徐一平，王如霞，周倩，周瑤，湯浩蕾

(江蘇省中江海外進(jìn)出口有限公司，南京 210000)

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)樣品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，宜興宜州化學(xué)制品有限公司)；虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)樣品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥97%，宜興宜州化學(xué)制品有限公司)；480 g/L 蟲螨腈·虱螨脲懸浮劑(蟲螨腈400 g/L+虱螨脲80 g/L；定遠(yuǎn)眾邦生物工程有限公司)；乙腈(色譜級(jí)，安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?；超純水(自制)。

1260 型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)，具自動(dòng)進(jìn)樣器(進(jìn)樣體積100 μL)和DAD 檢測(cè)器；不銹鋼色譜柱[150 mm×4.6 mm(i.d.)，內(nèi)裝4 μm C18填充物]；過濾器(濾膜孔徑4.5 μm)；UV-1800型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津株式會(huì)社)；KH-25013 型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；XS205 型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多集團(tuán))。

1.2 色譜操作條件

流動(dòng)相為乙腈∶水=80∶20 (體積比)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm[5]，進(jìn)樣體積5 μL，柱溫(30±2.0)℃。在上述色譜條件下，蟲螨腈和虱螨脲的保留時(shí)間分別為4.5、4.1 min。

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別稱取0.02 g 蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)樣品和0.02 g 虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)樣品(均精確至0.002 g)，置于同一50 mL 容量瓶中，加入適量乙腈超聲溶解，取出靜置至室溫，隨后用乙腈定容至刻度線處，搖勻后過濾備用。

1.3.2 樣品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取0.1 g 480 g/L 蟲螨腈·虱螨脲懸浮劑(精確至0.002 g)，置于50 mL 容量瓶中，加入適量乙腈超聲溶解，取出靜置，隨后用乙腈定容至刻度線處，搖勻后過濾備用。

1.3.3 有效成分的測(cè)定

參照1.2 節(jié)中色譜操作條件，待儀器進(jìn)入基線平穩(wěn)狀態(tài)后，多次注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，計(jì)算相鄰2 針標(biāo)樣溶液峰面積相對(duì)變化值K，直至K＜1.0%[6]。

1.3.4 有效成分的計(jì)算

分別取2 針標(biāo)樣溶液和試樣溶液的峰面積進(jìn)行平均，通過式(1)進(jìn)行計(jì)算有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)[7]。

式中：X為有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；A1為標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液中蟲螨腈或虱螨脲對(duì)應(yīng)的峰面積平均值；A2為樣品溶液中蟲螨腈或虱螨脲對(duì)應(yīng)的峰面積平均值；m1為標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量，g；m2為樣品的質(zhì)量，g；w為標(biāo)樣中蟲螨腈或虱螨脲的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 波長(zhǎng)的選擇

通過對(duì)蟲螨腈和虱螨脲進(jìn)行全波段掃描，分別得到不同波長(zhǎng)下蟲螨腈和虱螨脲的紫外吸收光譜圖(圖1)。由圖1 可知：蟲螨腈和虱螨脲在254 nm 處吸光度較高，且檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性較高。由于乙腈在截止波長(zhǎng)處具有很強(qiáng)的末端吸收，考慮到譜圖范圍以及檢測(cè)器的適宜波長(zhǎng)，因此選擇254 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，2 者吸收峰面積均較大，同時(shí)可以避免溶劑干擾吸收。

圖1 蟲螨腈和虱螨脲紫外吸收光譜圖

2.2 流動(dòng)相的選擇

不同流動(dòng)相及其比例對(duì)樣品物質(zhì)分離過程有著重要影響。根據(jù)蟲螨腈的物化性質(zhì)，480 g/L 蟲螨腈·虱螨脲懸浮劑采用乙腈和水作為流動(dòng)相。經(jīng)測(cè)定，當(dāng)水相比例小于20%時(shí)，分離效果較差，且虱螨脲出峰時(shí)間過早，導(dǎo)致與雜峰混合，無法精確檢測(cè)；當(dāng)水相大于20%時(shí)，雖然雜峰與有效成分分離效果有所改善，但蟲螨腈出峰時(shí)間延遲，工作效率降低。因此，選定乙腈∶水=80∶20(體積比)作為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，此條件下樣品出峰時(shí)間適宜，雜質(zhì)與有效成分分離清楚，基線平穩(wěn)，峰形尖銳對(duì)稱，工作效率高(圖2、圖3)。

圖2 蟲螨腈和虱螨脲標(biāo)樣液相色譜圖

圖3 蟲螨腈和虱螨脲試樣液相色譜圖

2.3 線性相關(guān)性

分別稱取蟲螨腈和虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)樣品各0.02 g(均精確至0.002 g)，置于50 mL 容量瓶中，用適量乙腈超聲溶解后定容，分別移取此溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于25 mL 容量瓶中，乙腈稀釋后定容，搖勻過濾并按照上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)試分析。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖4 所示。可見，蟲螨腈(虱螨脲)的質(zhì)量濃度與其相應(yīng)響應(yīng)值之間表現(xiàn)出良好的線性相關(guān)性，蟲螨腈線性回歸方程為：y=11.988 1+7.186 1x，相關(guān)系數(shù)r為0.999 3；虱螨脲線性回歸方程為：y=16.787 49+9.178 54x，相關(guān)系數(shù)r為0.999 8。

圖4 蟲螨腈和虱螨脲線性關(guān)系圖

2.4 方法的精密度

準(zhǔn)確稱取5 份同一試樣，在上述條件下進(jìn)行平行測(cè)定，并分別計(jì)算有效成分的標(biāo)準(zhǔn)偏差與變異系數(shù)，結(jié)果如表1 所示。

表1 分析方法的精密度測(cè)試結(jié)果

可見，蟲螨腈與虱螨脲的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.140 5 和0.031 6，變異系數(shù)分別為3.47%和3.76%，說明此方法精密度良好。

2.5 方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取5 份同一試樣，按上述方法配制試樣溶液，分別加入一定量蟲螨腈和虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)品，在1.2 節(jié)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果如表2 所示。可見，虱螨脲平均回收率為99.45%，蟲螨腈平均回收率為98.72%，該方法回收率均超過95%，準(zhǔn)確度較高，符合產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論

本文建立了同時(shí)檢測(cè)480 g/L 蟲螨腈·虱螨脲懸浮劑中2 種有效成分的高效液相色譜分析方法，并對(duì)此進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明蟲螨腈和虱螨脲相關(guān)系數(shù)分別為0.999 3 和0.999 8，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.140 5和0.031 6，回收率分別為98.72%和99.45%。此方法可以避免雜質(zhì)干擾，簡(jiǎn)單快捷，具有良好的分離效果，同時(shí)準(zhǔn)確度和精確度均能達(dá)到分析要求，可為工業(yè)生產(chǎn)中該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供方法支撐。