張鑫玲 甘文云

駐馬店市中心醫(yī)院RICU，駐馬店 463000

支氣管哮喘是一種以慢性炎性反應(yīng)為主要發(fā)病特征的氣道疾病，此病多見于有哮喘家族病史或其他呼吸道疾病的群體，患者多伴有喘息、氣急、胸悶及咳嗽等癥狀［1-2］。肥胖為消除發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，相關(guān)研究表明［3］，與正常體質(zhì)量指數(shù)（BMI）人群相比，BMI ≥24 kg/m2人群的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)更高，且隨體質(zhì)量不斷增加，肥胖哮喘患者的病情也會逐步加重。當(dāng)病情進(jìn)展至一定階段且難以單獨(dú)依賴藥物進(jìn)行控制時(shí)則可判定為重癥哮喘，重癥哮喘患者的病情易反復(fù)，可對其日常生活造成嚴(yán)重影響，如何實(shí)現(xiàn)對此類患者的有效治療是目前臨床研究的重要課題［4-5］。脂肪量和肥胖相關(guān)蛋白（fat mass and obesity-associated gene，F(xiàn)TO）為一種可維持機(jī)體能量平衡并促使機(jī)體脂肪生成的重要因子，除可參與多種甲基化核酸的脫甲基過程外，還可通過調(diào)節(jié)炎癥因子及降解酶表達(dá)水平介導(dǎo)慢性疾病的發(fā)生及發(fā)展［6-7］。為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對重癥哮喘的患者的有效治療，本研究主要探討FTO表達(dá)情況與重癥哮喘患者氣道炎癥及預(yù)后的相關(guān)性及其介導(dǎo)機(jī)制。

資料與方法

1.一般資料

病例納入駐馬店市中心醫(yī)院2021年1月至2022年10月期間124例重癥哮喘患者作為研究對象。根據(jù)FTO檢測結(jié)果，將FTO相對表達(dá)量＞1.0的62例患者列為過表達(dá)組，將FTO相對表達(dá)量≤1.0的62例患者列為低表達(dá)組。低表達(dá)組內(nèi)患者男女構(gòu)成比為40/22，年齡區(qū)間為45～65歲之間，年齡為（55.23±5.16）歲，病程區(qū)間為5～10年，病程為（7.55±1.27）年，每日哮喘發(fā)作2～5次，哮喘發(fā)作次數(shù)（3.41±0.22）次；過表達(dá)組內(nèi)患者男女構(gòu)成比為42/20，年齡區(qū)間為47～63歲之間，年齡為（56.15±5.23）歲，病程區(qū)間為6～9年，病程為（6.82±1.33）年，每日哮喘發(fā)作3～4次，哮喘發(fā)作次數(shù)（3.55±0.16）次；兩組患者一般資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本次研究已獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（22002）。

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①入組患者均符合支氣管哮喘診斷要點(diǎn)［8］，經(jīng)臨床評估確認(rèn)為重癥患者；②目前病情處于穩(wěn)定期；③均已知悉此次研究試驗(yàn)?zāi)康募皟?nèi)容，同意且自愿參與研究。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他慢性呼吸系統(tǒng)疾病者；②感染性癥狀或免疫功能障礙者；③惡性腫瘤者；④合并心肺、肝腎功能障礙者；⑤伴有精神、認(rèn)知、障礙性疾病者。

2.方法

2.1.研究方法 根據(jù)FTO檢測結(jié)果，將FTO相對表達(dá)量＞1.0的62例患者列為過表達(dá)組，將FTO相對表達(dá)量≤1.0的62例患者列為低表達(dá)組［9］，比較兩組患者的氣道炎癥因子水平、預(yù)后評分，通過Spearman相關(guān)性系數(shù)驗(yàn)證FTO表達(dá)與重癥哮喘患者氣道炎癥及預(yù)后水平的相關(guān)性，并探討其介導(dǎo)機(jī)制。

2.2.治療方法 首先予以常規(guī)抗感染及對癥支持治療，后采用美國Respironics偉康公司提供的BIPAP Vision型呼吸機(jī)對患者實(shí)施無創(chuàng)機(jī)械通氣治療，通氣模式選擇ST，呼氣末正壓設(shè)置為4～4 cmH2O（1 cmH2O=0.098 kPa），呼吸頻率設(shè)定為15～20次/min、吸呼比設(shè)定為1∶2、通氣時(shí)間為16～20 h/d，持續(xù)治療10 d后開展為3個(gè)月短期隨訪。

