姜靈路，茍?zhí)鹛穑ㄍㄓ冕t(yī)療三六三醫(yī)院檢驗(yàn)科，成都 610041）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是蛋氨酸和半胱氨酸代謝的重要中間產(chǎn)物，隨著我國經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人民生活質(zhì)量改善，各類代謝性疾病增多，導(dǎo)致Hcy無法降解而在體內(nèi)聚集，這引起了臨床對(duì)Hcy水平的關(guān)注[1]。Hcy水平受某些藥物[2]、維生素及葉酸水平、飲食、性別年齡等因素影響[3]，導(dǎo)致不同人群的Hcy水平不同。目前我國各實(shí)驗(yàn)室多以廠家提供的試劑說明書為參考區(qū)間，尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[4]，雖然已有部分地區(qū)建立了適合當(dāng)?shù)氐腍cy參考區(qū)間，但缺乏針對(duì)四川西部地區(qū)藏族人群Hcy參考區(qū)間的研究。該地區(qū)由于地理環(huán)境特殊，居民生活、飲食習(xí)慣與現(xiàn)有的研究對(duì)象存在差異，這些差異是否會(huì)影響該地區(qū)Hcy水平未見報(bào)道，故本研究旨在通過分析該地區(qū)健康藏族人群的Hcy水平，探討其與性別、年齡的關(guān)系，建立適合該人群的參考區(qū)間，為臨床相關(guān)疾病的診斷及預(yù)后提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2022年1～12月在三六三醫(yī)院體檢的表觀健康藏族成年人2 668例為研究對(duì)象。其中男性1 326例，女性1 342例，年齡18～90歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①四川西部地區(qū)居住時(shí)間≥1年；②年齡≥18歲；③藏族；④體檢篩查合格的健康者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有明確惡性腫瘤及心腦血管疾病、嚴(yán)重肝腎疾病及靜脈血栓疾病、全身炎癥性疾病、糖尿病和高血壓病史者；②妊娠或哺乳期女性；③半年內(nèi)有過維生素B6，葉酸等影響Hcy代謝的藥物使用史；④半年內(nèi)有手術(shù)史或輸血史；⑤腹部彩超等影像學(xué)異常者。

1.2 儀器與試劑 貝克曼庫爾特AU5800全自動(dòng)生化分析儀，浙江夸克Hcy試劑盒（酶循環(huán)法），使用配套校準(zhǔn)品。

1.3 方法 采集受試者空腹肘前靜脈血3ml，3 000r/min離心7min，去掉脂血、嚴(yán)重黃疸和溶血標(biāo)本，在室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)在控的前提下，3h內(nèi)完成Hcy的檢測(cè)。因Hcy低濃度結(jié)果無明確臨床意義，故以P95作為單側(cè)95%CI計(jì)算參考范圍，按照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（clinical and laboratory standards institute，CLSI）頒布的EP28-A3c文件要求，以D/R法去除離群值后，計(jì)算不同年齡段的參考區(qū)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。選擇Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間比較，單因素方差分析進(jìn)行多組間比較。非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)(M)和四分位距(IQR)表示，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間比較，Kruskal-WallisH檢驗(yàn)進(jìn)行多組間比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗(yàn)及不同性別間Hcy水平比較 見表1。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)可知，Hcy數(shù)據(jù)呈正偏態(tài)分布(S=0.946，K=1.55)，各個(gè)年齡段成年男性Hcy水平均高于女性（U=3 759.00～32 576.00），且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表1 不同性別間Hcy水平比較 [M（IQR）μmol/L]

2.2 不同年齡組間Hcy水平比較 見表2，圖1。男性Hcy水平在60～70歲和＞70歲組之間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝5.571，P＜0.05），其他年齡組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.180,P=0.284）。女性Hcy水平在30～40歲，40～50歲間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=13.116,P=0.171），其他年齡組之間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝26.388，P＜0.05）。無論男性還是女性，Hcy水平在50歲以后升高比較明顯。

圖1 Hcy水平隨年齡變化趨勢(shì)

表2 不同年齡段Hcy參考區(qū)間比較

2.3 Hcy參考區(qū)間建立及驗(yàn)證 將差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的年齡組數(shù)據(jù)合并后，得到不同性別及不同年齡組間的參考區(qū)間見表3。根據(jù)我國2012年發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證[5]，選擇2023年1～3月在四川大學(xué)華西醫(yī)院西藏成辦分院體檢的表觀健康藏族男性60例（18～60，60～70和＞70歲年齡組各20例)，女性100例（18～30，30～50，50～60，60～70和＞70歲年齡組各20例）進(jìn)行Hcy的檢測(cè)。各年齡組檢測(cè)結(jié)果超出參考區(qū)間的均少于2名，通過驗(yàn)證。

