倪未，陳海港，劉曉莉，于凌云，李偉，洪孝友，劉毅輝*，朱新平*

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510380；2.上海海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306)

低眼巨鯰(Pangasianodonhypophthalmus)隸屬于鲇形目(Siluriformes)魚(yú)芒鯰科(Pangasiidae)魚(yú)芒鯰屬(Pangasianodon)，俗稱(chēng)巴沙魚(yú)(英文名Basa)，是東南亞重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種[1]。其自然分布在東南亞湄公河流域，常見(jiàn)于湄公河下游，成魚(yú)主要生活在湄公河中游。巴沙魚(yú)原指博氏巨鯰(PangasiusbocourtiSauvage)，在2000年以后，外形相似并與博氏巨鯰同屬的低眼巨鯰人工繁殖技術(shù)獲得突破[2]，由于其在生長(zhǎng)速度、耐低氧性、抗逆性、抗病力、單位面積產(chǎn)量和親本懷卵量等方面具有優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)逐漸取代博氏巨鯰成為越南主要養(yǎng)殖和出口的水產(chǎn)品種。越南政府為了巴沙魚(yú)出口品牌的延續(xù)性，從2010年12月31日起出臺(tái)政策，規(guī)定可把低眼巨鯰產(chǎn)品標(biāo)示為“巴沙魚(yú)”。至此，巴沙魚(yú)除了博氏巨鯰外還包括低眼巨鯰，目前，中國(guó)養(yǎng)殖的巴沙魚(yú)絕大多數(shù)為低眼巨鯰。

低眼巨鯰生長(zhǎng)性能優(yōu)越，產(chǎn)量約為450 t/hm2，是一種低投入、高動(dòng)物蛋白產(chǎn)出的優(yōu)秀養(yǎng)殖品種。越南是低眼巨鯰第一大養(yǎng)殖和出口國(guó)，年產(chǎn)超過(guò)125萬(wàn)t，2017年其產(chǎn)量占全球低眼巨鯰總產(chǎn)量的50%以上，低眼巨鯰主要銷(xiāo)往美國(guó)、中國(guó)和歐盟，其中40%以上是在美國(guó)和中國(guó)市場(chǎng)消費(fèi)。自2017年起，中國(guó)每年低眼巨鯰進(jìn)口量超過(guò)30萬(wàn)t，中國(guó)市場(chǎng)以4.2億美元的年進(jìn)口量成為低眼巨鯰全球第一大消費(fèi)市場(chǎng)，已超越美國(guó)成為越南最重要的低眼巨鯰市場(chǎng)。在市場(chǎng)引導(dǎo)下，中國(guó)一些企業(yè)通過(guò)引種，在海南、廣東和廣西開(kāi)展了小規(guī)模的苗種生產(chǎn)和成魚(yú)養(yǎng)殖。目前，中國(guó)低眼巨鯰養(yǎng)殖尚處于起步階段，對(duì)低眼巨鯰的生物學(xué)特性還不是很熟悉，因此，有必要研究低眼巨鯰胚胎發(fā)育和仔稚魚(yú)的生長(zhǎng)規(guī)律，以推動(dòng)低眼巨鯰苗種生產(chǎn)乃至養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)在中國(guó)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用低眼巨鯰親魚(yú)取自廣東省佛山三水白金水產(chǎn)種業(yè)有限公司，試驗(yàn)地點(diǎn)在珠江水產(chǎn)研究所肇慶高要科研基地。親魚(yú)年齡為4～9冬齡，雄魚(yú)4冬齡性成熟，可擠出精液，雌魚(yú)5冬齡性成熟。雄魚(yú)體型較長(zhǎng)，雌魚(yú)體型短粗，雌、雄魚(yú)個(gè)體質(zhì)量差異不明顯，親魚(yú)體質(zhì)量為4.0～8.0 kg。

1.2 方法

1.2.1 受精卵獲得及孵化 人工繁殖試驗(yàn)在2021年6月25日進(jìn)行。催產(chǎn)藥物和劑量為1 000 IU/kg的絨毛膜促性腺激素(HCG)+12 μg/kg的促黃體生成素釋放激素類(lèi)似物(LHRH-A2)+8 mg/kg的地歐酮(DOM)。雌魚(yú)采用胸鰭基部?jī)纱巫⑸涞姆椒?，第一次劑量為總量?/3，兩次注射間隔6 h。雄魚(yú)進(jìn)行一次注射，只注射DOM和LHRH-A2，劑量為雌魚(yú)注射總量的1/2。水溫為(30±0.5)℃時(shí)，效應(yīng)時(shí)間為15～17 h。采用干法授精，將受精卵均勻附著在尼龍網(wǎng)片上，把網(wǎng)片浸入300 L的水槽中，微流水并充氣孵化，直至孵出魚(yú)苗。

