蔣佳麗，周賽楠，董曉莉，張偉，王玉明，唐慶娟*

（1.中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266003）（2.香港理工大學(xué)香港理工大學(xué)應(yīng)用生物與化學(xué)科技學(xué)系，香港 999077）（3.青島市立醫(yī)院，山東青島 266011）

帕金森?。≒arkinson’S Disease，PD）是世界范圍內(nèi)，僅次于阿爾茨海默癥的第二大神經(jīng)退行性疾病。研究表明，帕金森病多發(fā)于老年人，已成為年齡相關(guān)的主要健康問題，發(fā)病率與年齡呈正相關(guān)[1]。PD病理學(xué)的特征是α-突觸核蛋白（Alpha-synuclein，α-syn）聚集形成路易體，沉積在中腦，黑質(zhì)致密部中的多巴胺能神經(jīng)元選擇性喪失[2,3]。德國神經(jīng)解剖學(xué)家Braak在死后帕金森病患者的腸神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)了錯誤折疊而成的α-突觸核蛋白寡聚體，并發(fā)現(xiàn)帕金森病患者是先發(fā)生便秘等胃腸道疾病，而后才出現(xiàn)帕金森病的運(yùn)動障礙[4]。因此，他提出假設(shè)-帕金森病可能起源于腸道。此后，大量臨床研究表明：腸道菌群組成的改變可能與PD的發(fā)病機(jī)制和臨床表型有關(guān)[5]。

1960年代引入的PD治療藥物左旋多巴（L-DOPA）為帕金森病的治療帶來了突破[6]。隨著科學(xué)的發(fā)展，羅氏公司研發(fā)了一種復(fù)方左旋多巴制劑-美多芭（多巴絲肼片）；與單純左旋多巴相比，美多芭療效顯著提高，且副作用明顯減少[7,8]。但是在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，該藥起效緩慢[9]；隨著用藥時間延長，患者會出現(xiàn)劑量依賴、不自主異常動作[10]。因此，尋找聯(lián)合用藥材料，改善其毒副反應(yīng)、提升治療效果，對該病的治療具有重要意義。

紫菜是我國的一種經(jīng)濟(jì)類紅藻，富含蛋白質(zhì)、維生素、多糖等多種營養(yǎng)物質(zhì)，其中紫菜多糖的含量占紫菜干重的20%～40%，是紫菜中含量最高的營養(yǎng)成分[11]。藥理學(xué)研究表明，紫菜多糖具有抗腫瘤活性、抗心腦血管疾病、免疫調(diào)節(jié)活性等多種生理活性[12-14]。Wang等[15]提出，紫菜多糖可對6-羥基多巴胺（6-OHDA）誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用；趙婷婷[16]的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)低濃度紫菜多糖處理的SH-SY5Y細(xì)胞模型，其神經(jīng)保護(hù)作用明顯優(yōu)于模型組；同時，經(jīng)低濃度紫菜多糖干預(yù)的阿爾茨海默癥模型小鼠，其學(xué)習(xí)記憶能力大有提升。除紫菜多糖的相關(guān)研究外，李小平等[17]還發(fā)現(xiàn)，從壇紫菜中提取出的葉黃素對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖具有抑制作用。

Han等[18]研究表明，由于食品成分之間的潛在相互作用，天然食品產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)可能優(yōu)于天然食品中各個成分的作用之和。因此，相較于前文所提到的紫菜多糖、紫菜提取出的葉黃素，紫菜或許能夠起到更加優(yōu)越的神經(jīng)保護(hù)作用。基于上述研究，本實(shí)驗(yàn)旨在探究紫菜聯(lián)合美多芭的抗帕金森作用及其對腸道菌群的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

C57BL/6J小鼠，SPF級，雄性，6周齡，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。飼料購于江蘇南通特洛菲飼料科技有限公司。

1.1.2 原料與試劑

壇紫菜購于福建遠(yuǎn)揚(yáng)藻業(yè)股份有限公司。MPTP購于上海麥克林生化科技有限公司；美多芭（多巴絲肼片）購于上海羅氏制藥有限公司；人白介素-1β（IL-1β）試劑盒購于蘇州卡爾文生物科技有限公司；α-syn抗體購自江蘇親科生物研究中心有限公司；酪氨酸羥化酶（TH）抗體、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體購自武漢賽維爾生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器

