丁常根，秦凱星，馮 平

（ 榆林學(xué)院，陜西 榆林 719000 ）

佳米驢是我國著名的中型驢品種，主要分布于榆林市佳縣、米脂縣以及綏德縣一帶[1]。近年來，驢寄生蟲病對驢養(yǎng)殖的影響日漸突出，其寄生蟲種類繁多，且不同地區(qū)、不同年齡段的驢感染情況也各有不同。國外驢消化道感染馬副蛔蟲及梨形蟲病較嚴(yán)重，其次為圓線蟲。有調(diào)查指出，埃塞俄比亞的馬副蛔蟲感染率較高，達(dá)到96%，馬副蛔蟲達(dá)到40%[2]；巴西圣保羅梨形蟲感染率較高，其中泰勒蟲感染率為73.68%，駑巴貝斯蟲為93.2%[3]；羅馬尼亞圓線蟲屬感染較為突出，達(dá)到74%[4]?？追爆幍萚5]在研究驢寄生蟲時(shí)發(fā)現(xiàn)了新種三齒線蟲（Triodontophorus）和新種盅口屬線蟲（Cyathostomum）等多種線蟲。周婉麗[6]調(diào)查馬、驢、騾體內(nèi)寄生蟲時(shí)共發(fā)現(xiàn)62種寄生蟲，線蟲種類最多，占82.26%（51/62），其次是蜘蛛昆蟲，占11.29%（7/62），吸蟲和絳蟲最少，各占3.23%（2/62）。楊軍威等[7]發(fā)現(xiàn)，馬副蛔蟲感染葉城縣驢的感染率為17%左右。王時(shí)偉等[8]對塔里木盆地的60頭驢胃腸道寄生蟲進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)胃腸道寄生蟲感染率高達(dá)100%，均為混合感染，且感染3種及以上的最多，達(dá)到了95%，其中圓線屬占100%。因此，需加強(qiáng)對寄生蟲病學(xué)的深入研究，并在臨床中采取綜合防治措施，降低寄生蟲病帶給動(dòng)物的危害以及動(dòng)物因寄生蟲病導(dǎo)致死亡的比例[9]。基于此，為了解佳米驢消化道內(nèi)寄生蟲病的感染情況，本試驗(yàn)對米脂縣某驢場內(nèi)佳米驢消化道常見寄生蟲病病原進(jìn)行了調(diào)查和種屬的鑒定、歸類，檢測、鑒定其常見寄生蟲優(yōu)勢種蟲、感染率及感染強(qiáng)度等，以期為降低寄生蟲病在佳米驢消化道的流行和發(fā)生提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器與試劑

BA400Digital 生物顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）、BCD-209S/E 冰箱（海信容聲（廣東）冰箱限公司）；載玻片、燒杯、鑷子、標(biāo)本袋、電子天平等。

氯化鈉（批號(hào)為20100324）購自天津市瑞金特化學(xué)品有限公司；氫氧化鈉（批號(hào)為20190104）購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.1.2 樣品采集

隨機(jī)采取米脂縣某驢場佳米驢新鮮糞便樣品30 g 左右，將所采的樣品放入干凈透明的一次性封口袋中進(jìn)行標(biāo)記編號(hào)，總計(jì)采集了32份佳米驢糞便，其中成年和幼年佳米驢各16份。采回后進(jìn)行顯微鏡蟲卵檢查，未檢查完的保存在4 ℃冷藏室中待檢。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 飽和食鹽水漂浮法

取少量佳米驢糞便樣品，將其置于干凈的青霉素小瓶內(nèi)，加入適量飽和食鹽水，用鑷子將糞便搗碎，攪拌均勻。之后加入少量飽和食鹽水使液面形成半球形，用小鑷子夾去上清液雜質(zhì)。靜置15～20 min 后，用干凈載玻片輕微蘸取上清液液面，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。

觀察時(shí)應(yīng)按照“弓”字形逐個(gè)觀察，避免漏掉或重復(fù)。觀察寄生蟲時(shí)，應(yīng)該通過其內(nèi)部形態(tài)特征，辨別其種類，并測定其長度、寬度。對于觀察到寄生蟲卵的樣本放回4 ℃冰箱中保存，然后進(jìn)行重點(diǎn)觀察[10]。