1.2.2 胚胎發(fā)育觀(guān)察 取少量剛受精的受精卵置于培養(yǎng)皿內(nèi)，在解剖鏡(桂光xtl400)下進(jìn)行胚胎發(fā)育觀(guān)察。水溫控制在(30±0.5)℃，每次取受精卵50粒以上，培養(yǎng)皿中的水每隔2 h更換一次，從產(chǎn)卵受精后，每隔15 min對(duì)同一批受精卵觀(guān)察和記錄發(fā)育時(shí)序并進(jìn)行拍照。胚胎發(fā)育分期方法參考洪孝友等[3]的分期標(biāo)準(zhǔn)，胚胎發(fā)育期劃分以個(gè)體發(fā)育數(shù)達(dá)50%為準(zhǔn)。

1.2.3 溫度對(duì)胚胎發(fā)育的影響 利用寧波江南儀器廠(chǎng)生產(chǎn)的4臺(tái)生化培養(yǎng)箱(SPM-50)，用經(jīng)過(guò)計(jì)量的水銀溫度計(jì)標(biāo)定，分別設(shè)置(24±0.5)、(27±0.5)、(30±0.5)、(33±0.5)℃ 4個(gè)孵化溫度。參考陳昆慈等[4]的方法，孵化用培養(yǎng)皿直徑為12 cm，每個(gè)培養(yǎng)皿可容納100粒受精卵。每個(gè)溫度下設(shè)置3個(gè)平行。定時(shí)觀(guān)察、記錄胚胎發(fā)育的各個(gè)階段，并統(tǒng)計(jì)孵化率及仔魚(yú)出膜時(shí)間和數(shù)量。

1.2.4 鹽度對(duì)胚胎發(fā)育的影響 利用生化培養(yǎng)箱，孵化溫度為(27.0±0.5)℃，分別設(shè)置0、2、4、6、8、10、11、12等8個(gè)鹽度。每個(gè)孵化培養(yǎng)皿可容納100粒受精卵，每個(gè)鹽度下設(shè)置3個(gè)平行。在同一溫度下定時(shí)觀(guān)察、記錄胚胎發(fā)育的各個(gè)階段，并統(tǒng)計(jì)孵化率。胚胎發(fā)育結(jié)束后，記錄不同鹽度下出膜仔魚(yú)游動(dòng)活力。

1.2.5 仔稚魚(yú)發(fā)育觀(guān)察 在室內(nèi)玻璃鋼水槽中進(jìn)行仔魚(yú)培育。玻璃鋼水槽規(guī)格為3.5 m×0.75 m×0.65 m，培育密度為29 411 尾/m3。早期仔魚(yú)投喂豐年蟲(chóng)，10 d后投喂甲魚(yú)粉料，每日3次。稚魚(yú)期后被移入室外水泥池(7 m×3 m×1.5 m)培育，培育密度為472 尾/m3，期間投喂甲魚(yú)粉料，25 d左右開(kāi)始投喂膨化飼料，每日3次。自低眼巨鯰孵化出膜后，每天隨機(jī)取正常個(gè)體10尾以上，在解剖鏡(桂光xtl400)下進(jìn)行觀(guān)察。使用游標(biāo)卡尺(Ahead 10-15475)測(cè)量全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高、卵黃囊長(zhǎng)徑和短徑等指標(biāo)，用電子天平(上海力辰Y(jié)P20001B)稱(chēng)量魚(yú)體質(zhì)量，用相機(jī)(Nikon D90)記錄仔稚魚(yú)發(fā)育過(guò)程中的變化情況。

1.2.6 繁殖效率評(píng)價(jià)

受精率=原腸中期活卵數(shù)/產(chǎn)卵總數(shù)×100%，

(1)

孵化率=孵出仔魚(yú)苗數(shù)/受精卵總數(shù)×100%。

(2)

1.2.7 生長(zhǎng)模型的確定 用線(xiàn)性回歸方法推算低眼巨鯰早期生長(zhǎng)的線(xiàn)性回歸方程。

參照Blaxter等[5]的方法，計(jì)算卵黃囊體積(V，mm3)，即

V=4/3π×R/2×(r/2)2。

(3)