表3 四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群Hcy參考區(qū)間[M（IQR），μmol/L]

3 討論

同型半胱氨酸（Hcy）是蛋白質(zhì)代謝過程中的降解產(chǎn)物，游離狀態(tài)很少，大部分與蛋白質(zhì)以結(jié)合物形式存在，統(tǒng)稱為總Hcy[6]。一般來說，人體內(nèi)的Hcy含量很低，當(dāng)機(jī)體新陳代謝出現(xiàn)障礙時(shí)，Hcy因無法降解而在體內(nèi)聚集，造成血液中Hcy含量增加。高Hcy會(huì)損傷血管壁，造成動(dòng)脈粥樣硬化，導(dǎo)致頸動(dòng)脈狹窄及斑塊形成，與高血壓和心腦血管疾病有密切關(guān)系[1,7]。目前尚無Hcy參考區(qū)間的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，且其水平易受性別、年齡、飲食、營養(yǎng)、環(huán)境及遺傳基因的影響，具有區(qū)域性差異，因此，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立適宜本地區(qū)的Hcy參考值范圍。

我們研究發(fā)現(xiàn)，各個(gè)年齡段的成年男性Hcy水平均高于女性（表1，圖1）。這與其他地區(qū)[8-14]的研究結(jié)果一致，這可能與Hcy代謝路徑有關(guān)。正常情況下，Hcy在酶、維生素B和葉酸的作用下參與硫基和甲基的轉(zhuǎn)化，并降解為半胱氨酸，轉(zhuǎn)變?yōu)椴糠值鞍踪|(zhì)[15]。當(dāng)葉酸和維生素B缺乏時(shí)，Hcy合成甲硫氨酸受阻，其在體內(nèi)的水平升高，Hcy濃度與葉酸、維生素B的濃度呈負(fù)相關(guān)[16]。有研究表明，健康成年女性葉酸及維生素濃度高于男性，且部分男性吸煙、喝酒等不良生活習(xí)慣可能影響Hcy代謝，這可能導(dǎo)致同一年齡段男性Hcy水平高于女性[17]。

本研究顯示，四川西部地區(qū)藏族成人無論男女，Hcy水平總體隨著年齡的增加而升高，且在50歲以后升高較明顯（表2，圖1），這與其他地區(qū)[8-14]的研究結(jié)果一致。這可能是因?yàn)殡S著年齡增長(zhǎng)，肝腎功能逐漸下降，蛋氨酸循環(huán)異常，Hcy代謝酶活性下降，Hcy降解減少所致。同時(shí)，中老年人腸道吸收功能不佳，食欲降低造成營養(yǎng)缺乏，使體內(nèi)葉酸及維生素B含量下降，從而導(dǎo)致Hcy濃度增加[18]。因此，有必要建立不同年齡段的Hcy參考區(qū)間。本研究還顯示，四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群Hcy參考區(qū)間較四川德陽[11]地區(qū)偏低，這可能與四川西部地區(qū)高海拔和藏族人群高蛋白飲食為主有關(guān)，較新的Meta分析研究顯示，高海拔地區(qū)人群Hcy水平較低海拔地區(qū)低[19]，且富含維生素C、高纖維、高蛋白飲食習(xí)慣人群Hcy水平通常較低[20]。

本研究使用的試劑說明書提供的Hcy參考區(qū)間是0～15μmol/L，但本研究結(jié)果顯示男性參考區(qū)間均高于15μmol/L，女性除70歲以上人群，其他年齡組均低于15μmol/L，且所得結(jié)果均通過驗(yàn)證，由此可知不應(yīng)完全根據(jù)試劑說明書建立參考區(qū)間。但本研究還存在一些局限性：①本研究暫未能覆蓋兒童等特殊人群，因此未建立四川西部地區(qū)藏族兒童的Hcy參考區(qū)間；②本研究暫未納入四川西部地區(qū)漢族人群，因此未將四川西部藏族人群與漢族人群水平進(jìn)行比較。后續(xù)我們將擴(kuò)大樣本量和年齡范圍，區(qū)分研究對(duì)象的民族，深度分析四川不同地區(qū)、不同民族人群的Hcy水平。

總之，四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群Hcy水平受性別、年齡和地域等因素影響，本研究建立了適宜該人群的Hcy參考區(qū)間，以期為心腦血管疾病的輔助診斷、預(yù)后評(píng)估等提供更為精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。