張南廷,李麗,吳記平

(南方醫(yī)科大學(xué)第十附屬醫(yī)院·東莞市人民醫(yī)院,1.檢驗(yàn)科;2.風(fēng)濕免疫科,廣東 東莞 523000)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性自身免疫性疾病,以關(guān)節(jié)炎癥和關(guān)節(jié)破壞為主要特征,嚴(yán)重影響患者的健康及生活質(zhì)量[1]。RA的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,研究[2]表明其與遺傳、環(huán)境、免疫和內(nèi)分泌等多種因素相關(guān)。近年來(lái),越來(lái)越多的研究[3]發(fā)現(xiàn),維生素D在RA的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。血清25-羥維生素D[25-hydroxyvitamin d,25(OH)D]在體內(nèi)的半衰期較長(zhǎng),被認(rèn)為是評(píng)估人體的維生素D水平的最主要指標(biāo)。低水平的血清25(OH)D已被證實(shí)[4-5]與骨質(zhì)疏松癥、骨折、肌肉虛弱及RA等自身免疫性疾病密切相關(guān)。核因子κB受體活化因子配體(RANKL)是一種存在于骨骼和免疫系統(tǒng)中的蛋白質(zhì),其過(guò)度表達(dá)會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)破壞[6]。骨密度是衡量骨骼健康的方式之一,測(cè)定RA患者骨密度的變化有利于預(yù)測(cè)全身骨質(zhì)疏松與局部關(guān)節(jié)畸形的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。炎性因子是RA發(fā)生過(guò)程中的關(guān)鍵介質(zhì),參與關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)和關(guān)節(jié)破壞[8]。目前,雖然RA患者血清25(OH)D、RANKL表達(dá)水平的相關(guān)研究已見(jiàn)報(bào)道,但其與骨密度、炎性因子之間關(guān)聯(lián)性的研究較少?；诖?本研究旨在分析中高活動(dòng)度RA患者血清25(OH)D、RANKL表達(dá)水平與骨密度、炎性因子表達(dá)的相關(guān)性,以探究其在RA發(fā)生發(fā)展中的病理機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年6月至2021年12月于南方醫(yī)科大學(xué)第十附屬醫(yī)院收治的120例中高活動(dòng)度RA患者為研究對(duì)象作為病例組;另選取同期入院體檢的120名健康人群為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[9],疾病活動(dòng)度為中高活動(dòng)度,即28個(gè)關(guān)節(jié)活動(dòng)評(píng)分(DAS28)>3.2 分;(2)近6個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)維生素D相關(guān)制劑治療;(3)近6個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用過(guò)可能影響骨代謝的藥物;(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)心、肝、腎等重要臟器功能受損者;(2)合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病史、惡性腫瘤者;(3)合并精神類疾病或溝通障礙者;(4)合并感染性疾病、其他自身免疫性疾病者;(5)其他類型的關(guān)節(jié)炎患者。對(duì)照組中男性24例,女性96例,年齡(48.32±10.58)歲,體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(21.39±1.68)kg/m2;病例組中男性22例、女性98例;年齡(48.46±10.39)歲,BMI(21.11±1.65)kg/m2。兩組性別、年齡、BMI比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),患者自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書。

1.2 方法

(1)血清25(OH)D、RANKL表達(dá)水平檢測(cè):采用化學(xué)發(fā)光(CLIA)法測(cè)定血清25(OH)D水平;采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血清RANKL表達(dá)水平,CLIA試劑盒購(gòu)自美國(guó)雅培公司,ELISA試劑盒購(gòu)自上?？婆嗳鹕锟萍加邢薰尽?2)骨密度測(cè)定:采用雙能X射線骨密度儀 Prodigy(美國(guó)GE)測(cè)定患者股骨頸、總髖關(guān)節(jié)及全部腰椎骨密度值。(3)血清炎性因子水平測(cè)定:采用ELISA法測(cè)定血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素8(IL-8)、IL-17水平,ELISA試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象血清25(OH)D、RANKL表達(dá)水平比較

病例組血清25(OH)D水平低于對(duì)照組,RANKL高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清25(OH)D、RANKL表達(dá)水平比較

2.2 兩組研究對(duì)象骨密度值比較

病例組股骨頸、總髖關(guān)節(jié)及全部腰椎骨密度值均低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組研究對(duì)象骨密度值比較

2.3 兩組研究對(duì)象炎性因子水平比較

病例組血清TNF-α、IL-8、IL-17水平均高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組研究對(duì)象血清TNF-α、IL-8、IL-17水平表達(dá)水平比較