2.3.FTO檢測方法 （1）于患者入院后取外周靜脈血經(jīng)抗凝、離心后采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測FTO蛋白濃度；（2）通過Trizol法提取FTO的RNA，于260 nm條件下測定并記錄吸光度，以此計(jì)算FTO的RNA純度及含量；（3）取1 g總RNA實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增，獲取PCR產(chǎn)物后在95 ℃下予以5 min預(yù)變性，后予以3 s變性并在58 ℃下進(jìn)行40 s退火，在72 ℃下進(jìn)行30 s延伸，以此重復(fù)40次；（4）在72 ℃下持續(xù)擴(kuò)增10 min后提取6 μl產(chǎn)物并在濃度為2%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，電泳時(shí)電壓參數(shù)為110 V，電泳時(shí)間為35 min，保存并記錄FTO表達(dá)水平。

3.觀察指標(biāo)

3.1.氣道炎癥因子 于患者入院后取兩組患者外周靜脈血，經(jīng)抗凝、離心后采用美國BECKMAN COULTER公司提供的AU5800型全自動生化分析儀，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、IL-1β等氣道炎癥因子水平。

3.2.預(yù)后情況評估 于患者治療結(jié)束后開展為期3個(gè)月隨訪，采用哮喘控制問卷（ACQ）［10］、哮喘控制測試（ACT）［11］評估兩組患者的預(yù)后情況。ACQ包括7個(gè)條目，將各條目分值相加后取平均值為最終記錄結(jié)果，ACQ評分＞1.5分提示癥狀未得到有效控制，預(yù)后較差；ACT包含5個(gè)條目，均按1～5分計(jì)分，滿分25分，當(dāng)ACT評分＜20分提示未得到有效控制，預(yù)后較差，且需重新制定診療、管理計(jì)劃。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均采用軟件SPSS 22.0處理，計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以（）表示，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；使用Spearman相關(guān)性系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，當(dāng)0＜r＜1、P＜0.05認(rèn)為二者正相關(guān)，當(dāng)-1＜r＜0、P＜0.05認(rèn)為二者負(fù)相關(guān)［12］；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.兩組患者的氣道炎癥指標(biāo)比較

經(jīng)檢測，低表達(dá)組患者的TNF-α、IL-6、IL-1β均高于過表達(dá)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩組重癥哮喘患者的氣道炎癥指標(biāo)比較（ng/L，）

表1 兩組重癥哮喘患者的氣道炎癥指標(biāo)比較（ng/L，）

注：將脂肪量和肥胖相關(guān)蛋白（fat mass and obesity-associated gene，F(xiàn)TO）相對表達(dá)量＞1.0的62例患者列為過表達(dá)組，將FTO相對表達(dá)量≤1.0的62例患者列為低表達(dá)組；TNF-α為腫瘤壞死因子-α，IL為白細(xì)胞介素

IL-1β 28.77±8.42 22.36±5.18 5.106＜0.001組別低表達(dá)組過表達(dá)組t值P值例數(shù)62 62 TNF-α 30.45±8.76 23.39±5.47 5.383＜0.001 IL-6 31.44±8.77 25.15±5.35 4.821＜0.001

2.兩組患者的預(yù)后情況比較

經(jīng)評估，低表達(dá)組的ACQ評分高于過表達(dá)組，ACT評分低于過表達(dá)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 兩組重癥哮喘患者的預(yù)后情況比較（分，）

表2 兩組重癥哮喘患者的預(yù)后情況比較（分，）

注：將脂肪量和肥胖相關(guān)蛋白（fat mass and obesity-associated gene，F(xiàn)TO）相對表達(dá)量＞1.0的62例患者列為過表達(dá)組，將FTO相對表達(dá)量≤1.0的62例患者列為低表達(dá)組；ACQ為哮喘控制問卷，ACT為哮喘控制測試

ACT評分19.44±5.37 22.72±5.46 3.372＜0.001組別低表達(dá)組過表達(dá)組t值P值例數(shù)62 62 ACQ評分2.63±0.26 1.21±0.47 20.817＜0.001

3.FTO表達(dá)與氣道炎癥、預(yù)后水平的相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，重癥哮喘患者的FTO表達(dá)水平與TNF-α、IL-6、IL-1β等氣道炎癥指標(biāo)以及ACQ評分呈負(fù)相關(guān)，與ACT評分呈正相關(guān)（均P＜0.05），見表3。

