯蝦卵巢發(fā)育各分期分布數(shù)量差異不明顯,曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦主要分布在IV期,對照組雌性克氏原螯蝦主要分布在III期和IV期。曬田脅迫0 d時,曬田組與對照組的雌性克氏原螯蝦卵巢成熟率相近,曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢成熟率升至96.67%,但對照組雌性克氏原螯蝦卵巢成熟率僅升至60.00%。

表1 曬田前后克氏原螯蝦卵巢發(fā)育階段分布及成熟率變化Table 1 Changes in ovarian development stage and maturity rate of P.clarkii before and after sun-field

2.2 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦生化指標(biāo)的影響

如圖1所示,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異(P>0.05,下同);曬田組雌性克氏原螯蝦肝胰腺中PGE2含量均顯著低于對照組(P<0.05,下同),其他生化指標(biāo)與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異;曬田組雌性克氏原螯蝦血清中PGF2α和PGE2含量顯著低于對照組雌性克氏原螯蝦,其他生化指標(biāo)與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫3 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢中GSH-Px和PGF2α含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,其他生化指標(biāo)與對照組雌性克氏原螯蝦均無顯著差異;曬田組雌性克氏原螯蝦肝胰腺中ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,AKP/ALP含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異;曬田組雌性克氏原螯蝦血清中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量與對照組雌性克氏原螯蝦均無顯著差異。曬田脅迫7 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢和肝胰腺中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦;曬田組雌性克氏原螯蝦血清中GSH-Px、PGF2α和PGE2含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,AKP/ALP和ACP含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢、肝胰腺和血清中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦。

不同小寫字母表示同一時間下不同處理組間差異顯著(P<0.05)。下同。Different lowercase letters indicated significant difference between different treatment groups at the same time (P<0.05).The same as below.圖1 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦生化酶活性的影響Fig.1 Effect of sun-field environmental stress on biochemical enzyme activity of P.clarkii

2.3 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦性類固醇激素的影響

如圖2所示,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中T和PROG含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,Estrone和17β-E2含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫3 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中17β-E2、T和PROG含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,Estrone含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫7和10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中Estrone、17β-E2、T和PROG含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦。

圖2 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦性腺類固醇激素的影響Fig.2 Effect of sun-field environmental stress on gonadal steroid hormone of P.clarkii

2.4 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦高血糖家族激素的影響

如圖3所示,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中CHH、GIH、MIH和MOIH含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦。曬田脅迫3 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中CHH含量顯著低于對照組雌性克氏原螯蝦,MIH和MOIH含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,GIH含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫7 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中CHH和GIH含量顯著低于對照組雌性克氏原螯蝦,MOIH含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,MIH含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中CHH、MIH和MOIH含量均顯著低于對照組雌性克氏原螯蝦,GIH含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。

圖3 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦高血糖家族激素的影響Fig.3 Effect of sun-field environmental stress on hyperglycemic family hormones of P.clarkii

2.5 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦其他卵巢發(fā)育相關(guān)激素的影響

如圖4所示,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中Ecdysone含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,MF含量顯著低于對照組雌性克氏原螯蝦,Cortisol含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫3 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中Ecdysone和Cortisol含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,MF含量與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異。曬田脅迫7和10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中Ecdysone、MF和Cortisol含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦。

圖4 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦其他卵巢發(fā)育相關(guān)激素的影響Fig.4 Effect of sun-field environmental stress on other ovarian development-related hormones of P.clarkii

3 討 論

3.1 曬田環(huán)境脅迫對克氏原螯蝦卵巢發(fā)育的影響

環(huán)境脅迫能影響生長、繁殖、儲存等活動的能量最佳分配[11]。研究表明,曬田環(huán)境脅迫可誘導(dǎo)克氏原螯蝦進(jìn)行掘洞、交配和產(chǎn)卵,隨脅迫時間增加能促進(jìn)卵巢成熟并提高繁殖性能[12]。本研究中,曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢發(fā)育分期主要分布在IV期,卵巢成熟率為96.67%,對照組雌性克氏原螯蝦的卵巢則主要分布在III期和IV期,卵巢成熟率為60.00%,表明曬田環(huán)境脅迫可在10 d內(nèi)大幅度提高卵巢發(fā)育成熟速度,從而影響繁殖能力。推測曬田環(huán)境脅迫促進(jìn)卵巢成熟與李瑋等[3]研究報(bào)道的惡劣環(huán)境下克氏原螯蝦體內(nèi)營養(yǎng)能量將優(yōu)先供給繁殖需求相關(guān)活動的特性有關(guān)。