NIKON/Ni-E電動熒光顯微鏡，日本尼康公司；脫色搖床，Servicebio；SPARK 10M酶標(biāo)儀，瑞士TECAN；低溫型研磨儀，Servicebio；NovaSeq-6000測序平臺，美國Illumina公司。

1.2 方法

1.2.1 動物飼養(yǎng)及模型建立

將48只小鼠隨機(jī)均分為4組，分別為正常對照組（N）、帕金森模型組（M）、美多芭治療組（L）、紫菜聯(lián)合美多芭治療組（P）；飼喂2周標(biāo)準(zhǔn)棒狀飼料及添加紫菜的飼料，分組及飼料配方如表1所示。與此同時，N組與M組每天灌胃生理鹽水，其他兩組每天灌胃20 mg/kg（按體質(zhì)量計）美多芭。通過一天內(nèi)腹腔注射四次20 mg/kg（按體質(zhì)量計）MPTP，間隔兩小時注射一次，建立急性PD模型[19]；N組腹腔注射生理鹽水，其余組均腹腔注射MPTP。觀察小鼠的精神狀態(tài)、進(jìn)食及排泄情況、行為活動等，記錄小鼠體溫變化、是否出現(xiàn)死亡等情況。最后一次腹腔注射的12 h后，對小鼠進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)；48 h后通過摘眼球取血，脫頸椎處死小鼠。收集相關(guān)的臟器及小鼠腸道內(nèi)容物并保存于-80 ℃以便后續(xù)檢測。PD急性模型建立成功的標(biāo)志：小鼠未出現(xiàn)死亡，表現(xiàn)出類似于PD行動遲緩、運(yùn)動不協(xié)調(diào)、便秘等癥狀。

1.2.2 行為學(xué)檢測

1.2.2.1 小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[20]中所用方法，進(jìn)行爬桿試驗(yàn)。通過讓小鼠在一根垂直鐵桿上由上往下爬，觀察小鼠自身運(yùn)動的協(xié)調(diào)性。將一根長約0.5 m，直徑為1 cm的鐵棒固定在鐵架臺上，并用潔凈的無特殊異味的白色紗布均勻纏繞于鐵棒上，固定好鐵架臺將其放入干凈的塑料容器中。在注射MPTP之前對小鼠進(jìn)行爬桿實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練。訓(xùn)練內(nèi)容：將小鼠從籠中取出，將其頭朝下豎直放置在距離鐵棒底部1/3位置處，讓小鼠自由從上往下爬至鐵架臺底部；然后將小鼠放置在鐵棒距離底部2/3位置處，將小鼠豎直放置，讓其自由從上往下爬至鐵架臺底部；再次將小鼠放置在鐵棒最高處，讓其自由從上往下爬至鐵架臺底部。重復(fù)以上操作三次，訓(xùn)練至小鼠能夠自由從鐵棒最頂部爬至鐵架臺底部為止。

在注射MPTP后對小鼠進(jìn)行爬桿實(shí)驗(yàn)，每只小鼠重復(fù)至少三次以上，記錄小鼠每次從鐵棒頂端到鐵架臺底部的時間，并觀測小鼠步伐情況，若小鼠在爬行過程中出現(xiàn)有往反方向爬行的趨勢，則應(yīng)將小鼠移開鐵棒放置籠內(nèi)休息，之后重新進(jìn)行爬桿實(shí)驗(yàn)。統(tǒng)計小鼠爬桿數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析。

1.2.2.2 小鼠懸掛實(shí)驗(yàn)

握力的檢測同樣也是評價小鼠運(yùn)動協(xié)調(diào)能力的一種常見的檢測手段[20]。將一根細(xì)繩系于兩支豎直放置的鐵棒之間，固定好細(xì)繩。在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)前對小鼠進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，步驟如下：將小鼠自由放置在細(xì)繩中部，使其前爪能夠穩(wěn)定抓住細(xì)繩后松開，讓其自由懸掛在細(xì)繩上，以1 min為懸掛實(shí)驗(yàn)的上限時間，重復(fù)此操作三次以上。

小鼠注射MPTP后，進(jìn)行懸掛實(shí)驗(yàn)，將其自由放置在細(xì)繩中央，讓小鼠前爪緊握住細(xì)繩后松開，記錄在細(xì)繩上懸掛的時間，至少重復(fù)三次以上，統(tǒng)計數(shù)據(jù)并分析。

