袁東芳

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院，山東 濰坊 261061）

飼料的安全和衛(wèi)生狀況直接影響雞群的健康，隨著養(yǎng)雞業(yè)規(guī)?；藴驶l(fā)展，飼料污染問題日益受到養(yǎng)殖者的重視。但受現(xiàn)有認知水平和技術(shù)的局限，飼料的微生物污染現(xiàn)象仍然普遍存在[1]。致病微生物污染飼料是影響飼料質(zhì)量安全的重要因素[2]，微生物污染會使飼料形狀發(fā)生變化，降低雞群的采食量，減緩雞群的生長速度，還會破壞雞體的腸道菌群平衡，致使有害菌損害腸道黏膜發(fā)育，引起雞體免疫功能下降，甚至會導致雞體發(fā)生腹瀉和免疫低下，誘發(fā)雞群發(fā)生疾病，嚴重者直接引起雞只死亡[3]。已有學者和機構(gòu)對飼料原料、動物飼料霉菌毒素的污染現(xiàn)狀作了研究[1-5]，本研究針對采集于濰坊不同地區(qū)的商品肉雞場料袋和料線中480 份飼料樣品的細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌以及黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮含量進行系統(tǒng)分析，闡明料袋和料線中飼料微生物污染與飼料儲存時間、儲存條件及料線管理的關(guān)系，以引起肉雞場對雞飼料質(zhì)量安全的關(guān)注。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗雞場情況 在濰坊高密、寒亭、安丘地區(qū)的3 個肉雞場了解雞場規(guī)模、雞的品種、飼料類型、用料方式、飼料管理、料線管理及是否做過飼料衛(wèi)生監(jiān)測等情況（表1），高密雞場記為1 場、寒亭雞場記為2 場、安丘雞場記為3 場，分別對每個雞場在進雞后的第1 天、第30 天進行料袋和料線中飼料樣品的采集。

表1 雞場基本情況

1.1.2 主要試劑及儀器 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、察氏瓊脂培養(yǎng)基、緩沖蛋白胨水（BPW）、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、氯化鎂孔雀綠（RV）增菌液、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，均購自北京陸橋有限責任公司；AgraQuant 真菌毒素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，購自Romer Labs；DHP-9272B 恒溫培養(yǎng)箱，購自上海一恒科學儀器有限公司；SPX-150B-Z 生化培養(yǎng)箱，購自上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；iDplus Confidence 基質(zhì)輔助激光電離飛行時間質(zhì)譜儀，購自日本島津；Multiskan Fc 酶標分析儀，購自賽默飛世爾科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集及檢測試驗設(shè)計 隨機采樣，每次每場料袋樣品20 份、料線樣品60 份，共計采集樣品480 份；其中對所有樣品均進行細菌、霉菌檢測，料袋樣品再進行霉菌毒素檢測。

1.2.2 樣品的采集及處理 飼料樣品按照GB/T 14699.1[6]標準采集，避免樣品污染。進行細菌、霉菌數(shù)目檢測的樣品按照GB/T 20195-2006[7]標準處理；進行霉菌毒素檢測的樣品按照AgraQuant真菌毒素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的要求處理。

1.2.3 飼料細菌、霉菌數(shù)目的測定 按照GB/T 13093、GB/T 13092、GB 4789.10[8-10]標準檢測飼料中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)和金黃色葡萄球菌；按照GB/T 13091[11]進行沙門氏菌檢測的前期增菌和初步鑒定，利用基質(zhì)輔助激光電離飛行時間質(zhì)譜儀進一步鑒定沙門氏菌。

1.2.4 霉菌毒素含量的測定 利用AgraQuant 真菌毒素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測飼料中黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量。

1.2.5 統(tǒng)計分析 利用SPSS Statistics 19.0 統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)分析，多重比較用LSD 法進行，試驗數(shù)據(jù)用平均值表示，并進行差異性分析。

2 結(jié)果

2.1 飼料中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的檢測

同一雞場同一類同一次樣品中的細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌檢測結(jié)果見表2。分析可知，1 場30 d 料袋樣品中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯高于1 d 料袋樣品；1 d 料袋樣品中沙門氏菌、金黃色葡萄球菌均未檢出，30 d料袋樣品中檢出金黃色葡萄球菌1 CFU/g。30 d料袋樣品2 場細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于1、3場。1、2、3 場30 d 料線樣品中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯高于1 d 料線樣品，并且1 d、30 d 料線樣品中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均明顯高于料袋樣品；2 場1 d、30 d 料線樣品的細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均明顯低于1、3 場。

