李健劉義勇胡志強(qiáng)杜忠偉王旭王鑫

(1.延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院/國(guó)家食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系延吉綜合試驗(yàn)站，吉林 龍井 133400；2.梨樹縣森林病蟲害防治中心，吉林 四平 136500)

白囊耙齒菌(Irpexlacteus)又稱白耙齒菌、白囊孔菌，分類學(xué)上隸屬于擔(dān)子菌亞門(Basid-iomycetes)層菌綱(Hymenomycetes)非褶菌目(A-phyllophorales)多孔菌科(Polyporaceae)耙齒菌屬(Irpex Fr.)[1]。白囊耙齒菌在我國(guó)吉林、黑龍江、河北、江西、山西、四川、云南、西藏等地均有分布[2]。白囊耙齒菌是一種常見的木腐真菌，主要生長(zhǎng)在枯枝立木、闊葉樹倒木上，子實(shí)體上有密集的絨毛，形態(tài)有時(shí)平伏至反卷，有時(shí)覆瓦狀疊生邊緣翻卷形成屋檐狀的菌蓋，新鮮時(shí)乳白色至微黃色，有韌性軟革質(zhì)，具有獨(dú)特的淡香味，干時(shí)變?yōu)闇\黃色至淺咖色，收縮硬革質(zhì)，香味消失[3]。

白囊耙齒菌作為一種藥用真菌，其多糖已經(jīng)被開發(fā)成藥品，用于治療腎小球腎炎所致的各種癥狀[4]。近年來，有學(xué)者對(duì)白囊耙齒菌菌絲生長(zhǎng)的條件進(jìn)行了研究，除了固體培養(yǎng)外[5]，還有液體發(fā)酵培養(yǎng)[6]，也有學(xué)者嘗試了白囊耙齒菌的栽培[7]。白囊耙齒菌除了作為藥用真菌外，在工農(nóng)業(yè)方面和治理環(huán)境污染方面也有很好的應(yīng)用前景。白囊耙齒菌可用來降解園林綠化樹木枝條[8]，生物預(yù)處理玉米桿[9]，可以更好地被牛羊等牲畜消化吸收[10]。白囊耙齒菌可以用來處理廢水[11]，處理含有色素廢水時(shí)具有很好的脫色和解毒效果[12]，也可以分解土壤中不能被迅速降解的有機(jī)物[13]。本試驗(yàn)通過對(duì)白囊耙齒菌人工馴化栽培，篩選最佳培養(yǎng)基配方，解決野生資源不斷減少，供不應(yīng)求的問題，以期提高白囊耙齒菌人工栽培的產(chǎn)量與質(zhì)量，為今后工廠化栽培白囊耙齒菌奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株子實(shí)體采自汪清縣仲坪鄉(xiāng)，將子實(shí)體在無菌條件下進(jìn)行組織分離，經(jīng)PDA培養(yǎng)基純化后獲得白囊耙齒菌菌株，保藏在延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所實(shí)驗(yàn)室。

1.2 制作母種

改良PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，瓊脂粉20g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g、水1000mL。

稱取馬鈴薯200g，去皮切塊，將馬鈴薯切塊在鍋中用水1000mL煮爛，用紗布過濾，留取過濾液，棄去馬鈴薯塊，濾液在鍋中繼續(xù)加熱，加入瓊脂粉20g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g，攪拌均勻，待瓊脂粉融化后加水定容至1000mL即可將培養(yǎng)液灌裝到20mm×200mm玻璃試管中，灌裝至試管高度1/4即可塞上棉塞，在高溫高壓滅菌鍋中121℃滅菌30min后擺放斜面，待培養(yǎng)基凝固冷卻后在潔凈工作臺(tái)中接入白囊耙齒菌菌種，將接種后的母種置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃避光培養(yǎng)，觀察菌絲復(fù)活情況及長(zhǎng)勢(shì)。

1.3 制作原種

原種培養(yǎng)基：二級(jí)菌專用枝條90%，雜木屑7.8%，麥麩2%，白糖0.1%，石膏粉0.1%。

將二級(jí)菌專用枝條用水泡透后按照比例與雜木屑、麥麩、白糖、石膏粉加水?dāng)嚢杈鶆颍蛊浜吭?0%左右即可裝入二級(jí)菌袋中，在袋底裝入一層雜木屑、麥麩、白糖和石膏粉混合的輔料，裝入二級(jí)菌專用枝條，枝條要豎直緊密裝入，在袋口再裝入1層輔料后蓋上無棉蓋體，在高溫高壓滅菌鍋中121℃滅菌120min，待培養(yǎng)基冷卻后在潔凈工作臺(tái)中接入白囊耙齒菌母種，將接種后的原種置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃避光培養(yǎng)，觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)。