1.2.3 炎癥因子IL-1β水平檢測

采用ELISA試劑盒檢測各組小鼠血清中IL-1β的水平，在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.2.4 免疫組化分析

每組隨機(jī)選擇3只小鼠，快速取其全腦并置于4%（m/V）多聚甲醛固定液中；取出固定后的腦組織，經(jīng)石蠟包埋處理后，進(jìn)行連續(xù)切割，得到厚度約為20 μm的切片；對制得的切片進(jìn)行脫蠟水化和抗原修復(fù)處理，而后滴加TH抗體，4 ℃孵育過夜；第2天用PBS緩沖液進(jìn)行沖洗，待切片表面的液體晾干后，滴加HRP標(biāo)記的二抗，于室溫孵育50～60 min；PBS緩沖液沖洗后，滴加DAB溶液顯色，復(fù)染細(xì)胞核，脫水封片。利用電動熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，采用IPP6.0圖像分析軟件統(tǒng)計TH陽性細(xì)胞面積。

1.2.5 Western Blot檢測黑質(zhì)中TH、α-syn水平

向4 ℃ PBS緩沖液漂洗后的中腦組織中，加入RIPA蛋白裂解液（含PMSF、磷酸酶抑制劑），利用組織破碎儀（60 Hz，60 s，4次）快速勻漿至充分裂解；將裂解液離心（12 000 r/min，4 ℃，10 min），取上清。采用BCA法測定蛋白濃度。

制備聚丙烯酰胺凝膠體系，依次上樣，進(jìn)行電泳。電泳結(jié)束后，取出膠體，進(jìn)行半干法轉(zhuǎn)膜；將PVDF膜置于5%（V/V）脫脂牛奶中封閉2 h；TBST洗滌后，加入一抗（1:1 000），4 ℃孵育過夜；TBST洗滌后，加入二抗（1:1 000），室溫孵育2 h；TBST洗滌。采用ECL化學(xué)發(fā)光法顯影，使用Image J分析蛋白條帶灰度值。

1.2.6 腸道菌群16S rRNA測序分析

以小鼠結(jié)腸內(nèi)容物為樣本，提取微生物DNA。本項目采用Illumina-NovaSeq-6000平臺對群落DNA片段進(jìn)行雙端（Paired-end）測序。

1.3 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（Mean±SEM）表示，數(shù)據(jù)顯著性分析采用GraphPad（8.3.0）軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠飼養(yǎng)狀態(tài)

飼養(yǎng)初期，小鼠因每天進(jìn)行灌胃，曾出現(xiàn)短期不適應(yīng)，狀態(tài)稍顯不佳，幾天之后狀態(tài)恢復(fù)正常。在攝入受試物的同時，灌胃陽性藥物，兩周后給予小鼠腹腔注射MPTP，小鼠出現(xiàn)行動遲緩、目光呆滯，毛發(fā)缺少光澤，體溫下降，M組中這些癥狀表現(xiàn)尤為明顯。

2.2 行為學(xué)影響

2.2.1 小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)

小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1a所示，由圖1可知，注射MPTP進(jìn)行造模后，M組PD小鼠的爬桿時間顯著多于N組正常小鼠（P＜0.01），運(yùn)動能力顯著減弱。在整個爬桿過程中，除了正常組以外，其余各組中均有部分小鼠出現(xiàn)停滯不前的狀況。經(jīng)美多芭干預(yù)的L組、P組PD小鼠，其運(yùn)動能力強(qiáng)于M組，爬桿速度高于未經(jīng)治療的M組小鼠；此外，P組小鼠運(yùn)動能力更強(qiáng)（P＜0.05）。

圖1 小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.1 Experimental results of mouse behavior

2.2.2 小鼠懸掛實(shí)驗(yàn)

如圖1b所示，相較于N組正常小鼠，M組PD小鼠的懸掛時間顯著減少（P＜0.05），平衡能力減弱。相較于M組PD小鼠，L組、P組小鼠懸掛實(shí)驗(yàn)時間均有所增加，表明經(jīng)美多芭干預(yù)后的PD小鼠，其平衡能力有所增強(qiáng)；尤其是P組，其懸掛時間最長，平衡能力顯著強(qiáng)于M組（P＜0.05）。