式中：R為卵黃囊長(zhǎng)徑(mm)；r為卵黃囊短徑(mm)。

y=ax3+bx2+cx+d。

(4)

式中：x為生長(zhǎng)時(shí)間(h或d)；y為全長(zhǎng)(mm)或卵黃囊體積(mm3)；a、b、c、d為常數(shù)，且a≠0。

1.3 數(shù)據(jù)處理

胚胎和仔稚魚(yú)發(fā)育圖片采用Photoshop CS 6軟件進(jìn)行編輯。各項(xiàng)形態(tài)學(xué)指標(biāo)數(shù)據(jù)使用GraphPad Prism 8進(jìn)行分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±S.D.)表示，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 低眼巨鯰胚胎發(fā)育

低眼巨鯰魚(yú)卵透明，遇水有較強(qiáng)的黏性，為黏性卵，卵徑為(1.60±0.23)mm。水溫為(30±0.5)℃時(shí)，受精卵22 h開(kāi)始孵化出膜，28～30 h全部孵化出膜。低眼巨鯰的發(fā)育期分為受精卵期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經(jīng)胚期、器官形成期和孵出期7個(gè)階段。各發(fā)育時(shí)期的形態(tài)特征見(jiàn)圖1。

A—受精卵；B—胚盤(pán)隆起；C—2細(xì)胞期；D—4 細(xì)胞期；E—8細(xì)胞期；F—16細(xì)胞期；G—32細(xì)胞期；H—64細(xì)胞期；I—多細(xì)胞期；J—囊胚早期；K—囊胚中期；L—囊胚晚期；M—原腸早期；N—原腸中期；O—原腸晚期；P—神經(jīng)胚；Q—胚孔封閉期；R—肌節(jié)期；S—眼基出現(xiàn)期；T—尾芽期；U—肌肉效應(yīng)期；V—心跳期；W—出膜仔魚(yú)。A—fertilized egg；B—blastodisc formation；C—2 cell stage；D—4 cell stage；E—8 cell stage；F—16 cell stage；G—32 cell stage；H—64 cell stage；I—multi cell stage；J—high blastula stage；K—middle blastula stage；L—low blastula stage；M—early gastrula stage；N—middle gastrula stage；O—late gastrula stage；P—neural；Q—closure of blastopore；R—myomere stage；S—optic vesicle stage；T—tail bud stage；U—muscular effect stage；V—heart beating stage；W—newly hatched larva.圖1 低眼巨鯰胚胎發(fā)育過(guò)程Fig.1 Embryonic development of Pangasianodon hypophthalmus

2.1.1 受精卵期(0～20 min) 受精完成后形成受精卵(圖1A)，受精卵為黏性卵，卵母細(xì)胞受精后，原生質(zhì)向動(dòng)物極移動(dòng)與卵黃分離，在動(dòng)物極可以觀(guān)察到隆起的胚盤(pán)結(jié)構(gòu)(圖1B)。

2.1.2 卵裂期(20 min～3 h) 受精卵發(fā)育20 min后開(kāi)始分裂，受精40 min后胚盤(pán)在動(dòng)物極分裂成兩個(gè)大小相等的細(xì)胞(圖1C)；隨后兩細(xì)胞也進(jìn)行分裂，受精50 min后形成4個(gè)大小相似的細(xì)胞，進(jìn)入4細(xì)胞期(圖1D)；受精1 h后形成8個(gè)大小略有不同的細(xì)胞，進(jìn)入8細(xì)胞期(圖1E)，受精1 h 15 min后進(jìn)入16細(xì)胞期(圖1F)；16細(xì)胞期后，細(xì)胞不斷分裂，分裂方式相對(duì)不規(guī)則，受精1 h 30 min后進(jìn)入32細(xì)胞期(圖1G)；受精1 h 45 min后進(jìn)入64細(xì)胞期(圖1H)；隨后不斷分裂，受精2 h 15 min后進(jìn)入多細(xì)胞期(圖1I)，細(xì)胞數(shù)量越來(lái)越多，細(xì)胞間間隔從清晰可見(jiàn)到逐漸模糊，開(kāi)始進(jìn)入囊胚期。

2.1.3 囊胚期(3 h～4 h 45 min) 進(jìn)入囊胚期后細(xì)胞不斷分裂，細(xì)胞界限模糊，受精3 h后，在動(dòng)物極分裂的細(xì)胞不斷聚集，形成帽狀囊胚，進(jìn)入囊胚早期(圖1J)；隨后受精卵在囊胚期不斷分裂，動(dòng)物極囊胚的細(xì)胞團(tuán)不斷發(fā)育，逐漸向扁平發(fā)展，受精3 h 30 min后進(jìn)入囊胚中期(圖1K)；隨后囊胚期突起部分向四周擴(kuò)展，受精4 h后進(jìn)入囊胚晚期(圖1L)。

