張玉衡，陳鳴，曹科，王剛，朱章華，虞文魁

南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，南京 210009

肝癌是世界第六大常見的惡性腫瘤。單獨(dú)應(yīng)用靶向藥物治療晚期肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma， HCC）的效果不佳，部分患者在治療后發(fā)生耐藥［1-2］。因此，探索HCC 的細(xì)胞耐藥機(jī)制是目前的研究重點(diǎn)與難點(diǎn)。鐵死亡是一種新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡形式，主要表現(xiàn)為鐵催化的脂質(zhì)過氧化物對細(xì)胞各類膜結(jié)構(gòu)的破壞，被以還原性谷胱甘肽（Glutathione， GSH）-谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase 4， GPX4）為主的抗氧化系統(tǒng)負(fù)性調(diào)控［3］。研究［4］發(fā)現(xiàn)，索拉非尼等靶向藥物在誘導(dǎo)HCC 腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制血管新生的同時，還可抑制腫瘤細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生、上調(diào)抗抗氧化系統(tǒng)GSHGPX4 的活性，抑制HCC 細(xì)胞鐵死亡，最終導(dǎo)致腫瘤耐藥。吡咯啉-5-羧酸合成酶（Pyrroline-5-carboxylate synthase， P5CS）是催化脯氨酸合成的限速酶之一，除催化合成作用外還能維持細(xì)胞內(nèi)GSH 含量，從而保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷，具有潛在的抗氧化作用［5］。P5CS 可通過增加脯氨酸的合成，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，但具體作用機(jī)制尚不明確［6］。P5CS 是否通過調(diào)控肝癌細(xì)胞的鐵死亡影響細(xì)胞耐藥，目前相關(guān)研究較少。為此，2023 年1-6 月，我們觀察了P5CS 在HCC 組織中的表達(dá)及其對人肝癌細(xì)胞系鐵死亡的調(diào)控作用，進(jìn)一步探討其可能作用機(jī)制，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 HCC 癌組織及癌旁組織P5CS 檢測 2020 年9月—2021 年9 月間于南京鼓樓醫(yī)院就診的HCC 患者10 例?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)：①結(jié)合臨床表現(xiàn)、影像學(xué)診斷（B 超/增強(qiáng)CT 或MRI）和血清AFP 檢測（≥400 μg/L）臨床確診為HCC；②術(shù)前未經(jīng)放療、化療和靶向治療；③不伴有其他類型肝占位、肝內(nèi)膽管結(jié)石等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不愿意接受手術(shù)治療或出現(xiàn)肝內(nèi)/肝外廣泛轉(zhuǎn)移，暫無法進(jìn)行手術(shù)治療；②肝功能和/或其他臟器功能出現(xiàn)嚴(yán)重不全，無法耐受手術(shù)治療；③術(shù)后病理證實(shí)為非HCC 的其他類型肝癌。10例患者均留取HCC 組織和對應(yīng)癌旁組織（≥5 cm）標(biāo)本，并對標(biāo)本的使用知情同意。取HCC 及癌旁組織，固定后石蠟包埋切片，Triton-X 通透組織細(xì)胞后封閉非特異性抗原，anti-P5CS 一抗孵育，4 ℃過夜。次日孵育二抗并滴加DAB 顯色劑，蘇木素復(fù)染后封片觀察。染色強(qiáng)度為陰性計0 分、弱陽性計1 分、陽性計2 分、強(qiáng)陽性計3 分；陽性染色細(xì)胞（陽性、強(qiáng)陽性染色強(qiáng)度細(xì)胞）百分比為＜25%者計1 分、26%～50%者計2 分、51%～75%者計3 分、76%～100%者計4 分；以染色強(qiáng)度、陽性染色細(xì)胞百分比相加為P5CS 的蛋白的相對表達(dá)量。重復(fù)測算3 次，取平均值。