2.3 免疫組化分析

TH可催化酪氨酸生成左旋多巴，是合成神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺的關(guān)鍵步驟，因此TH的表達(dá)能較為直觀地反映帕金森病的發(fā)展進(jìn)程[21]。如圖2a所示，N組小鼠黑質(zhì)部位中的TH陽性細(xì)胞排布緊密，數(shù)量最多，呈染色較深的粗條帶狀；M組帕金森小鼠黑質(zhì)部位中的TH陽性細(xì)胞的數(shù)量較對照組顯著減少（P＜0.05），且排布稀疏，染色較淺；給予陽性藥物美多芭進(jìn)行治療后，有增加TH陽性細(xì)胞數(shù)量的趨勢，但并無顯著性；與M組PD小鼠相比，P組顯著增加了PD小鼠中腦黑質(zhì)部位TH陽性細(xì)胞的數(shù)量（P＜0.05），細(xì)胞排布較為緊密，細(xì)胞染色程度也高。結(jié)果表明：紫菜聯(lián)合美多芭的治療方法對神經(jīng)元的保護(hù)作用，優(yōu)于單獨(dú)使用陽性藥物美多芭。

圖2 小鼠腦組織免疫組化結(jié)果Fig.2 Immunohistochemical results of mouse brain tissue

圖3 小鼠黑質(zhì)部位Western Blot結(jié)果Fig.3 Western Blot of the substantianigra of mice

2.4 Western Blot測定黑質(zhì)中α-syn、TH水平

Western Blot結(jié)果表明，M組PD小鼠黑質(zhì)中α-syn含量顯著高于N組正常小鼠（P＜0.05），TH含量低于N組正常小鼠，符合帕金森病人的病理性特征。L組、P組的α-syn含量低于M組，TH含量高于M組，且P組的變化更為顯著（P＜0.05）。綜上可知，紫菜聯(lián)合美多芭治療的效果優(yōu)于單獨(dú)使用陽性藥物美多芭。

2.5 IL-1β水平的檢測

小鼠血清中IL-1β水平如圖4所示。M組的IL-1β含量顯著增加，與N組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.000 1），表明帕金森病會導(dǎo)致小鼠炎癥水平升高；給予陽性藥物美多芭進(jìn)行治療，或給予紫菜進(jìn)行聯(lián)合治療，均能降低PD小鼠血清中IL-1β含量；此外，紫菜聯(lián)合美多芭治療的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用陽性藥物美多芭（P＜0.000 1）。

圖4 小鼠血清炎癥因子IL-1β含量Fig.4 Serum levels of inflammatory cytokines IL-1β in mice

圖5 小鼠腸道菌群門水平的物種組成分析Fig.5 Analysis of phylum level species composition of intestinal microbiota in mice

圖6 小鼠腸道菌群屬水平的物種組成分析Fig.6 Analysis of genus level species composition of intestinal microbiota in mice

2.6 腸道菌群分析

2.6.1 在門水平上的菌群豐度及差異

基于門水平對菌群組成進(jìn)行分析可知，各組中厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidota）和放線菌門（Actinobacteria）為主要優(yōu)勢菌門，其相對豐度之和達(dá)80%以上。與M組相比，P組小鼠腸道中的Firmicutes由44.96%減少到38.08%，Bacteroidota由17.01%增加到50.88%，F(xiàn)irmicutes/Bacteroidota的比值由2.64降低至0.75，降低了71.59%；該結(jié)果表明，紫菜聯(lián)合美多芭的治療對Firmicutes/Bacteroidota有正向調(diào)節(jié)作用，有助于維持腸道穩(wěn)態(tài)；并可以通過增加Bacteroidota，來改善PD小鼠的炎癥水平[22]。Actinobacteria由20.26%減少到1.41%，其趨勢符合PD患者的菌群變化，與Li等[23]的研究一致。

2.6.2 在屬水平上的菌群豐度及差異

在屬水平上，與N組正常小鼠比較，M組PD小鼠中的乳桿菌屬Lactobacillus、與抗炎水平相關(guān)的Muribaculaceae、杜氏桿菌屬Dubosiella的相對豐度分別降低了5.12%、10.06%、6.75%；Coriobacteriaceae_UGG-002、布勞特氏菌Blautia、幽門螺桿菌屬Helicobacter等腸道炎癥相關(guān)菌屬的相對豐度有所升高[24,25]，表明M組小鼠的菌群結(jié)構(gòu)易引起腸道炎癥。