1.4 制作栽培種

培養(yǎng)基1：雜木屑54%，玉米芯29%，麥麩10%，黃豆粉5%，石膏1%，白糖1%。培養(yǎng)基2：棉籽殼78%，玉米芯10%，麥麩10%，玉米粉1%，生石灰0.5%，白糖0.5%。培養(yǎng)基3：雜木屑70%，麥麩15%，玉米芯14%，石膏1%。培養(yǎng)基4：玉米芯88%，麥麩10%，生石灰1%，白糖0.5%，玉米粉0.5%。培養(yǎng)基5：雜木屑54%，玉米秸稈29%，麥麩10%，黃豆粉5%，石膏1%，白糖1%。培養(yǎng)基6：雜木屑86.5%，麥麩10%，豆粉2%，石膏粉1%，石灰粉0.5%。

將上述6種配方栽培種培養(yǎng)基分別加水充分?jǐn)嚢杈鶆?，使其含水量?0%左右，用手緊握培養(yǎng)料有水滴落為宜。用裝袋機(jī)裝入17cm×36cm×0.004cm聚乙烯栽培袋中，每袋裝干料0.75kg，每個(gè)配方100袋，在高溫高壓滅菌鍋中121℃滅菌120min，待培養(yǎng)基冷卻后在潔凈工作臺(tái)中接入白囊耙齒菌原種，將接種后的栽培種置于培養(yǎng)室中，發(fā)菌初期溫度28～30℃，避光培養(yǎng)，空氣濕度65%以下，勤通風(fēng)。初期6～8d，檢驗(yàn)菌袋的污染情況，隔離污染的菌袋，對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行潔凈化管理，8d后保持溫度在25～30℃，直至菌絲長(zhǎng)滿菌袋，并記錄6種配方白囊耙齒菌菌絲滿袋時(shí)間。

1.5 栽培方法

1.5.1 場(chǎng)地消毒

在白囊耙齒菌栽培袋進(jìn)入場(chǎng)地前，將溫室封閉進(jìn)行噴霧消毒和熏蒸消毒。用高濃度(0.1%～1%)克霉靈對(duì)溫室四壁、地面和網(wǎng)格架噴霧進(jìn)行重點(diǎn)消殺，用低濃度(0.02%～0.05%)克霉靈噴霧進(jìn)行空間殺菌降塵。將菇寶點(diǎn)燃產(chǎn)生煙霧進(jìn)行熏蒸，能夠有效殺死栽培環(huán)境中的雜菌和害蟲、害螨，凈化栽培環(huán)境，不僅能收到事半功倍的效果，而且可以在整個(gè)出菇期不用或少用農(nóng)藥，生產(chǎn)安全的食用菌。

1.5.2 開口方式

白囊耙齒菌人工馴化栽培選用溫室網(wǎng)格架式臥袋栽培，待栽培袋下地5d后菌絲恢復(fù)潔白選擇打開接種口，敞口方式出菇，在原基形成前將敞開的栽培袋用橡皮筋系上，保證透氣即可，防止雜菌污染。并記錄6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌原基形成時(shí)間和子實(shí)體形成時(shí)間。

1.5.3 出菇管理

待開口3d后開口處菌絲恢復(fù)潔白開始澆水，保持環(huán)境濕度在65%左右，溫度保持在22～26℃，勤通風(fēng)。出現(xiàn)原基后去掉橡皮筋，將栽培袋接種口敞開，加大澆水量，將溫度保持在22～26℃，空氣濕度保持在85%左右，CO2濃度保持在400ppm以下，光照保持在800lx左右，并勤通風(fēng)。白囊耙齒菌屬好氧菌，子實(shí)體生長(zhǎng)期間通風(fēng)不良易造成子實(shí)體團(tuán)狀，影響產(chǎn)品質(zhì)量。白囊耙齒菌整個(gè)生產(chǎn)過程應(yīng)保持環(huán)境清潔，出菇期應(yīng)防止高溫高濕，避免雜菌污染。

1.5.4 采收分析

待6種配方白囊耙齒菌菌袋開口處長(zhǎng)出約2～3cm的白色突起，且白色突起上長(zhǎng)出絨毛狀子實(shí)層時(shí)可以采收，采收后稱量子實(shí)體鮮重，放在晾曬架晾干后再次稱量子實(shí)體干重，并計(jì)算干濕比、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率等，之后放在通風(fēng)陰涼處保存。采用Excel 2017進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，SPSS 25采用鄧肯分析法進(jìn)行方差和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 白囊耙齒菌栽培記錄

通過對(duì)6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌各個(gè)階段進(jìn)行記錄，從表1可以看出，6種配方在接種后滿袋時(shí)間相差較多，培養(yǎng)基1和培養(yǎng)基4相差最多為16d，白囊耙齒菌菌絲在培養(yǎng)基4上生長(zhǎng)最快。6種配方在開口后形成原基時(shí)間相差較少，培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基4相差最多為8d，培養(yǎng)基4雖然菌絲生長(zhǎng)最快，但形成原基最慢，培養(yǎng)基2菌絲生長(zhǎng)緩慢，但形成原基最快。6種配方在開口后形成子實(shí)體時(shí)間相差較少，培養(yǎng)基4和培養(yǎng)基6相差最多為8d，培養(yǎng)基6最先形成子實(shí)體。