2.1.4 原腸胚期(4 h 45 min～7 h) 受精4 h 45 min后，胚盤(pán)繼續(xù)向植物極方向下包，形成胚環(huán)的雛形，達(dá)到原腸胚早期(圖1M)；受精5 h 55 min后，胚層細(xì)胞下包約整個(gè)卵黃的1/2，胚環(huán)更加明顯，進(jìn)入原腸中期(圖1N)；受精6 h 30 min后，胚層下包覆蓋卵黃囊約4/5，胚盾拉長(zhǎng)，進(jìn)入原腸末期(圖1O)。

2.1.5 神經(jīng)胚期(7 h～9 h 15 min) 受精7 h 后，植物極的大部分被胚層包圍，進(jìn)入神經(jīng)胚期(圖1P)；隨后外胚層不斷分化，受精8 h后，外胚層形成神經(jīng)板與卵黃栓，隨著外包不斷進(jìn)行，卵黃被完全包裹，進(jìn)入胚孔封閉期(圖1Q)。

2.1.6 器官形成期(9 h 15 min～22 h 15 min) 受精卵在胚孔封閉期后繼續(xù)發(fā)育進(jìn)入器官形成期，受精9 h 55 min后，背部體節(jié)開(kāi)始出現(xiàn)肌節(jié)(圖1R)；受精11 h 30 min后，在腦的兩側(cè)出現(xiàn)圓形泡狀結(jié)構(gòu)，形成眼原基(圖1S)；受精14 h 35 min后，尾芽發(fā)生明顯分化，逐漸離開(kāi)卵黃囊(圖1T)；受精17 h 45 min后，肌肉發(fā)生間歇性收縮，進(jìn)入肌肉效應(yīng)期(圖1U)；受精20 h 10 min后，胚胎心臟持續(xù)跳動(dòng)，可見(jiàn)血液流動(dòng)，胚體在卵膜內(nèi)不停轉(zhuǎn)動(dòng)，器官發(fā)育完全(圖1V)。

2.1.7 孵出期(22 h 15 min～28 h) 受精22 h 15 min后，卵膜開(kāi)始溶解破裂，胚胎陸續(xù)脫離卵膜，出膜仔魚(yú)無(wú)色素，卵黃囊透明位于魚(yú)體下方，魚(yú)鰭發(fā)育不完全，可以在水中間歇性游動(dòng)(圖1W)。具體胚胎發(fā)育時(shí)序見(jiàn)表1。

表1 低眼巨鯰胚胎發(fā)育時(shí)序

2.2 溫度對(duì)低眼巨鯰胚胎發(fā)育的影響

從表2可見(jiàn)：隨水溫升高，孵化率呈先升高后降低的趨勢(shì)，最適孵化溫度為(27～30)℃，溫度過(guò)高或過(guò)低均會(huì)嚴(yán)重降低孵化率；溫度對(duì)低眼巨鯰的出膜時(shí)間也具有顯著影響(P<0.05)，隨著水溫升高，仔魚(yú)出膜時(shí)間逐漸縮短，33 ℃時(shí)出膜時(shí)間最短(18 h 40 min)，孵化率為36.32%，且該溫度下會(huì)出現(xiàn)畸形(畸形率為7.12%)；24 ℃時(shí)孵化時(shí)間最長(zhǎng)(36 h 30 min)，孵化率為 24.42%，且該溫度下許多胚胎停滯在肌節(jié)形成期。

表2 溫度對(duì)低眼巨鯰胚胎孵化率的影響

2.3 鹽度對(duì)低眼巨鯰胚胎發(fā)育的影響

從表3可見(jiàn)：隨鹽度升高，低眼巨鯰孵化率呈下降趨勢(shì)，水體鹽度為0時(shí)孵化率最高(54.33%)；鹽度為10時(shí)孵化率僅為14.67%；鹽度為10以上時(shí)低眼巨鯰全部死亡，無(wú)法進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育。