1.2.2 離心沉淀法

取糞便樣品約5 g，加入清水10～15 mL，攪拌均勻，用紗布將其過濾到15 mL 離心管內(nèi)，2 000 r/min 離心2 min。倒去上層液體，再加清水，用吸管吹打均勻后再離心，重復(fù)2～3 次，直到清液清亮為止。倒掉上層液體，留下沉淀物2倍的液體量，用吸管將剩下的沉淀物吹打均勻，取1滴滴到載玻片上，在顯微鏡下觀察[11]。

1.2.3 蟲卵計(jì)數(shù)方法

本試驗(yàn)采用斯陶爾氏法進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)：在自行標(biāo)記為56、60 mL兩個(gè)刻度的小三角燒瓶中加入56 mL 0.4%氫氧化鈉水溶液，再加入4 g待檢糞便樣品，使液面與60 mL處平齊；再加10個(gè)小玻璃珠，蓋上橡皮塞，充分振蕩，使糞便完全破碎混勻，之后使用吸管吸取0.15 mL 糞汁滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下進(jìn)行蟲卵的計(jì)數(shù)。

計(jì)數(shù)時(shí)要按照“弓”字形逐個(gè)視野計(jì)數(shù)，以免漏掉或者重復(fù)計(jì)算，將觀察后所得到的蟲卵數(shù)乘以100，即為1 g 糞便中含有的卵囊。為使試驗(yàn)數(shù)據(jù)更加精確，本試驗(yàn)將每份糞便樣品檢查3 個(gè)玻片，將3 個(gè)玻片上卵囊數(shù)平均后乘以100作為每克糞便中所含的卵囊數(shù)（OPG）值[12]。

1.2.4 蟲卵鑒定方法

顯微鏡下觀察蟲卵的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，依據(jù)蟲卵的形態(tài)、大小、顏色等形態(tài)特點(diǎn)，參照文獻(xiàn)[13]進(jìn)行種類鑒定。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行差異性分析，LSD法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 佳米驢寄生蟲檢出情況

檢測結(jié)果顯示，32份佳米驢糞便樣本中檢出其消化道存在3種寄生蟲感染：馬圓線蟲、毛細(xì)線蟲和馬副蛔蟲。佳米驢消化道寄生蟲蟲卵鏡檢結(jié)果見圖1，3種寄生蟲的基本形態(tài)見表1。

2.2 佳米驢消化道寄生蟲感染率

通過對蟲卵進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)佳米驢消化道內(nèi)主要有馬圓線蟲、毛細(xì)線蟲和馬副蛔蟲3 種寄生蟲，總感染率達(dá)到100%。其中，18 份樣品存在混合感染，混合感染率為56.25%，混合感染的種類最多為3種。成年和幼年佳米驢馬圓線蟲感染率均較高。

2.3 佳米驢消化道不同寄生蟲感染率（見表2）

由表2可知，佳米驢馬圓線蟲、毛細(xì)線蟲和馬副蛔蟲感染率分別為56.25%、46.88%和50.00%。成年佳米驢3 種寄生蟲的感染率均顯著高于幼年（P＜0.05）。

2.4 佳米驢消化道不同寄生蟲感染強(qiáng)度（見圖2）

圖2 佳米驢消化道寄生蟲感染強(qiáng)度Fig.2 Infection intensity of different parasites in alimentary canal of Jiami donkey

由圖2可知，成年佳米驢馬副蛔蟲、毛細(xì)線蟲、馬圓線蟲OPG值分別為266、234、634個(gè)/g；幼年佳米驢馬副蛔蟲、毛細(xì)線蟲、馬圓線蟲OPG 值分別為299、170、571 個(gè)/g。成年佳米驢和幼年佳米驢馬圓線蟲感染強(qiáng)度均較強(qiáng)。

3 討論

本研究采集了32頭成年和幼年佳米驢糞便進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，所有樣本均檢出寄生蟲，說明佳米驢消化道內(nèi)寄生蟲感染情況比較嚴(yán)重，應(yīng)引起廣泛關(guān)注。

