趙權(quán),畢偉建,李萍萍,劉陽,袁吉振,朱彬蔚,盛姝潔

終末期腎病是一種腎功能嚴(yán)重受損、無法繼續(xù)維持正常生理功能的疾病狀態(tài)。腎透析可通過模擬腎臟的過濾功能而改善患者預(yù)后,但并不能治愈腎疾病,患者仍有較高死亡風(fēng)險[1]。因此,找出終末期腎病的相關(guān)指標(biāo)對臨床治療及改善患者預(yù)后具有重要意義。miRNA是一類小而非編碼的RNA分子,研究顯示miR-155可反映機體炎性反應(yīng)程度,且miR-155與腎小管上皮細(xì)胞分化相關(guān),可參與腎臟疾病的發(fā)病過程[2-4]。miR-182與炎性反應(yīng)性疾病、細(xì)胞纖維化等有關(guān)[5-6],其可能在腎臟疾病中也發(fā)揮重要作用[7]?；诖?本研究通過檢測終末期腎病血液透析患者血清miR-155和miR-182表達(dá)水平,分析兩者與終末期腎病血液透析患者預(yù)后的關(guān)系,以期為臨床治療和改善患者預(yù)后提供一定依據(jù),報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2019年5月—2022年5月海軍第九七一醫(yī)院、青島市市立醫(yī)院、青島市海慈醫(yī)院接受診治并進行血液透析的終末期腎病患者112例為終末期腎病組,男57例,女55例,年齡51～78(61.57±8.68)歲。同期體檢健康者112例為健康對照組,男53例,女59例,年齡51～75(60.43±8.36)歲。2組人員性別、年齡比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(2019-41209),全部受試者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①終末期腎病血液透析患者經(jīng)臨床病理確診,符合《慢性腎衰竭中西醫(yī)結(jié)合診療指南》[8]中有關(guān)終末期腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn);②在海軍第九七一醫(yī)院、青島市市立醫(yī)院、青島市海慈醫(yī)院首次進行維持性血液透析;③年齡>18歲,患者隨訪資料齊全;④患者入院前未進行過手術(shù)、放療、化療等治療。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①惡性腫瘤者;②伴有肝或其他臟器功能嚴(yán)重?fù)p傷者;③有自身免疫性疾病、全身感染性疾病者;④進行過腎移植者。

1.3 觀測指標(biāo)與方法

1.3.1 樣本收集:患者于入院翌日晨/健康對照組體檢當(dāng)日采集空腹肘靜脈血3～4 ml,室溫靜置30 min,離心留取上清液,分裝于無菌EP管中,于-20℃冰箱中保存待檢。

1.3.2 血清miR-155和miR-182表達(dá)水平檢測:采用miRNA試劑盒(19332ES,上海翌圣生物公司)提取血清總miRNA,按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(205311,德國Qiagen公司)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,采用M-6000型實時熒光定量PCR(qRT-PCR)儀(蘇州雅瑞生物公司)檢測血清miR-155和miR-182相對表達(dá)水平,內(nèi)參為U6,引物經(jīng)設(shè)計軟件設(shè)計后由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列見表1,所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。為減小實驗誤差,各樣品重復(fù)3次,使用2-△△Ct方法計算目的基因miR-155和miR-182的相對表達(dá)量。

表1 血清miR-155和miR-182引物序列

1.3.3 隨訪:患者在首次開始透析后計算隨訪時間,隨訪間隔為3個月,隨訪終點為1年或患者死亡,隨訪率為100%。生存時間為透析開始日期至患者死亡時間或最終隨訪截止時間。根據(jù)患者生存情況分為生存亞組和死亡亞組。

2 結(jié) 果

2.1 2組血清miR-155和miR-182表達(dá)水平比較 與健康對照組比較,終末期腎病組患者血清miR-155和miR-182表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),見表2。

表2 終末期腎病組和健康對照組血清miR-155和miR-182表達(dá)水平比較

2.2 2亞組終末期腎病患者血清miR-155和miR-182表達(dá)及臨床資料比較 2亞組患者男女比例、年齡、BMI、原發(fā)疾病比例、透析時間及血清P、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與生存亞組比較,死亡亞組患者Hb和Alb顯著降低(P<0.01),血Ca、hs-CRP及血清miR-155、miR-182表達(dá)升高(P<0.01),見表3。

表3 生存亞組和死亡亞組終末期腎病患者血清miR-155和miR-182表達(dá)及臨床資料比較

2.3 血清miR-155與miR-182表達(dá)水平相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果表明,終末期腎病血液透析患者血清miR-155與miR-182表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.516,P<0.001)。

2.4 影響終末期腎病透析患者預(yù)后的Logistic回歸分析 以終末期腎病透析患者預(yù)后情況為因變量(賦值:死亡=1,生存=0),Hb、血Ca、hs-CRP、Alb、miR-155和miR-182為自變量,進行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:Hb低、血Ca高、hs-CRP高、Alb低、miR-155高和miR-182高均是終末期腎病透析患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05),見表4。