經(jīng)美多芭干預(yù)后，PD小鼠腸道內(nèi)的Muribaculaceae、杜氏桿菌屬Dubosiella、Allobaculum的相對豐度分別升高了6.83%、1.56%、0.89%；Helicobacter的相對豐度降低7.91%。經(jīng)紫菜聯(lián)合美多芭治療后，小鼠腸道內(nèi)Muribaculaceae、杜氏桿菌屬Dubosiella、擬桿菌屬Bacteroides、Allobaculum、阿克曼氏菌屬Akkermansia的相對豐度分別升高10.71%、10.51%、15.83%、2.10%，Coriobacteriaceae_UGG-002、Blautia、Helicobacter的相對豐度分別降低3.59%、3.29%、10.22%。與單獨(dú)服用美多芭相比，紫菜聯(lián)合治療的菌群調(diào)節(jié)作用更佳，有益菌屬相對豐度增加的多，炎癥相關(guān)有害菌屬相對豐度減少的多。

2.6.3 菌群多樣性分析

各組小鼠的Alpha多樣性指數(shù)如圖7a所示。相比于N組正常小鼠，M組PD小鼠的Observed species指數(shù)、Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)均有顯著變化（P＜0.05），表明PD小鼠腸道菌群的豐富度及多樣性均低于正常小鼠；P組小鼠的各項指數(shù)均顯著高于M組PD小鼠（P＜0.01），表明經(jīng)紫菜聯(lián)合治療的小鼠，其腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定程度的改變，菌群的豐富度及多樣性均高于PD小鼠。此外，P組小鼠的菌群豐富度顯著高于L組（P＜0.05），表明相較于單獨(dú)服用美多芭，紫菜聯(lián)合治療調(diào)整PD小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的效果更佳。

圖7 菌群多樣性分析Fig.7 Analysis of bacterial diversity

圖8 LEfSe菌群差異分析Fig.8 LEfSe microbiota difference analysis

韋恩圖可用于統(tǒng)計不同組別共有和獨(dú)有的OTU數(shù)量，由圖7b可知：N組獨(dú)有OTU數(shù)量為3 088個，M組為1 631個，其OTU數(shù)遠(yuǎn)低于N組；L組、P組OTU數(shù)分別為2 634、10 712，均顯著高于M組；值得注意的是，P組OTU數(shù)量為四組中最高，即P組菌群多樣性最高。

在OTU水平，對小鼠腸道菌群進(jìn)行PCoA分析，各組菌群多樣性均有明顯的聚類現(xiàn)象，結(jié)果如圖7c所示。N組與M組樣本能明顯分開；L組、P組的樣本與M組樣本距離較遠(yuǎn)，表明PD小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了較大程度的變化，與M組有顯著差異。此外，與L組相比，P組與M組的距離更遠(yuǎn)，說明在紫菜聯(lián)合美多芭的治療下，PD小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)存在明顯差異。

2.6.4 LEfSe菌群差異分析結(jié)果

不同組中豐度差異顯著的物種如圖所示。結(jié)果顯示，各組小鼠結(jié)腸菌群差異顯著。N組小鼠，以放線菌門Actinobacteria、交替單胞菌目Alteromonadales、Muribaculaceae菌屬等菌群的相對豐度較高；M組PD小鼠，以雙歧桿菌屬Bifidobacterium的相對豐度較高，與Erin等[26]的臨床研究結(jié)果一致。L組小鼠中，脫硫弧菌科Desulfovibrionaceae顯著富集；在P組小鼠中，擬桿菌門Bacteroidetes、瘤胃菌屬Ruminnococcaceae等有益菌顯著富集。