2.4 病例組血清25(OH)D與骨密度、炎性因子表達(dá)水平的相關(guān)性分析

病例組患者血清25(OH)D與股骨頸骨密度、總髖關(guān)節(jié)骨密度及全部腰椎骨密度呈正相關(guān)(r=0.374、0.188、0.347,P<0.05),與血清TNF-α、IL-8、IL-17表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.373、-0.500、-0.352,P<0.05)。見(jiàn)圖1。

2.5 病例組血清RANKL與骨密度、炎性因子表達(dá)水平的相關(guān)性分析

病例組患者血清RANKL與股骨頸骨密度、總髖關(guān)節(jié)骨密度及全部腰椎骨密度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.245、-0.247、-0.416,P<0.05),與IL-17呈正相關(guān)(r=0.282,P<0.05),與TNF-α、IL-8無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.047、0.099,P>0.05)。見(jiàn)圖2。

3 討論

Bellan等[10]、Harrison等[11]均發(fā)現(xiàn),RA患者多伴有維生素D缺乏,且這種缺乏不但影響骨骼發(fā)展,還會(huì)影響機(jī)體免疫功能。RANKL作為介導(dǎo)成骨與骨重建的關(guān)鍵細(xì)胞因子,參與多種生物學(xué)效應(yīng),并可能誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥等骨相關(guān)疾病的發(fā)生。Tanaka等[12]發(fā)現(xiàn),以RANKL為靶點(diǎn)的藥物在治療RA時(shí)效果顯著。Lv等[13]也指出,抗RANKL單克隆抗體能對(duì)于RA大鼠的治療具有積極作用。骨密度值是反映骨骼強(qiáng)度的重要指標(biāo),RA患者通常伴有骨質(zhì)疏松,且治療RA的藥物可導(dǎo)致骨密度進(jìn)一步下降。Ketabforoush等[14]研究指出,RA患者患有骨質(zhì)疏松癥的風(fēng)險(xiǎn)高于健康人群,且Hsu等[15]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),中、重度RA患者的骨質(zhì)流失情況更為嚴(yán)重。促炎因子的過(guò)度產(chǎn)生也是導(dǎo)致RA患者關(guān)節(jié)滑膜增生、血管新生和骨骼侵蝕的關(guān)鍵因素。Gremese等[16]以RA患者為研究對(duì)象,發(fā)現(xiàn)高水平的IL-8、IL-17會(huì)促進(jìn)滑膜、肌腱、關(guān)節(jié)外部位、血管及肺部免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的有害激活。本研究中,病例組血清25(OH)D低于對(duì)照組、RANKL高于對(duì)照組,腰椎、股骨頸、全髖骨密度值均低于對(duì)照組,TNF-α、IL-8、IL-17水平均高于對(duì)照組,再次證實(shí)上述結(jié)論。

本研究發(fā)現(xiàn),中高活動(dòng)度RA患者血清25(OH)D與骨密度正相關(guān),與TNF-α、IL-8、IL-17負(fù)相關(guān)。分析原因可能如下:RA患者維生素D水平降低,影響鈣、磷等礦物質(zhì)吸收,從而導(dǎo)致骨密度降低;此外,維生素D可以通過(guò)維生素D受體影響免疫細(xì)胞的分化和活性,抑制TNF-α、IL-8、IL-17等細(xì)胞因子的生成。Khademi等[17]指出代謝失調(diào)患者體內(nèi)維生素D與TNF-α水平負(fù)相關(guān)。本研究中,中高活動(dòng)度RA患者血清RANKL與骨密度負(fù)相關(guān),與IL-17正相關(guān),與TNF-α、IL-8無(wú)相關(guān)性。Yokota等[18]研究發(fā)現(xiàn),RA患者血清RANKL與骨密度呈負(fù)相關(guān)。李秀娟等[19]指出,RA患者血清IL-17水平與RANKL呈正相關(guān)。張旭飛等[20]以RA患者為研究對(duì)象,發(fā)現(xiàn)其血漿RANKL與TNF-α、IL-8之間無(wú)明顯相關(guān)性。但與Marahleh等[21]研究不同,該研究發(fā)現(xiàn),與TNF-α共同培養(yǎng)的骨細(xì)胞RANKL mRNA表達(dá)水平升高,并推測(cè)TNF-α與骨細(xì)胞RANKL的表達(dá)密切相關(guān)。

綜上,中高活動(dòng)度RA患者血清25(OH)D水平降低、RANKL水平升高,且二者與患者骨密度、血清炎性因子水平具有一定相關(guān)性。