表3 鹽度對(duì)低眼巨鯰胚胎孵化率的影響

2.4 低眼巨鯰仔稚魚(yú)發(fā)育

初孵仔魚(yú)在自然溫度(水溫27～32 ℃)下，經(jīng)歷前期仔魚(yú)(0～2 d)、后期仔魚(yú)(3～16 d)和稚魚(yú)(17～29 d)，隨后進(jìn)入幼魚(yú)期(30 d)(圖2、表4)，剛孵化出仔魚(yú)和1日齡仔魚(yú)的形態(tài)指標(biāo)均統(tǒng)計(jì)20尾，其他日齡仔魚(yú)、稚魚(yú)和幼魚(yú)的形態(tài)指標(biāo)均統(tǒng)計(jì)10尾。

表4 低眼巨鯰仔稚魚(yú)發(fā)育過(guò)程形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)

A—1日齡仔魚(yú)；B—2日齡仔魚(yú)；C—3日齡仔魚(yú)；D—4日齡仔魚(yú)；E—5日齡仔魚(yú)；F—6日齡仔魚(yú)；G—7日齡仔魚(yú)；H—8日齡仔魚(yú)；I—9日齡仔魚(yú)；J—11日齡仔魚(yú)；K—12日齡仔魚(yú)；L—13日齡仔魚(yú)；M—15日齡仔魚(yú)；N—17日齡稚魚(yú)；O—20日齡稚魚(yú)；P—23日齡稚魚(yú)；Q—28日齡稚魚(yú)；R—30日齡幼魚(yú)。A—1 dph(day post hatching)larva；B—2 dph larva；C—3 dph larva；D—4 dph larva；E—5 dph larva；F—6 dph larva；G—7 dph larva；H—8 dph larva；I—9 dph larva；J—11 dph larva；K—12 dph larva；L—13 dph larva；M—15 dph larva；N—17 dph juvenile；O—20 dph juvenile；P—23 dph juvenile；Q—28 dph juvenile；R—30 dph juvenile.圖2 低眼巨鯰仔稚魚(yú)形態(tài)發(fā)育Fig.2 Morphological development of larvae and juvenile of Pangasianodon hypohthalmus

2.4.1 前期仔魚(yú) 剛出膜仔魚(yú)全長(zhǎng)為(4.38± 0.23)mm，卵黃囊呈橢圓形，長(zhǎng)徑為(2.01±0.65)mm，短徑為(1.18±0.31)mm，卵黃囊體積為(1.34±0.69)mm3。卵黃囊長(zhǎng)徑長(zhǎng)約為仔魚(yú)全長(zhǎng)的1/4。聽(tīng)囊內(nèi)2個(gè)耳石清晰可見(jiàn)，卵黃膜邊緣上有色素累積，腸道細(xì)直，肛門(mén)封閉，晶狀體為黑色球狀(圖1W)。

1日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(6.64±0.57)mm，長(zhǎng)徑為(1.04±0.21)mm，短徑為(0.42±0.24)mm，卵黃囊體積為(0.25±0.18)mm3。鰓原基明顯，口裂清晰，晶狀體黑色素增多，卵黃囊繼續(xù)縮小，腸道持續(xù)發(fā)育(圖2A)。

2日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(7.05±0.46)mm，卵黃囊體積為(0.08±0.04)mm3，腦腔擴(kuò)大，腦部開(kāi)始發(fā)育，自腦部延伸出脊索神經(jīng)。圍心腔擴(kuò)大，心臟跳動(dòng)清晰可見(jiàn)。此時(shí)，仔魚(yú)已會(huì)簡(jiǎn)單游動(dòng)，有躲避能力，出現(xiàn)相互攻擊的現(xiàn)象(圖2B)。

2.4.2 后期仔魚(yú) 3日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(7.84±0.47)mm，口裂為(0.64±0.11)mm，仔魚(yú)卵黃囊已經(jīng)被完全吸收，開(kāi)始轉(zhuǎn)化為外源性營(yíng)養(yǎng)，仔魚(yú)可以自行攝食，可見(jiàn)脂鰭與臀鰭原基，尾鰭開(kāi)始分化，下鰭骨開(kāi)始發(fā)育，出現(xiàn)兩對(duì)須(圖2C)。

4日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(9.50±1.32)mm，口裂為(0.85±0.14)mm，腸道內(nèi)充滿(mǎn)食物，仔魚(yú)可以完全獨(dú)立攝食，背鰭開(kāi)始發(fā)育，體側(cè)上下出現(xiàn)兩道黑色淡紋，眼球呈黑色(圖2D)。

5日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(10.36±1.1)mm，口裂為(0.85±0.10)mm，食物充滿(mǎn)腸道，鰾變大為橢圓形，魚(yú)體側(cè)上下星狀黑色色素增多，鰓部發(fā)育呈紅色(圖2E)。