3.2 克氏原螯蝦生化指標(biāo)與卵巢成熟度相關(guān)性及其作用分析

AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2在甲殼類動物卵巢發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。AKP/ALP和ACP為生物體內(nèi)2種重要代謝調(diào)控酶,可催化磷酸單酯水解與磷酸基團(tuán)代謝,對免疫性能具有重要作用[13-14];AKP/ALP和ACP參與甲殼動物鈣、磷、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA和RNA等代謝,對水產(chǎn)動物生長、能量供給、營養(yǎng)吸收和利用等意義重大[14-15]。GSH-Px是甲殼動物抗氧化防御系統(tǒng)中的關(guān)鍵酶,在克氏原螯蝦免疫防御和卵子發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用[16]。刀額新對蝦(Metapenaeusensis)卵巢成熟過程中,GSH-Px可在防止卵母細(xì)胞氧化損傷及平衡活性氧生成方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[17]。前列腺素類化合物的突出作用是調(diào)節(jié)甲殼動物雌性生殖系統(tǒng)成熟[18]。研究表明,PGF2α和PGE2可顯著提高淡水蟹(Oziotelphusasenexsenex)和鋸緣青蟹(S.serrata)卵巢指數(shù)、卵母細(xì)胞直徑和數(shù)量、卵黃蛋白原水平、Ecdysone和MF水平[19-20]。斑節(jié)對蝦PGF2α濃度含量與卵巢成熟呈負(fù)相關(guān),PGE2則相反[18];日本囊對蝦PGF2α和PGE2濃度含量與卵巢成熟呈負(fù)相關(guān)[21],究其原因可能是物種特異性差異所致。本研究中,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦不同組織中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量均顯著低于對照組或與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異;曬田脅迫3 和7 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦不同組織中這些生化指標(biāo)含量均顯著高于對照組或與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異,而曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦不同組織中所有生化指標(biāo)含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦。這一結(jié)果表明隨時間增加,曬田組雌性克氏原螯蝦不同組織的生化指標(biāo)含量均呈上升趨勢,且這些生化指標(biāo)含量與曬田脅迫時間呈正相關(guān),結(jié)合上述曬田脅迫促進(jìn)克氏原螯蝦卵巢成熟的結(jié)論,可證實(shí)5個生化指標(biāo)濃度含量與卵巢成熟呈正相關(guān)。推測5個生化指標(biāo)對曬田環(huán)境脅迫下克氏原螯蝦卵巢成熟過程中的能量供給、營養(yǎng)吸收利用、免疫防御、卵母細(xì)胞生長及部分卵巢發(fā)育相關(guān)激素調(diào)節(jié)起重要作用。然而,本研究中曬田組與對照組雌性克氏原螯蝦的部分生化指標(biāo)與激素在曬田脅迫0 d時存在顯著差異,推測為曬田前1周,試驗(yàn)雌蝦經(jīng)捕撈搬運(yùn)后進(jìn)入2個試驗(yàn)池塘的新環(huán)境中,在此過程中產(chǎn)生一定應(yīng)激,直至?xí)裉镩_始時體內(nèi)的生化指標(biāo)與激素還受到影響。

3.3 克氏原螯蝦激素水平變化機(jī)理及其作用分析

性類固醇激素可調(diào)控甲殼動物卵黃發(fā)生和卵巢發(fā)育[22-23],對繁殖起關(guān)鍵作用,包括Estrone、17β-E2、T和PROG等。Estrone可促進(jìn)鰻鱺卵巢發(fā)育,使其產(chǎn)生外觀和顏色等第二性征變化[24]。17β-E2可刺激甲殼動物合成卵黃蛋白原,影響卵母細(xì)胞生長及卵黃發(fā)生[25]。T可誘導(dǎo)卵巢發(fā)育,在卵巢生長過程中基于睪酮芳構(gòu)化成為雌二醇[26]。PROG作為一種前體,在甲殼動物卵巢細(xì)胞發(fā)育至特定階段轉(zhuǎn)化為其他類固醇激素,促進(jìn)卵黃積累及卵巢發(fā)育[27]。在魚類中,17β-HSD(17β羥類固醇脫氫酶)可將Estrone分解為17β-E2,P450芳化酶可將T分解為17β-E2[24],但在甲殼動物尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究中,曬田脅迫0和3 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦Estrone、17β-E2、T和PROG含量顯著高于對照組或與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異,曬田脅迫7和10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中的性類固醇激素均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,表明曬田組雌性克氏原螯蝦血清Estrone、17β-E2、T和PROG含量隨時間增加均呈上升趨勢。上述4個激素對卵巢發(fā)育均有促進(jìn)作用,隨時間增加,曬田組雌性克氏原螯蝦血清中激素對卵巢發(fā)育的積極作用隨之增強(qiáng)。