1.2 P5CS 對人肝癌細(xì)胞系鐵死亡的調(diào)控作用觀察

1.2.1 細(xì)胞、試劑及儀器 人肝癌細(xì)胞系Li-7、Huh-7 購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫；Huh-7 在含有10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，Li-7 在含有10%胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于37 ℃、含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)。siALDH18A1［乙醛脫氫酶家族18成員A1（ALDH18A1）基因可編碼P5CS 蛋白，基因序列GTTCGTTCTTGGAGCAACA］購自廣州銳博生物；逆轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR 試劑盒購自武漢賽維爾公司；qPCR所需引物購自北京擎科生物，具體序列GAPDH 基因qPCR 引物正向序列TCAAGGCTGAGAACGGGAAG、反向序列TCGCCCCACTTGATTTTGGA，ALDH18A1 基因qPCR引物正向序列GCCCTTCAACCAACATCTTCT、反向序列AGGGGTACAGTGATAAACGGG，ACSL4 基因qPCR 引物正向序列GCTATCTCCTCAGACACACCGA、反向序列AGGTGCTCCAACTCTGCCAGTA，LPCAT3 基因qPCR 引物正向序列GGAGCTGAGCCTTAACAAGTT、反向序列CAAAGCAAAGGGGTAACCCA，15-LOX 基因qPCR 引物正向序列ACC TTCCTGCTCGCCTAGTGTT、反向序列 GGCTACAGAGAATGACGTTGGC。一抗（anti-P5CS、anti-β-actin、anti-SLC7A11、anti-GPX4）及二抗（羊抗鼠、羊抗兔）購自美國Proteintech 公司；CCK8 試劑盒購自武漢賽維爾公司；細(xì)胞活性氧簇（ROS）檢測試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑Lipo8000?購自碧云天生物公司；C11-BODIPY染料購自美國Thermo Fisher公司；SLC7A11靶向抑制劑Erastin、GPX4 靶向抑制劑RSL-3 購自美國Selleck公司。

1.2.2 Li-7、Huh-7 細(xì)胞培養(yǎng)及siALDH18A1 轉(zhuǎn)染方法 取接種于6 孔板內(nèi)的對數(shù)生長期 Li-7、Huh-7細(xì)胞，按說明書將適量Lipo8000?和siALDH18A1 混合，室溫孵育15 min 后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，控制siALDH18A1終濃度為50 nmol/L。繼續(xù)培養(yǎng)48 h 后TRIzol 提取總RNA，采用qPCR 法檢測細(xì)胞ALDH18A1 mRNA，與轉(zhuǎn)染前比較，轉(zhuǎn)染48 h 時Li-7、Huh-7 細(xì)胞中ALDH18A1 mRNA 相對表達(dá)量減少至27.10 ± 13.30、30.20 ± 3.60（P＜0.05），采用WESTERN Blotting 法檢測轉(zhuǎn)染前后Li-7、Huh-7 細(xì)胞P5CS 蛋白，轉(zhuǎn)染前Li-7、Huh-7 細(xì)胞P5CS 蛋白相對表達(dá)量分別為1.07 ± 0.23、0.65 ± 0.02，轉(zhuǎn)染后Li-7、Huh-7 細(xì)胞P5CS 蛋白相對表達(dá)量分別為0.35 ± 0.01、0.02 ±0.01，轉(zhuǎn)染前后Li-7、Huh-7細(xì)胞P5CS蛋白相對表達(dá)量比較，P均＜0.05。說明轉(zhuǎn)染siALDH18A1后，Li-7、Huh-7 細(xì)胞中P5CS 蛋白被成功抑制，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 轉(zhuǎn)染前后人肝癌細(xì)胞系鐵死亡程度觀察采用C11-BODIPY 熒光探針檢測轉(zhuǎn)染前、后Li-7 及Huh-7 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物含量。C11-BODIPY 是一種脂溶性的熒光探針，能夠自由進(jìn)入細(xì)胞并與細(xì)胞或細(xì)胞器膜結(jié)合，借助流式細(xì)胞儀可以在不破壞細(xì)胞膜完整性的情況下檢測細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的含量，是目前已知準(zhǔn)確度最高的鐵死亡檢測指標(biāo)之一［7］。取轉(zhuǎn)染前后的Li-7、Huh-7 細(xì)胞培養(yǎng)至匯合度80%～90%時，換液并加入5 μmol/L 的C11-BODIPY，37 ℃避光孵育20 min。用無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3 次，胰酶消化后PBS 重懸，用流式細(xì)胞儀FITC 通道測算細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量，重復(fù)測算3次，取平均值。

1.2.4 轉(zhuǎn)染前后人肝癌細(xì)胞系脂質(zhì)過氧化物合成相關(guān)基因ACSL4、LPCAT3、LOX-15 檢測 采用qPCR 法檢測轉(zhuǎn)染前、后Li-7 及Huh-7 細(xì)胞內(nèi)ACSL4、LPCAT3、LOX-15 基因的mRNA，所有操作均同“1.2.2”。重復(fù)測算3次，取平均值。