6日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(10.30±0.74)mm，口裂為(0.87±0.15)mm，鰾拉長(zhǎng)，脂鰭繼續(xù)發(fā)育，尾鰭鰭條出現(xiàn)(圖2F)。

7日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(11.69±1.69)mm，背鰭的棘條開(kāi)始發(fā)育，消化系統(tǒng)出現(xiàn)明顯分化，晶狀體清晰可見(jiàn)，血液等循環(huán)系統(tǒng)逐步發(fā)育(圖2G)。

8日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(12.10±1.33)mm，頭部、鰓蓋的色素細(xì)胞不斷聚集，心臟及全身血液、血管清晰可見(jiàn)，背鰭繼續(xù)發(fā)育，尾鰭、臀鰭鰭條發(fā)育明顯，胸鰭、腹鰭開(kāi)始出現(xiàn)(圖2H)。

9日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(11.64±1.88)mm，頭部鰓蓋及第背鰭色素細(xì)胞不斷增加，背鰭、脂鰭、臀鰭、尾鰭、腹鰭和胸鰭發(fā)育成形(圖2I)。

10日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(11.40±1.21)mm。

11日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(13.40±1.42)mm，魚(yú)體加寬，顱骨加厚不再透明，頰部、頦部色素細(xì)胞繼續(xù)增多，肌肉組織清晰可見(jiàn)(圖2J)。

15日齡仔魚(yú)，全長(zhǎng)為(14.84±2.57)mm，仔魚(yú)各個(gè)魚(yú)鰭發(fā)育完全，生長(zhǎng)發(fā)育差異明顯，消化循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育完整，進(jìn)入稚魚(yú)期(圖2M)。

2.4.3 稚魚(yú)期 17日齡稚魚(yú)，全長(zhǎng)為(16.38±2.13)mm，體呈黑色，各鰭鰭條形成，背鰭、尾鰭和臀鰭邊緣呈黑色，頭部、腹部呈青色，與成魚(yú)類(lèi)似(圖2N)。

20日齡稚魚(yú)，全長(zhǎng)為(21.18±0.95)mm，側(cè)線(xiàn)上下出現(xiàn)明顯的白色條紋，背鰭鰭棘繼續(xù)發(fā)育，脂鰭不斷延長(zhǎng)(圖2O)。

23日齡稚魚(yú)，全長(zhǎng)為(34.66±1.98)mm，稚魚(yú)發(fā)育逐漸完善，側(cè)線(xiàn)上下有兩道明顯的斑紋，鰭條呈黑色，與成魚(yú)一致(圖2P)。

28日齡稚魚(yú)，全長(zhǎng)為(49.43±9.68)mm，稚魚(yú)發(fā)育完全，體色與成魚(yú)一致，側(cè)線(xiàn)上下兩道條紋呈淺灰色，臀鰭和尾鰭上均有深黑色的斑紋。開(kāi)始進(jìn)入幼魚(yú)期(圖2Q)。

2.4.4 幼魚(yú)期 30日齡幼魚(yú)，全長(zhǎng)為(53.65±11.27)mm，體質(zhì)量為(1.4±0.3)g，進(jìn)入幼魚(yú)期，具成魚(yú)形態(tài)(圖2R)。

2.4.5 卵黃囊體積變化 根據(jù)式(3)計(jì)算低眼巨鯰卵黃囊的體積(mm3)，再擬合得到卵黃囊體積(V)與出膜后時(shí)間(x)的回歸方程：

V=0.000 7x2-0.057 5x+1.166 4 (R2=0.967 6)。

從圖3可見(jiàn)，低眼巨鯰卵黃囊前期吸收較快，30 h時(shí)已經(jīng)被吸收80%多，30 h以后吸收速度緩慢，72 h后卵黃囊才完全消失。

圖3 低眼巨鯰仔魚(yú)卵黃囊體積的變化Fig.3 Volume changes of yolk sac in Pangasianodon hypophthalmus larvae

2.4.6 仔稚魚(yú)生長(zhǎng)模型 對(duì)低眼巨鯰仔稚魚(yú)的全長(zhǎng)(L)和日齡(x)進(jìn)行回歸分析，得到仔稚魚(yú)生長(zhǎng)模型方程：

L=0.002x3-0.019 3x2+0.493 7x+

6.647 5(R2=0.978 5)。

從圖4可見(jiàn)，低眼巨鯰仔魚(yú)前期生長(zhǎng)較慢，培育20 d 后開(kāi)始增速，30 d 時(shí)全長(zhǎng)就可達(dá)到(53.65±11.27)mm。