高血糖家族激素可調(diào)控甲殼類動物蛻皮、代謝、繁殖、滲透平衡等活動,主要成員為CHH、GIH、MIH和MOIH[28]。CHH可調(diào)節(jié)甲殼動物糖代謝和脂代謝,抑制MF分泌及卵黃蛋白原合成,從而抑制卵巢發(fā)育[29-30]。但王曉偉等[31]認(rèn)為,CHH能刺激卵黃發(fā)生,促進(jìn)生殖。GIH濃度隨著美洲龍蝦生殖周期成熟而降低,可抑制卵黃發(fā)生,從而抑制卵巢發(fā)育[32]。MIH可誘導(dǎo)藍(lán)蟹(Callinectessapidus)和刀額新對蝦(Metapenaeusensis)卵巢成熟,增加卵黃蛋白原表達(dá)[31,33]。 趙真慧[34]研究認(rèn)為MIH抑制脊尾白蝦卵巢發(fā)育和Ecdysone合成,降低MIH生成與釋放,可促進(jìn)卵巢成熟。MOIH可抑制甲殼類動物大顎器官分泌MF,降低MF分泌速度,抑制卵黃發(fā)生及卵巢發(fā)育[35]。本研究中,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦CHH、GIH、MIH和MOIH含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,曬田脅迫3和7 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦中高血糖家族激素含量顯著高于、低于對照組或與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異,曬田脅迫10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦中高血糖家族激素含量顯著低于對照組或與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異,表明曬田組雌性克氏原螯蝦CHH、GIH、MIH和MOIH含量隨時間增加均呈下降趨勢,高血糖家族激素含量與曬田脅迫時間均呈負(fù)相關(guān),上述4個激素均能抑制卵巢發(fā)育。因此,隨著脅迫時間增加,激素含量降低,曬田組雌性克氏原螯蝦卵巢發(fā)育加快。

甲殼類動物卵巢發(fā)育涉及多種激素。Cortisol為應(yīng)激激素,具有調(diào)控糖、脂肪生物合成的作用,當(dāng)動物受環(huán)境脅迫可使機(jī)體產(chǎn)生自我保護(hù),體內(nèi)能量失衡將刺激性腺分泌Cortisol[8,36]。本研究中,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦Cortisol含量與對照組雌性克氏原螯蝦不存在顯著差異,而曬田脅迫3、7和10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦Cortisol含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,推測為曬田組克氏原螯蝦因水量驟變以及高溫暴曬產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng),體內(nèi)能量失衡促使卵巢分泌Cortisol進(jìn)行自我保護(hù)。Ecdysone主要調(diào)控甲殼和節(jié)肢動物生長發(fā)育、性腺發(fā)育和形態(tài)發(fā)生,對蝦蟹類卵黃生成、卵巢成熟和蛋白合成具有重要作用[31,37]。本研究中,曬田脅迫0、3、7和10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦Ecdysone含量均顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,表明曬田組克氏原螯蝦在試驗(yàn)期間全程分泌Ecdysone,以促進(jìn)卵巢發(fā)育。MF可調(diào)控甲殼類動物卵巢發(fā)育,刺激Ecdysone分泌,對卵母細(xì)胞具有促進(jìn)作用,已在克氏原螯蝦、銳脊單肢蝦(Sicyoniaingentis)和擬穴青蟹(S.paramamosain)等甲殼類動物中得到證實(shí)[38-39]。本研究中,曬田脅迫0 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦MF含量顯著低于對照組雌性克氏原螯蝦,曬田脅迫3 d時,則與對照組雌性克氏原螯蝦無顯著差異,曬田脅迫7和10 d時,曬田組雌性克氏原螯蝦MF含量顯著高于對照組雌性克氏原螯蝦,表明曬田組雌性克氏原螯蝦MF含量隨時間增加呈上升趨勢,雌蝦體內(nèi)大量分泌MF,同時刺激Ecdysone分泌,二者共同調(diào)控卵巢發(fā)育。

4 結(jié) 論

曬田環(huán)境脅迫能促進(jìn)克氏原螯蝦卵巢成熟,加快卵巢發(fā)育相關(guān)生化指標(biāo)和激素的變化。曬田脅迫7～10 d時,促進(jìn)卵巢發(fā)育成熟的效果達(dá)到峰值,表現(xiàn)為卵巢成熟率接近100.00%。在此過程中,AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α、PGE2含量與卵巢成熟度呈正相關(guān);性類固醇激素(Estrone、17β-E2、T、PROG)和卵巢發(fā)育相關(guān)激素(Ecdyone、MF、Cortisol)含量升高,高血糖家族激素(CHH、GIH、MIH、MOIH)含量降低,上述激素聯(lián)合調(diào)控對卵巢發(fā)育具有積極作用。