1.2.5 轉(zhuǎn)染前后人肝癌細(xì)胞系SLC7A11、GPX4 蛋白檢測 采用WESTERN Blotting 法檢測轉(zhuǎn)染抑制前、后Li-7 及Huh-7 細(xì)胞內(nèi)SLC7A11、GPX4 蛋白。收集6孔板內(nèi)Li-7及Huh-7細(xì)胞并使用RIPA裂解液提取總蛋白，BCA 試劑盒測定蛋白濃度，SDS-PAGE凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)至PVDF 膜上，5%脫脂牛奶封閉2 h 孵育相應(yīng)一抗，4 ℃過夜，TBST 洗去膜上多余一抗，室溫孵育相應(yīng)二抗2 h，加入ECL 顯色液曝光。Image J 軟件測算SLC7A11、GPX4 蛋白灰度值，重復(fù)測算3次，取平均值。

1.2.6 加入Erastin 的Li-7、Huh-7 細(xì)胞鐵死亡程度觀察 Li-7、Huh-7 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染對照siRNA（D 組）或siALDH18A1（E 組），轉(zhuǎn)染48 h 時分別取Li-7 及Huh-7 細(xì)胞，各分為2 組，每組6 個復(fù)孔。其中E 組細(xì)胞換液后加入5 μmol/L 的Erastin，D 組換液后加入同體積的DMSO 作為對照，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。采用C11-BODIPY 熒光探針檢測Li-7 及Huh-7 細(xì)胞兩組脂質(zhì)過氧化物含量，所有操作均同“1.2.3”。重復(fù)檢測3次，取平均值。

1.2.7 加入RSL-3 的Li-7、Huh-7 細(xì)胞鐵死亡程度觀察 Li-7、Huh-7 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染對照siRNA（D 組）或siALDH18A1（E 組），48 h 時分別取Li-7 及Huh-7細(xì)胞，各分為2組，每組6個復(fù)孔。抑制前、抑制后的R組細(xì)胞換液后加入5 μmol/L的RSL-3，D組換液后加入同體積的DMSO 作為對照，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。采用C11-BODIPY 熒光探針檢測Li-7 及Huh-7 細(xì)胞兩組脂質(zhì)過氧化物含量，所有操作均同“1.2.3”，采用CCK-8 試劑盒檢測細(xì)胞活性，重復(fù)檢測3 次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用Graphpad Prsim 8.0軟件繪圖。計量資料通過Shapiro-Wilk 進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的以-x±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，不同處理組內(nèi)、組間比較采用兩因素方差分析；方差分析前檢驗(yàn)方差齊性，方差不齊者進(jìn)行秩變換后具備方差齊性，再進(jìn)行方差分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCC 及癌旁組織P5CS 蛋白相對表達(dá)量比較 HCC 及癌旁組織P5CS 蛋白相對表達(dá)量分別為6.80 ± 2.10、0.40 ± 0.20，二者比較，P＜0.05。

2.2 P5CS對人肝癌細(xì)胞系鐵死亡的調(diào)控作用

2.2.1 轉(zhuǎn)染前、后Li-7 及Huh-7 細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量比較 轉(zhuǎn)染前Li-7 及Huh-7 細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量分別為1.00 ± 0.01、1.00 ± 0.02，轉(zhuǎn)染后Li-7及Huh-7 細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量分別為1.05 ±0.03、0.95 ± 0.03，二者比較，P均＞0.05。

2.2.2 轉(zhuǎn)染前、后Li-7 及Huh-7 細(xì)胞ACSL4、LPCAT3、LOX-15 基因相對表達(dá)量比較 轉(zhuǎn)染后Li-7細(xì)胞ACSL4、LPCAT3、LOX-15 基因相對表達(dá)量分別為轉(zhuǎn)染前的74.00 ± 6.10、30.60 ± 29.70、31.30 ±9.50，轉(zhuǎn)染后Huh-7 細(xì)胞的三種基因相對表達(dá)量分別為轉(zhuǎn)染前的53.50 ± 11.10、31.90 ± 7.50、72.00 ± 12.70。與轉(zhuǎn)染前比較，轉(zhuǎn)染后Li-7 及Huh-7 組細(xì)胞三種脂質(zhì)過氧化物合成基因相對表達(dá)量間比較，P均＞0.05。

2.2.3 轉(zhuǎn)染前后Li-7 細(xì)胞SLC7A11、GPX4 蛋白相對表達(dá)量比較 轉(zhuǎn)染前、后Li-7 細(xì)胞SLC7A11 蛋白相對表達(dá)量分別為0.48 ± 0.07、0.17 ± 0.01，二者比較，P＜0.05；轉(zhuǎn)染后Li-7 細(xì)胞GPX4 蛋白相對表達(dá)量分別為00.29 ± 0.01、0.05 ± 0.01，二者比較，P＜0.05。