圖4 低眼巨鯰的全長(zhǎng)生長(zhǎng)曲線(xiàn)Fig.4 Total length of Pangasianodon hypophthalmus

3 討論

3.1 低眼巨鯰胚胎發(fā)育特性

低眼巨鯰懷卵量大，胚胎發(fā)育快。一尾雌魚(yú)懷卵量約為30萬(wàn)粒，其卵粒小，卵徑僅為(1.60±0.23)mm，與同屬的蘇氏圓腹魚(yú)芒(Pangasiussutchi)卵徑為1.20～1.80 mm[7]、細(xì)尾巨鯰(Pangasiusnasutus)卵徑為1.4～1.6 mm[8]和施氏油鯰(Steindachneridionparahybae)卵徑為(1.90±0.4)mm[9]基本相似。與同目的黃顙魚(yú)(Pelteobagrusfulvidraco)卵徑為2.20 mm[10]和斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)卵徑為4.2～4.5 mm[11]相比，低眼巨鯰卵粒偏小，這與其懷卵量較大的特點(diǎn)是相適應(yīng)的。

低眼巨鯰最佳孵化水溫為 27～30 ℃，溫度越高，胚胎發(fā)育越快，反之越慢。30 ℃時(shí)出膜時(shí)間為 22 h 15 min，27 ℃時(shí)出膜時(shí)間為28 h 15 min，與同屬的蘇式圓腹魚(yú)芒[12]出膜時(shí)間為24 h 18 min的結(jié)果相近。在相近溫度下，四帶小鲃(Puntiustetrazona)[13]出膜需要 24 h，軍曹魚(yú)(Rachycentroncanadum)[14]出膜需要 26 h，翹嘴鱖(Sinipercachuatsi)[15]則需要 38 h。這表明，低眼巨鯰作為熱水性魚(yú)類(lèi)，具有卵徑小、所需孵化水溫高和胚胎發(fā)育時(shí)間短的特點(diǎn)。

鹽度對(duì)魚(yú)類(lèi)的胚胎發(fā)育有較大的影響[16]，適宜的鹽度會(huì)提升胚胎的存活能力及孵化率。低眼巨鯰在鹽度為0時(shí)孵化率最高，在鹽度為2～10時(shí)孵化率逐步降低，鹽度為10以上時(shí)胚胎發(fā)育畸形或無(wú)法正常發(fā)育，這與Farhana等[17]的研究結(jié)果相近。這表明，低眼巨鯰是一種適宜在淡水中生長(zhǎng)發(fā)育的魚(yú)類(lèi)。

3.2 低眼巨鯰仔稚魚(yú)發(fā)育特性

低眼巨鯰仔稚魚(yú)發(fā)育具有明顯的熱水性魚(yú)類(lèi)特點(diǎn)。參照王武[18]提出的分期標(biāo)準(zhǔn)，本研究中根據(jù)低眼巨鯰卵黃囊、體色、鰭條及其他形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，將其胚后發(fā)育劃分為3個(gè)時(shí)期(仔魚(yú)期、稚魚(yú)期和幼魚(yú)期)，其中，仔魚(yú)期和稚魚(yú)期的劃分以各鰭條是否形成為依據(jù)，同時(shí)根據(jù)卵黃囊的吸收情況將仔魚(yú)期劃分為前期仔魚(yú)和后期仔魚(yú)；當(dāng)?shù)脱劬搛T稚魚(yú)發(fā)育完全，體表顏色與成魚(yú)一致，外觀(guān)整體上與成魚(yú)相似時(shí)，表明其進(jìn)入幼魚(yú)期。

本研究中顯示，在水溫為27～32 ℃時(shí)，前期仔魚(yú)孵化后第2天開(kāi)始攝食并有攻擊行為，第3天時(shí)完成卵黃吸收，這表明，低眼巨鯰從內(nèi)源能量依賴(lài)期向外源能量依賴(lài)期的轉(zhuǎn)換只有1 d，這與Morioka等[19]的研究結(jié)果一致。仔魚(yú)在卵黃囊存在期間，從內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)開(kāi)始逐漸轉(zhuǎn)化為外源營(yíng)養(yǎng)，為內(nèi)源和外源營(yíng)養(yǎng)混合期，此階段卵黃囊吸收變化不大，這種現(xiàn)象在其他魚(yú)類(lèi)中也存在。相比而言，鯉形目的四川華鳊(Sinibramataeniatus)[20]卵黃囊完全消耗需要4～5 d，倒 刺 鲃(Spinibarbusdenticulatus)[21]卵黃囊消失則需7 d，而鮭形目的哲羅魚(yú)(Huchotaimen)[22]需要27 d卵黃囊才能完全消耗。低眼巨鯰作為熱水性魚(yú)類(lèi)，其快速吸收卵黃囊并迅速開(kāi)始攝食的營(yíng)養(yǎng)方式，與其生長(zhǎng)環(huán)境相適應(yīng)。這種營(yíng)養(yǎng)方式能夠使其生長(zhǎng)迅速并能較快地適應(yīng)生長(zhǎng)環(huán)境。