表1 白囊耙齒菌栽培記錄

2.2 白囊耙齒菌原基

從圖1可以看出，6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌均形成原基，菌袋開口處培養(yǎng)基表面灰白色小突起為白囊耙齒菌原基。培養(yǎng)基2形成原基最早，形成的原基顏色更白，為乳白色，原基也更密集。培養(yǎng)基1和培養(yǎng)基5在形成原基時(shí)間上相差很少，原基顏色很接近，為灰白色。培養(yǎng)基3和培養(yǎng)基6在形成原基時(shí)間上相差很少，原基顏色也很接近，為黃白色。培養(yǎng)基4形成原基最慢，原基顏色為灰白色。

圖1 白囊耙齒菌原基

2.3 白囊耙齒菌子實(shí)體

從圖2可以看出，6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌均形成子實(shí)體，菌袋開口處培養(yǎng)基表面褐色2cm左右突起為白囊耙齒菌子實(shí)體層。培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基5在形成子實(shí)體時(shí)間上相差很少，但培養(yǎng)基5子實(shí)體層最厚，且子實(shí)體大小較大。培養(yǎng)基3和培養(yǎng)基6在形成子實(shí)體時(shí)間上相差很少，且子實(shí)體層厚度和子實(shí)體大小相差不大。培養(yǎng)基6最先形成子實(shí)體，子實(shí)體大小最大，培養(yǎng)基4最后形成子實(shí)體，子實(shí)體層最薄，子實(shí)體大小最小。

2.4 白囊耙齒菌產(chǎn)量

對(duì)6種不同配方培養(yǎng)基栽培白囊耙齒菌進(jìn)行2次采摘測(cè)產(chǎn)，從表2可以看出，配方1、配方2和配方3白囊耙齒菌子實(shí)體每袋平均產(chǎn)量、干濕比和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均相差不大。配方4白囊耙齒菌子實(shí)體每袋平均鮮重為85.83g，每袋平均干重為25.89g，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為11.44%，均為最低。配方5和配方6白囊耙齒菌子實(shí)體每袋平均產(chǎn)量、干濕比和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率相差不大，但配方6白囊耙齒菌子實(shí)體每袋平均鮮重最重為109.89g，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高為14.65%。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)利用對(duì)6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌進(jìn)行比較試驗(yàn)，結(jié)果6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌均能形成原基，形成子實(shí)體，但在接種后滿袋時(shí)間、開口后形成原基、子實(shí)體時(shí)間和平均產(chǎn)量有所差異。培養(yǎng)基1和培養(yǎng)基5在滿袋、形成原基和子實(shí)體時(shí)間上相差很少，培養(yǎng)基5平均產(chǎn)量略高于培養(yǎng)基1。培養(yǎng)基3和培養(yǎng)基6在滿袋、形成原基和子實(shí)體時(shí)間上相差很少，培養(yǎng)基6平均產(chǎn)量略高于培養(yǎng)基3。培養(yǎng)基2形成原基最早，且形成的原基顏色更白，更密集，表明白囊耙齒菌菌絲對(duì)棉籽殼利用率較高。培養(yǎng)基4在接種后最先長(zhǎng)滿菌袋，但形成原基最慢，最后形成子實(shí)體，平均產(chǎn)量最低，表明白囊耙齒菌菌絲對(duì)玉米芯利用率較低，也可能是玉米芯顆粒較大，含水量較低，導(dǎo)致原基形成緩慢。培養(yǎng)基6最先形成子實(shí)體，平均產(chǎn)量最高，表明白囊耙齒菌菌絲對(duì)木屑利用率較高，菌絲體能夠更好地利用木質(zhì)素維持生長(zhǎng)發(fā)育，符合白囊耙齒菌為木腐菌的特性，與于萍等[5]研究結(jié)果一致。綜合各種因素，在日后白囊耙齒菌栽培中可選用培養(yǎng)基3，玉米芯資源豐富，可以部分替代雜木屑，保護(hù)環(huán)境，降低生產(chǎn)成本，且培養(yǎng)基3在滿袋、形成原基和子實(shí)體時(shí)間上，平均產(chǎn)量上均屬于較高水平。白囊耙齒菌人工栽培使用培養(yǎng)基3時(shí)由于配方含有玉米芯，在栽培種裝袋時(shí)要提前用水泡透玉米芯，在滅菌時(shí)要延長(zhǎng)時(shí)間滅菌透徹，否則玉米芯易受雜菌污染，在出菇管理階段要注意開口大容易在澆水時(shí)積水，要少澆勤澆，高溫高濕易導(dǎo)致雜菌污染率高，要勤通風(fēng)降溫，出菇后期易有蟲害，要及時(shí)采摘，掛黃板除蟲，才能保證白囊耙齒菌人工栽培的產(chǎn)量和質(zhì)量。