李斌等[15]研究發(fā)現(xiàn)，馬圓線蟲、毛細(xì)線蟲、馬副蛔蟲為南疆地區(qū)驢消化道的優(yōu)勢蟲種。卜艷珍等[16]對河南省34 頭驢的體內(nèi)圓線蟲種類進(jìn)行了調(diào)查與分析，共發(fā)現(xiàn)了22種圓線蟲，總感染率為100%；且感染病例中大多數(shù)是多種圓線蟲混合感染，同一頭驢腸道中混合感染的寄生蟲種類最多可達(dá)15種。本試驗(yàn)共發(fā)現(xiàn)1種圓線蟲（馬圓線蟲），其感染率為56.25%，佳米驢消化道內(nèi)也只有馬圓線蟲與毛細(xì)線蟲和馬副蛔蟲的混合感染，未出現(xiàn)圓線蟲之間的混合感染，與卜艷珍等[16]的結(jié)果有所不同。卡麗比努爾·爾肯[17]調(diào)查了南疆254 頭驢的糞樣，發(fā)現(xiàn)驢消化道感染的寄生蟲有毛細(xì)線蟲、球蟲、馬圓線蟲和馬副蛔蟲，其中馬圓線蟲的感染率和感染強(qiáng)度均較強(qiáng)。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的寄生蟲有馬圓線蟲、毛細(xì)線蟲和馬副蛔蟲，成年佳米驢和幼年佳米驢的馬圓線蟲感染率和感染強(qiáng)度均較強(qiáng)，與卡麗比努爾·爾肯等[17]的結(jié)果非常相似。本研究中，成年佳米驢馬副蛔蟲比幼年佳米驢更易感，與趙璐等[18]的調(diào)查結(jié)果相反。本試驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)球蟲，與卡麗比努爾·爾肯等[17]的結(jié)果不同。造成這些結(jié)果差異的原因可能是地理位置不同，也有可能是本試驗(yàn)樣品數(shù)較少，無法更加全面地觀察寄生蟲的感染情況。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的3 種寄生蟲中，馬圓線蟲蟲卵不需要中間宿主，在外界環(huán)境下發(fā)育為感染性第三期幼蟲，之后經(jīng)口感染宿主；毛細(xì)線蟲蟲卵中間宿主為蚯蚓，佳米驢吞食含第二期幼蟲的蚯蚓后被感染，蟲體在其體內(nèi)逐漸發(fā)育為成蟲；馬副蛔蟲蟲卵也不需要中間宿主，在外界環(huán)境下發(fā)育為感染性幼蟲，再經(jīng)口感染。由于不同蟲卵感染途徑不同，必須采取綜合的預(yù)防策略，對不同蟲種采取不同的防治措施。針對馬圓線蟲的感染，應(yīng)采用抗線蟲藥品，對驢舍內(nèi)馬圓線蟲進(jìn)行定期驅(qū)蟲；針對毛細(xì)線蟲的感染，應(yīng)搞好驢舍的衛(wèi)生管理，及時(shí)清除糞便并進(jìn)行發(fā)酵處理以殺滅蟲卵，感染比較嚴(yán)重的地區(qū)可進(jìn)行預(yù)防性驅(qū)蟲；針對馬副蛔蟲的感染，應(yīng)確保草料、飲水等衛(wèi)生，糞便堆積發(fā)酵，定期消毒，以減少驢消化道內(nèi)寄生蟲感染的危害。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，佳米驢消化道內(nèi)存在包括馬圓線蟲、毛細(xì)線蟲和馬副蛔蟲等3種寄生蟲感染，無論是成年佳米驢還是幼年佳米驢，馬圓線蟲的感染率均最高（成年佳米驢感染率為75.00%，幼年佳米驢感染率為37.50%），毛細(xì)線蟲的感染率均最低（成年佳米驢感染率為62.50%，幼年佳米驢感染率為31.25%）；成年佳米驢和幼年佳米驢馬圓線蟲感染強(qiáng)度均最強(qiáng)（成年佳米驢為634個(gè)/g，幼年佳米驢為571個(gè)/g）。因此，養(yǎng)殖過程中應(yīng)重視預(yù)防馬圓線蟲感染，定期開展驅(qū)蟲，從而降低馬圓線蟲對佳米驢的危害。