本研究中觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，卵黃囊消失進(jìn)入后期仔魚(yú)，后期仔魚(yú)已經(jīng)能完全開(kāi)口攝食，脂鰭和尾鰭首先發(fā)育，隨后臀鰭發(fā)育，最后背鰭、胸鰭和腹鰭依次發(fā)育，最終運(yùn)動(dòng)器官逐步發(fā)育完全，體型逐漸接近幼魚(yú)，器官基本發(fā)育完全，隨后進(jìn)入幼魚(yú)期。幼魚(yú)期與成魚(yú)體型變化不大，體長(zhǎng)、體質(zhì)量在幼魚(yú)期均快速增長(zhǎng)。低眼巨鯰的仔稚魚(yú)發(fā)育模式與黃顙魚(yú)[23]、馬口魚(yú)(Opsariichthysbidens)[24]和胡子鲇(Clariasfuscus)[25]等相近。

3.3 低眼巨鯰生長(zhǎng)特性

低眼巨鯰生長(zhǎng)較快速，屬于快速生長(zhǎng)的魚(yú)類(lèi)。低眼巨鯰早期生長(zhǎng)與黃顙魚(yú)[26]和密斯特黃彩鲇(Mystussp.)[27]等鲇形目魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)模式相近，均呈現(xiàn)出早期生長(zhǎng)緩慢、后期生長(zhǎng)速度加快的模式。本研究中，低眼巨鯰仔稚魚(yú)前期生長(zhǎng)較慢，培育 20 d后開(kāi)始增速，30 d時(shí)全長(zhǎng)幾乎達(dá)到 6 cm。與許多魚(yú)類(lèi)物種相比，如黃顙魚(yú)、密斯特黃彩鲇的仔魚(yú)培育30 d時(shí)全長(zhǎng)僅能達(dá)到 3 cm，低眼巨鯰屬于生長(zhǎng)較快的物種。

本研究中觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，低眼巨鯰仔稚魚(yú)發(fā)育過(guò)程中，低眼巨鯰仔魚(yú)孵化后2～3 d就有明顯的互相殘食行為，這與Morioka等[19]的研究結(jié)果一致。在此階段，仔魚(yú)眼睛完全發(fā)育且黑色素明顯，卵黃迅速減少并被完全吸收，出現(xiàn)牙齒和胡須，游泳能力顯著增強(qiáng)。仔魚(yú)個(gè)體之間能互相攻擊，且發(fā)生殘食的現(xiàn)象，這與仔魚(yú)形態(tài)和器官發(fā)育程度高度吻合。鲇形目魚(yú)類(lèi)天生有互相殘食的習(xí)性[28]，本研究中觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，在高密度、餌料不足及個(gè)體規(guī)格差異較大時(shí)，低眼巨鯰幼體之間殘食更明顯，這與對(duì)其他魚(yú)類(lèi)的研究結(jié)果相似[29]。因此，在苗種培育生產(chǎn)時(shí)，放養(yǎng)密度適當(dāng)，餌料充足，及時(shí)分級(jí)飼養(yǎng)，可提高苗種培育成活率。

4 結(jié)論

1)低眼巨鯰卵為黏性卵，透明，卵徑小。孵化期短，在水溫為(30±0.5)℃ 時(shí)需22 h 15 min孵出。最佳孵化溫度為 27～30 ℃，最適鹽度為0。表明其為典型的熱水性純淡水魚(yú)類(lèi)。

2)低眼巨鯰剛出膜仔魚(yú)小，全長(zhǎng)僅有(4.38± 0.23)mm。初孵仔魚(yú)出膜后第3天卵黃囊消失，出膜后第2天開(kāi)始攝食，并互相殘食。仔魚(yú)前期生長(zhǎng)較慢，20 d后開(kāi)始增速，30 d時(shí)全長(zhǎng)達(dá)到(53.65±11.27)mm，表明其屬于快速生長(zhǎng)的魚(yú)類(lèi)。