表2 不同雞場飼料中細菌、霉菌檢測結(jié)果（CFU/g）

2.2 飼料中黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量

同一雞場同一次樣品中的黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量檢測結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，1、3 場30 d 黃曲霉毒素B1、伏馬毒素、嘔吐毒素和玉米赤酶烯酮含量均明顯高于1 d；2 場30 d 樣品中4 種毒素含量與其1 d 樣品無差異；1 d 樣品2 場黃曲霉毒素B1、玉米赤酶烯酮含量明顯低于1、3 場，30 d樣品2、3 場4 種毒素含量均明顯低于1 場，30 d樣品2 場4 種毒素含量均明顯低于3 場。

表3 飼料中霉菌毒素含量

3 討論

目前對肉雞場全價飼料中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)和沙門氏菌含量沒有明確的規(guī)定，但是GB 13078-2017[12]飼料衛(wèi)生標準規(guī)定了飼料原料中細菌總數(shù)要小于2×106CFU/g，霉菌總數(shù)小于2×104CFU/g，飼料中沙門氏菌不得檢出。1、2、3 場料袋飼料細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均符合標準，但料線30 d 樣品細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)均超過此標準；1 場30 d 料袋樣品，1、3 場1 d 料線樣品，3 個場30 d 料線樣品中沙門氏菌均超標；對于細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)沒有超標的樣品，其檢測結(jié)果還是需要引起養(yǎng)殖場的高度注意，因為細菌、霉菌的大量繁殖會分泌多種毒素協(xié)同加劇對畜禽消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等的危害[13]，影響畜禽健康，給畜禽業(yè)造成巨大損失[14]。

1 場30 d 料袋樣品中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯高于1 d 樣品，2、3 場差異不明顯，可能與1場料袋飼料一直在場內(nèi)儲存，沒有經(jīng)過定期衛(wèi)生監(jiān)測，2、3 場飼料是定期運送進場的，未經(jīng)過長時間儲存有關(guān)；2 場30 d 料袋樣品中的細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于3 場，是因為2 場非常重視飼料的管理，飼料儲存在通風良好、不潮濕、不漏雨的倉庫內(nèi)[3,15-16]，定期進行飼料衛(wèi)生監(jiān)測，3 場飼料儲存條件相對較差，儲存環(huán)境潮濕、易結(jié)塊；1、2、3 料線樣品中細菌總數(shù)均明顯高于其料袋中的樣品，由于舍內(nèi)料線清潔消毒不徹底，造成飼料污染，1、2、3 場30 d 料線樣品中細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)分別明顯高于1 d 料線樣品，是由于在養(yǎng)殖過程中料線未定期及時清潔、消毒處理，所以隨著養(yǎng)殖時間的延長，微生物污染更為嚴重；2 場1 d 料線樣品細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于1、3 場，是由于2 場對料線的管理嚴格，上雞前料線清潔消毒徹底，并進行嚴格的飼料管理[15-16]；2 場30 d 料線樣品細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)明顯低于1、3 場，由于1 場飼料已儲存較長時間、飼料本身已被污染，加之養(yǎng)殖期間1、3 場不定期清潔料線，而2 場定期進行飼料衛(wèi)生監(jiān)測，定期清潔料線，從而減少了料線對飼料的污染。

GB 13078-2017 飼料衛(wèi)生標準對飼料中霉菌毒素的含量作了明確規(guī)定，1、2、3 場1 d 樣品中4 種霉菌毒素均不超標，1 場30 d 樣品中4 種霉菌毒素均超標，3 場30 d 樣品中玉米赤酶烯酮含量超標；1 場30 d 樣品中4 種霉菌毒素含量明顯高于1 d，由于飼料貯存時間太久，霉菌大量繁殖，產(chǎn)生大量霉菌毒素；3 場30 d 樣品中4 種霉菌毒素含量明顯高于1 d，由于場區(qū)對飼料管理不重視，飼料儲存在較潮濕的環(huán)境下，在貯存使用過程中，加重了霉菌的污染[3]；2 場1 d 樣品黃曲霉毒素B1、玉米赤酶烯酮含量明顯低于3場，與2 場對飼料管理的高度重視、飼料的儲存條件密切相關(guān)[3,15-16]。

4 結(jié)論

1 場飼料儲存30 d 微生物污染情況比2、3場飼料儲存10 d 嚴重，說明肉雞場飼料儲存時間過久，嚴重增加了微生物對飼料的污染；1、3 場比2 場飼料微生物污染嚴重，說明對飼料管理的重視程度、飼料的儲存條件非常重要，要定期開展飼料衛(wèi)生監(jiān)測，選擇通風良好、不潮濕、不漏雨、不滲水的倉庫儲存，避免飼料受潮發(fā)生霉變；3 個場料線隨著養(yǎng)殖時間的延長，對飼料的污染加重，2 場料線飼料微生物污染情況明顯低于1、3 場，說明在養(yǎng)殖過程中不能忽視料線的管理，定期對料線進行清潔消毒非常重要。