3 討論

本研究采用C57BL/6J小鼠構(gòu)建PD急性模型，經(jīng)過MPTP處理后，小鼠明顯狀態(tài)不佳，行動遲緩、目光呆滯，毛發(fā)缺少光澤，運(yùn)動能力及平衡能力下降。經(jīng)處死后取材、分析得知，M組PD小鼠血清中的炎癥因子IL-1β含量升高，黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元減少，催化自身合成左旋多巴胺的TH含量減少；α-syn含量增加、α-syn異常折疊的幾率顯著增加，表明MPTP造模成功。P組小鼠的運(yùn)動及平衡能力顯著優(yōu)于M組PD小鼠，炎癥水平顯著低于M組，黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量顯著多于M組，TH蛋白表達(dá)量均明顯高于M組，α-syn蛋白表達(dá)量顯著低于M組。此外，P組的上述指標(biāo)也均優(yōu)于L組。綜上所述，紫菜聯(lián)合美多芭治療能夠顯著改善PD小鼠的腦功能，表明紫菜聯(lián)合美多芭的療效顯著，且優(yōu)于單獨(dú)服用美多芭。

由16S rRNA測序結(jié)果可知，M組PD小鼠結(jié)腸內(nèi)菌群OTU數(shù)量顯著減少，結(jié)構(gòu)紊亂，其豐富度與多樣性均低于N組正常小鼠；而紫菜聯(lián)合美多芭治療可以起到明顯的調(diào)節(jié)作用，菌群豐富度與多樣性都有顯著增強(qiáng)。M組中擬桿菌門Bacteroidetes相對豐度低，與Marcus[27]的臨床研究結(jié)果一致；Blautia、Helicobacter等腸道炎癥相關(guān)菌屬的相對豐度高，表明M組小鼠的菌群結(jié)構(gòu)易引起腸道炎癥。P組中，與抗炎水平相關(guān)的Muribaculaceae、Dubosiella、Bacteroides、Allobaculum、Akkermansia的相對豐度升高，提示經(jīng)紫菜聯(lián)合美多芭治療可降低PD小鼠炎癥水平，與實(shí)驗(yàn)中測得的血清中IL-1β水平一致；此外，能夠穩(wěn)定腸道屏障的Ruminnococcaceae也在P組中顯著富集，提示紫菜聯(lián)合美多芭治療可減輕MPTP對小鼠腸屏障的損傷。

多項研究表明，腸道菌群失衡引起的腸道炎癥，最終會導(dǎo)致PD的形成。相關(guān)研究[28-30]提出，腸道內(nèi)的炎癥因子會增加腸道通透性、損傷血腦屏障，加速α-syn雙向運(yùn)輸進(jìn)入大腦的速度，繼而導(dǎo)致腦部α-syn錯誤折疊的開始。Ruth等[31]提出，某些特定的促炎因子不僅會導(dǎo)致胃腸道疾病的發(fā)生，還會進(jìn)一步引起腦部炎癥和多巴胺能神經(jīng)元的死亡，并最終導(dǎo)致帕金森病。

綜上所述，紫菜聯(lián)合美多芭治療能夠顯著調(diào)節(jié)PD小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)，其神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過減少產(chǎn)生促炎因子的病原菌的相對豐度、增加抗炎菌屬的相對豐度，以降低PD小鼠體內(nèi)的炎癥水平，避免腦部α-syn的異常折疊及多巴胺能神經(jīng)元的喪失。

4 結(jié)論

通過本研究發(fā)現(xiàn)帕金森病使得正常小鼠的腸道菌群發(fā)生顯著變化：腸道菌群多樣性及豐富度降低，Lactobacillus、Muribaculaceae、Dubosiella的相對豐度分別降低了5.12%、10.06%、6.75%。紫菜聯(lián)合美多芭干預(yù)PD小鼠后，Muribaculaceae、Dubosiella、Bacteroides、Allobaculum、Akkermansia的相對豐度分別升高10.71%、10.51%、15.83%、2.10%；黑質(zhì)中神經(jīng)元的數(shù)量、TH的表達(dá)量分別增加了46.95%、52.91%，α-syn的表達(dá)量減少了34.56%。

綜上所述，本文探討了紫菜聯(lián)合美多芭的抗帕金森作用及其對腸道菌群的影響。結(jié)果表明，在MPTP誘導(dǎo)的PD小鼠模型中，紫菜聯(lián)合美多芭可調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)，且其抗帕金森作用優(yōu)于單獨(dú)使用美多芭。本文為紫菜的精深加工、功能性食品的開發(fā)提供了一定的理論基礎(chǔ)；同時，為PD的臨床治療提供了新思路。