表3 124例重癥哮喘患者FTO表達(dá)與氣道炎癥、預(yù)后水平的相關(guān)性分析

討論

重癥哮喘是導(dǎo)致支氣管哮喘患者發(fā)生多種不良預(yù)后甚至死亡的主要原因，其臨床癥狀易反復(fù)、發(fā)作頻率較高，可對日常生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響，部分急性發(fā)作期患者甚至?xí)蚝喜庑?、肺部感染或肺功能衰竭而在?shù)分鐘內(nèi)死亡［13］。目前，針對重癥哮喘患者，臨床多會在明確通氣指征基礎(chǔ)上實(shí)施有創(chuàng)或無創(chuàng)通氣治療，同時(shí)還會予以相應(yīng)藥物改善氣道炎癥，但重癥哮喘患者病情相對嚴(yán)重，僅依靠上述方案治療的效果并不理想。目前認(rèn)為，肥胖在重癥哮喘疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用，與正常BMI人群相比，BMI ≥24 kg/m2的超重、肥胖人群的發(fā)生哮喘或進(jìn)展為重癥哮喘的風(fēng)險(xiǎn)更高［14］。FTO為一種具有基因多態(tài)性特征的蛋白因子，與脂肪代謝、能量平衡密切相關(guān)，隨FTO表達(dá)水平升高，肥胖患者發(fā)生多種不良預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)也會明顯增加［15］。

此前有學(xué)者表示，F(xiàn)TO可通過上調(diào)前炎癥因子及降解酶表達(dá)而誘發(fā)全身炎性反應(yīng)，在多種慢性疾病的發(fā)生、發(fā)展中均有重要作用，但其具體介導(dǎo)機(jī)制尚未得到闡明［16］。通氣功能障礙可導(dǎo)致肺內(nèi)組織缺氧，在此機(jī)制下，重癥哮喘患者肺內(nèi)產(chǎn)生的大量氧自由基可引發(fā)的氧化應(yīng)激反應(yīng)并加劇氣道炎癥［17］。本研究結(jié)果顯示，低表達(dá)組患者的TNF-α、IL-6、IL-1β均高于過表達(dá)組（均P＜0.05）。哮喘患者本身存在氣道炎癥，重癥哮喘患者的血清炎癥因子水平會隨FTO表達(dá)水平上升而不斷升高，其臨床癥狀難以控制、氣道炎癥難以緩解，更易發(fā)生不良預(yù)后。本研究中，低表達(dá)組的ACQ評分高于過表達(dá)組，ACT評分低于過表達(dá)組（均P＜0.05），提示隨FTO表達(dá)水平降低，重癥哮喘患者的預(yù)后情況也會隨氣道炎癥加劇而持續(xù)惡化。目前，臨床尚未闡明FTO具體抗炎機(jī)制，但有動物實(shí)驗(yàn)表明，全身炎性反應(yīng)加重考慮與N6-甲基腺苷（m6A）修飾蛋白相關(guān)，當(dāng)m6A激活核因子（NF）-κB以及NLRP3的炎性通路后可促使FTO表達(dá)下降，并促使巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為促炎性細(xì)胞［18-19］。此前，有研究通過使用FTO調(diào)節(jié)劑增加其表達(dá)水平實(shí)現(xiàn)了對機(jī)體炎性反應(yīng)的有效控制，也從側(cè)面證實(shí)了FTO表達(dá)水平與炎癥因子水平的相關(guān)性［20］。當(dāng)FTO沉默時(shí)，m6A的基因修飾作用以及核酸RNA去甲基化作用均可得到加強(qiáng)，低表達(dá)FTO可促使巨噬細(xì)胞極化而誘發(fā)炎性反應(yīng)。本研究經(jīng)Spearman相關(guān)性系數(shù)檢驗(yàn)后結(jié)果顯示，隨FTO表達(dá)水平下降，重癥哮喘患者的TNF-α、IL-6、IL-1β等氣道炎癥指標(biāo)均會逐步升高，提示FTO表達(dá)水平與氣道炎癥水平呈顯著負(fù)相關(guān)；隨FTO表達(dá)水平下降，重癥哮喘患者的ACQ評分會逐步升高，ACT評分會逐步下降，m6A去甲基化作用增強(qiáng)可下調(diào)FTO表達(dá)，并加劇氣道炎癥。

綜上所述，F(xiàn)TO在重癥哮喘患者的疾病發(fā)生、發(fā)展中均具有重要作用，通過抑制FTO表達(dá)可有效改善重癥哮喘患者預(yù)后。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明張鑫玲：醞釀和設(shè)計(jì)試驗(yàn)，實(shí)施研究，采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，起草文章，統(tǒng)計(jì)分析；甘文云：對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱，指導(dǎo)