王 紅，曹 君，劉俊杰，張 敏，呂立濤

（遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所/遼寧省食用菌優(yōu)質(zhì)栽培重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧沈陽 110161）

羊肚菌，屬于子囊菌門（Ascomycota）、盤菌目（Pezizales）、羊肚菌屬（Morchella），是食藥兼用型真菌，營養(yǎng)豐富，風(fēng)味獨(dú)特，受到人們的喜愛。羊肚菌菌絲生長需要適宜的營養(yǎng)因素和環(huán)境因素，其中營養(yǎng)因素主要包括碳源、氮源、微量元素，環(huán)境因素主要包括溫濕度、光照、pH 等[1]，而羊肚菌作為一種異養(yǎng)生物，不能進(jìn)行光合作用，光對其的響應(yīng)機(jī)制不同于綠色植物[2]。研究發(fā)現(xiàn)，光對食用菌生長發(fā)育影響顯著，侯立娟等[3]研究表明，紅光與藍(lán)光組合促進(jìn)草菇菌絲的生長，并增大了生物量。Kitomoto 等發(fā)現(xiàn)藍(lán)光可以誘導(dǎo)金針菇分化出菌蓋和菌褶。林標(biāo)聲等[4]研究表明，散射光源更適合紅平菇子實(shí)體發(fā)育。舒黎黎等[5]研究表明，紫光、綠光和藍(lán)光不能促進(jìn)羊肚菌原基形成子實(shí)體，而混合光源可縮短原基形成時間，增加原基數(shù)量，促進(jìn)子實(shí)體生長。目前已報道了一些關(guān)于不同光質(zhì)、不同強(qiáng)度對食用菌生長發(fā)育影響的研究，但光照對羊肚菌菌絲生長及菌核形成的影響鮮有報道。該研究采用LED 燈為光源，以自然光、白色鏑燈和黑暗條件為對照，研究不同光源條件對羊肚菌菌絲生長的影響，為羊肚菌菌種制備提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株。羊肚菌菌株為遼羊肚菌2 號（遼備菌2015010），由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所保存；羊肚菌菌株的培養(yǎng)基為PDA 培養(yǎng)基，購自北京酷來博科技有限公司。

1.1.2 光源設(shè)計。設(shè)計12 種不同的光源組合，其中單色光源4 種（紅色光、黃色光、藍(lán)色光、綠色光），雙色光源6 種（紅黃光、紅藍(lán)光、紅綠光、黃藍(lán)光、黃綠光、藍(lán)綠光），對照光源2 種（白色鏑燈、黑暗無光）。LED 燈安裝在培養(yǎng)架頂部，距離培養(yǎng)皿30 cm，每層培養(yǎng)架上安裝2 個LED 燈管，單色光源安裝2 個相同的LED 燈管，雙色光源安裝2 個不同顏色的LED 燈管。光源培養(yǎng)，每天光照時間8 h；黑暗無光培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿放置在培養(yǎng)架上后，用遮光布將培養(yǎng)架完全遮擋，制造成一個暗室。

1.2 方法

1.2.1 菌絲生長速度測定。在每個培養(yǎng)皿中接種直徑為0.5 cm 的圓形菌塊，黑暗無光條件下過夜培養(yǎng)，待菌塊萌發(fā)后放置在不同光質(zhì)光源下照射，18℃恒溫培養(yǎng)，接種24 h 后開始測定菌絲生長速度，每隔24 h 用游標(biāo)卡尺測量菌絲生長直徑1 次，以其中一個處理長滿培養(yǎng)皿后，結(jié)束測量。每個處理10 個重復(fù)，菌絲長滿后，統(tǒng)計其形成菌核的形態(tài)。

1.2.2 菌絲繼代培養(yǎng)后菌核形態(tài)。將在紅綠光照射條件下獲得的5 種羊肚菌菌絲表現(xiàn)形態(tài)，18℃恒溫繼代培養(yǎng)1次，每個表現(xiàn)形態(tài)菌絲和菌核各轉(zhuǎn)接5 皿，觀察羊肚菌菌絲和菌核形態(tài)的變化。

1.2.3 栽培料中菌核形態(tài)。將5 種表現(xiàn)形式制作成栽培種，栽培種配方為小麥64%、稻殼20%、玉米芯20%、石膏1%。裝在15 cm 高的玻璃瓶，18℃恒溫條件下，觀察栽培種菌絲長勢和菌核形成。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同光質(zhì)光源對羊肚菌菌絲生長速度的影響