表4 影響終末期腎病血液透析患者預(yù)后的Logistic回歸分析

2.5 血清miR-155和miR-182表達(dá)水平預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后的價值 繪制血清miR-155、miR-182及二者聯(lián)合預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后的ROC曲線,并計算AUC,結(jié)果顯示:血清miR-155、miR-182及二者聯(lián)合的AUC分別為0.827、0.793、0.956,二者聯(lián)合優(yōu)于血清miR-155、miR-182各自單獨預(yù)測(Z=2.251、 2.797,P=0.024、0.005),見表5和圖1。

圖1 血清miR-155和miR-182表達(dá)水平預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后的ROC曲線Fig.1 Serum miR-155 and miR-182 expression levels predict the prognostic ROC curve of hemodialysis patients with end-stage renal disease

表5 血清miR-155、miR-182表達(dá)水平對終末期腎病血液透析患者預(yù)后的預(yù)測價值

3 討 論

血液透析作為治療終末期腎病的重要方式,被廣泛應(yīng)用,其通過去除體內(nèi)廢物和水分,恢復(fù)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,從而改善患者的生活和預(yù)后[9]。腎透析是一種替代性治療方法,不能完全恢復(fù)腎臟的功能。同時,腎透析也是一種長期連續(xù)的治療過程,引發(fā)的炎性反應(yīng)、感染、心血管疾病等[10-11],使患者預(yù)后變差,威脅其生命。因此,尋找終末期腎病血液透析患者預(yù)后相關(guān)指標(biāo),及時干預(yù),對提高患者生存狀況有積極意義。

miR-155是一種在人類和其他哺乳動物中廣泛表達(dá)的重要microRNA,通過結(jié)合到mRNA上,抑制其翻譯或者導(dǎo)致其降解,從而影響基因的表達(dá)。它在許多生理過程中發(fā)揮作用,包括細(xì)胞增殖、分化和死亡[12]。關(guān)昌杰等[13]通過熒光定量PCR檢測了糖尿病腎病患者血清miR-155的表達(dá),發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),且與腎臟纖維化相關(guān)。Zhang等[14]研究發(fā)現(xiàn),miR-155的過表達(dá)促進了細(xì)胞凋亡,抑制了細(xì)胞增殖,而抑制miR-155的表達(dá)起到相反的作用。本研究中終末期腎病血液透析患者血清miR-155水平高于健康對照者,這一結(jié)果與關(guān)昌杰等[13]結(jié)果相似,且死亡亞組miR-155水平高于生存亞組,提示血清miR-155可能在終末期腎病發(fā)生中起作用,推測高水平miR-155可能通過促進機體炎性反應(yīng)或腎小管損傷加重腎病病情[15]。此外,本研究中血清miR-155對終末期腎病血液透析患者預(yù)后具有一定的評估價值,提示檢測血清miR-155可能是預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后的輔助指標(biāo),當(dāng)血清miR-155表達(dá)>2.31時,臨床應(yīng)及時制定診療方案,防止患者病情惡化。

miR-182與多個生物過程和疾病密切相關(guān),已有研究證明其在多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào),包括乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌等[16]。另外,miR-182也參與腎臟疾病的發(fā)生,Li等[17]通過抑制miR-182的表達(dá)可緩解腎損傷及細(xì)胞凋亡。Sun等[18]研究表明miR-182與腎上皮細(xì)胞纖維化呈正相關(guān)。本研究中終末期腎病透析患者血清miR-182表達(dá)明顯高于健康對照者,且死亡亞組miR-182水平高于生存亞組,提示miR-182可能與終末期腎病發(fā)生相關(guān),推測miR-182可通過促進腎上皮細(xì)胞凋亡及炎性反應(yīng),促進腎病發(fā)展[19]。進一步研究發(fā)現(xiàn),血清miR-182對終末期腎病血液透析患者預(yù)后具有一定的評估價值,當(dāng)血清miR-182表達(dá)高于2.02時,患者預(yù)后變差幾率較高,提示檢測血清miR-182表達(dá)可能有助于預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后。另外,本研究還發(fā)現(xiàn)血清miR-155和miR-182聯(lián)合檢測對終末期腎病血液透析患者預(yù)后具有更高的預(yù)測價值,提示血清miR-155和miR-182聯(lián)合可更有效地預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后,有較高的臨床參考價值。相關(guān)性分析顯示血清miR-155和miR-182呈正相關(guān),且Hb、血Ca、Alb、hs-CRP、miR-155和miR-182均為影響終末期腎病血液透析患者預(yù)后的因素,與前人研究結(jié)果類似[20],提示miR-155和miR-182可能相互影響,共同參與終末期腎病發(fā)生,及時確定miR-155和miR-182等水平有助于預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后,以便及時采取相應(yīng)治療策略。但具體機制仍需深入探究。

綜上所述,終末期腎病血液透析患者血清miR-155和miR-182表達(dá)水平上調(diào),二者聯(lián)合可較好地預(yù)測終末期腎病血液透析患者預(yù)后。但miR-155和miR-182在終末期腎病血液透析患者中的作用機制未深入研究,后期將增加樣本量進行探究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

趙權(quán)、畢偉建:科研設(shè)計、文章撰寫;李萍萍、朱彬蔚、盛姝潔:試驗實施、數(shù)據(jù)收集、文章審閱;劉陽、袁吉振:數(shù)據(jù)分析、文章修改