2.2.4 轉(zhuǎn)染前后加入Erastin 的Li-7、Huh-7 細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量比較 加入Erastin 誘導(dǎo)鐵死亡后，轉(zhuǎn)染前Li-7 E 組、Huh-7 E 組細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量分別為1.03 ± 0.01、1.03 ± 0.01；轉(zhuǎn)染后Li-7 E 組、Huh-7 E 組細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量分別為1.15 ±0.03、1.17 ± 0.02。與轉(zhuǎn)染前比較，轉(zhuǎn)染后Li-7 E組、 Huh-7 E 組細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量升高（P均＜0.05）。

2.2.5 轉(zhuǎn)染前后加入Erastin和RSL-3的Li-7、Huh-7細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量及細(xì)胞活性比較 轉(zhuǎn)染前Li-7 E 組、Li-7 R 組、Huh-7 E 組、Huh-7 R 組細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量分別為1.27 ± 0.01、1.05 ±0.02、1.23 ± 0.01、1.16 ± 0.03；轉(zhuǎn)染后Li-7 E組、Li-7 R 組、Huh-7 E 組、Huh-7 R 組細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量分別為1.31 ± 0.02、1.21 ± 0.02、1.29 ±0.01、1.23 ± 0.02。與轉(zhuǎn)染前比較，轉(zhuǎn)染后Li-7 E組、 Li-7 R 組、Huh-7 E 組、Huh-7 R 組細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物含量高（P均＜0.05）。轉(zhuǎn)染后Li-7 R 組、Huh-7R 組細(xì)胞相對活性分別為78.04% ± 1.79%，81.16% ± 0.40%，Li-7 E 組、Huh-7 E 組細(xì)胞相對活性分別為89.22% ± 1.68%，87.14% ± 2.51%，R 組和E組比較，P均＜0.05。

3 討論

以索拉非尼為代表的肝癌靶向藥物理論上具有抗血管生成、抑制細(xì)胞增殖以及誘導(dǎo)凋亡的多重抗腫瘤作用，但臨床上索拉非尼或同類藥物僅針對部分基因型突變患者有效，其中相當(dāng)一部分患者在用藥后不同時間還出現(xiàn)了腫瘤耐藥，總體生存期延長有限［8］。對索拉非尼作用機(jī)制的進(jìn)一步探索發(fā)現(xiàn)，類似藥物可以通過p62-Keap1/NRF2 途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞合成較多的GSH，同時抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的蓄積，避免出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化物介導(dǎo)的細(xì)胞鐵死亡尋找并明確調(diào)控HCC 細(xì)胞氧化-抗氧化平衡的內(nèi)在因素，對于揭示肝癌耐藥的相關(guān)分子機(jī)制具有重要意義［9］。

以脯氨酸及其代謝酶為核心的代謝途徑是近年來新發(fā)現(xiàn)的哺乳動物細(xì)胞抗氧化機(jī)制［8］。P5CS 是線粒體內(nèi)合成脯氨酸的關(guān)鍵酶之一，作為谷氨酸合成脯氨酸的第一個催化酶，由ALDH18A1 基因編碼，能夠?qū)⒐劝彼徂D(zhuǎn)化為P5C，為脯氨酸提供核心結(jié)構(gòu)——吡咯啉環(huán)；其催化活性依賴于ATP 和NAD（P）H［7］。乳腺癌細(xì)胞中P5CS 在癌基因c-MYC 的調(diào)控下含量升高并促進(jìn)癌細(xì)胞增殖；敲除P5CS的編碼基因ALDH18A1 會導(dǎo)致細(xì)胞線粒體呼吸鏈?zhǔn)軗p，降低細(xì)胞對氧化應(yīng)激的抵抗能力，表明P5CS具有潛在的抗氧化作用，并且都與腫瘤細(xì)胞中更多的還原當(dāng)量相關(guān)［7］。本研究發(fā)現(xiàn)，相較于癌旁組織和正常肝細(xì)胞，HCC 組織中和細(xì)胞中P5CS 含量均顯著升高，提示P5CS 在HCC 進(jìn)程中可能具有潛在的促癌作用。

鐵死亡是一種以脂質(zhì)過氧化物累積導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)氧化損傷的細(xì)胞死亡方式，現(xiàn)有研究認(rèn)為，鐵死亡的始動環(huán)節(jié)為鐵離子催化下的脂質(zhì)過氧化物過量合成，同時細(xì)胞內(nèi)抗氧化作用相對不足，導(dǎo)致累積的脂質(zhì)過氧化物破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)［3］?？梢姡F死亡強(qiáng)調(diào)細(xì)胞整體的氧化-抗氧化平衡狀態(tài)；抑制以GSHGPX4 為核心的抗氧化作用，能夠顯著降低細(xì)胞抗氧化能力，使細(xì)胞趨向于鐵死亡［10］。研究［9，11］發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌和HCC 中P5CS 含量異常升高，而且抑制其基因ALDH18A1 表達(dá)后腫瘤細(xì)胞均出現(xiàn)了增殖減慢、下游癌基因表達(dá)降低。我們進(jìn)一步分析了P5CS 與肝癌細(xì)胞鐵死亡的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)抑制P5CS沒有顯著影響細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物含量；然而在使用小分子抑制劑Erastin誘導(dǎo)鐵死亡后，缺少P5CS的肝癌細(xì)胞明顯出現(xiàn)鐵死亡趨勢。由于Erastin 具有誘導(dǎo)鐵死亡的特性，某種意義上也具有抗腫瘤效應(yīng)，因此，上述結(jié)果提示P5CS的存在可能保護(hù)了肝癌細(xì)胞免于藥物誘導(dǎo)的鐵死亡，賦予了HCC 腫瘤耐藥能力。這也是國內(nèi)外首次將脯氨酸代謝與腫瘤鐵死亡聯(lián)系起來。

脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生增多和細(xì)胞抗氧化作用的缺失是出現(xiàn)鐵死亡的兩個核心機(jī)制，我們進(jìn)一步探索了P5CS 與以上兩種機(jī)制的相關(guān)性。細(xì)胞內(nèi)乙酰輔酶A 在乙酰輔酶A 羧化酶的作用下合成多不飽和脂肪酸（PUFA），游離PUFA 經(jīng)ACSL4 和LPCAT3 兩步催化結(jié)合磷脂（PL），形成PUFA-PL 并參與構(gòu)成膜脂質(zhì)雙分子層。然而，PUFA 具有易于過氧化的特點(diǎn)，因此當(dāng)細(xì)胞內(nèi)LOX-15 增多時，PUFAPL 就會被過氧化為含有過氧自由基的PUFA-PLOOH，對細(xì)胞各類膜結(jié)構(gòu)造成氧化損傷［3］。因此，ACSL4、LPCAT3 和LOX-15 通常被認(rèn)為是鐵死亡中調(diào)控脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵基因。除了以上脂質(zhì)過氧化物的異常產(chǎn)生外，以SLC7A11-GSH-GPX4 為核心的抗氧化功能缺失同樣是鐵死亡的特征［12］。合成GSH 所需三種底物氨基酸之一的半胱氨酸，主要由通道蛋白SLC7A11 逆向轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞；進(jìn)一步合成的GSH 在GPX4 催化下氧化為氧化型谷胱甘肽（GSSG），同時為細(xì)胞提供抗氧化當(dāng)量。因此，SLC7A11 的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)功能、GSH 的合成以及GPX4的催化功能是細(xì)胞抵抗鐵死亡的最主要因素［12-13］。本研究發(fā)現(xiàn)，抑制P5CS 并不能影響肝癌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化關(guān)鍵基因ACSL4、LPCAT3 和LOX-15 的表達(dá)，但能顯著降低SLC7A11 及GPX4 的蛋白含量，表明P5CS 并不能影響鐵死亡的起始過程，而是通過增強(qiáng)抗氧化能力抑制了細(xì)胞鐵死亡。為了進(jìn)一步明確P5CS 發(fā)揮抗氧化能力的靶點(diǎn)，我們對比了使用Erastin 或RSL-3 后，肝癌細(xì)胞鐵死亡的情況。結(jié)果顯示，兩種鐵死亡誘導(dǎo)劑均能誘導(dǎo)缺乏P5CS的肝癌細(xì)胞鐵死亡，但使用RSL-3 后細(xì)胞活性降低更為顯著、細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物蓄積更為明顯，表明P5CS 主要通過維持GPX4 含量阻止了肝癌細(xì)胞鐵死亡。

綜上所述，相比于癌旁組織，HCC 組織中P5CS表達(dá)升高。P5CS 可抑制Li-7 及Huh-7 細(xì)胞的鐵死亡，其機(jī)制可能為P5CS 抑制細(xì)胞內(nèi)GPX4 表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的鐵死亡。