從圖1 可以看出，從單色光源上看，羊肚菌菌絲在藍(lán)色光條件下生長速度最快，在黃色光條件下生長速度最慢；從雙色光源上看，在紅黃光條件下生長速度最快，在黃綠光條件下生長速度最慢。從整體上看，雙色光源比單色光源對菌絲生長速度影響大，白色光對菌絲生長速度的影響處于雙色光和單色光之間。在紅黃光的條件下，菌絲生長速度最快，為1.681±0.009 5 cm/d，是在完全黑暗的條件下羊肚菌菌絲生長速度的1.33 倍，而黑暗條件下菌絲生長速度低于其他處理，表明光源有助于促進(jìn)羊肚菌菌絲的生長。

圖1 不同光質(zhì)光照對羊肚菌菌絲生長速度的影響

2.2 不同光質(zhì)光源對羊肚菌菌核形態(tài)的影響

從圖2 可以看出，羊肚菌菌絲在不同光質(zhì)光源的處理下，菌絲生長初期菌落顏色、菌絲邊緣整齊度均沒有顯著差異，菌絲長滿培養(yǎng)皿后，菌絲顏色、菌核形態(tài)差異顯著。不同處理間，菌核形態(tài)和菌絲顏色表現(xiàn)不一，形成5種不同類別的培養(yǎng)皿表現(xiàn)形式（表1），其中3 種是有菌核形成的，而羊肚菌菌核在羊肚菌生活史中具有重要意義[6]。在白色光、藍(lán)色光和黃綠色光的培養(yǎng)條件下，菌絲形成菌核的幾率將降低，而在紅色光、紅黃光、紅藍(lán)光、自然光和黑暗無光條件下，形成V 型培養(yǎng)皿形態(tài)的較多（表2）。

表1 不同類型菌核形態(tài)

圖2 不同光質(zhì)光照下羊肚菌菌核形態(tài)

2.3 繼代培養(yǎng)后羊肚菌菌核形態(tài)

將5 種不同培養(yǎng)形態(tài)進(jìn)行繼代轉(zhuǎn)接，I 型和II 型將菌絲進(jìn)行繼代轉(zhuǎn)接，III 型～V 型分別轉(zhuǎn)接菌絲和菌核。18℃恒溫黑暗培養(yǎng)后，第2 代表現(xiàn)出了與第1 代不同的類型。I型轉(zhuǎn)接后，第2 代出現(xiàn)了I 型和III 型；II 型轉(zhuǎn)接后，第2代出現(xiàn)了II 型和III 型；III 型菌絲、菌核和IV 型菌絲轉(zhuǎn)接后，第2 代出現(xiàn)了II 型、III 型和IV 型；IV 型菌絲轉(zhuǎn)接后，第2 代出現(xiàn)了II 型和IV 型；IV 型和IV 型菌核轉(zhuǎn)接后，第2 代出現(xiàn)了IV 型。結(jié)果表明，沒有菌核的形態(tài)通過繼代培養(yǎng)可以出現(xiàn)有少量菌核的形態(tài)；有少量菌核的形態(tài)，通過繼代培養(yǎng)可以出現(xiàn)大量點(diǎn)狀菌核的形態(tài)；大量點(diǎn)狀菌核的形態(tài)，通過繼代培養(yǎng)可以出現(xiàn)致密菌核形態(tài)。菌核轉(zhuǎn)接后，第2 代形態(tài)變化相對較少，而菌絲轉(zhuǎn)接第2 代形態(tài)變化較多。

2.4 不同形態(tài)栽培試驗(yàn)

從表3 可以看出，5 種表現(xiàn)型菌絲生長速度差別不大，為0.850～0.878 cm/d，17～18 d 長滿瓶。V 型和IV 型菌絲長滿瓶后出現(xiàn)白色菌核，菌核量大，菌核在瓶口聚集的較多，繼續(xù)培養(yǎng)白色菌核變?yōu)樯铧S色菌核（圖3），III 型菌絲長滿后5～7 d 出現(xiàn)菌核，菌核零散分布，量比較少，I 型和II 型未形成菌核。

表3 栽培種菌絲生長速度及菌核形態(tài)

圖3 栽培種羊肚菌菌核形態(tài)（左圖為III 型，右圖為IV、V 型）

3 結(jié)論與討論

光照既能促進(jìn)食用菌生長發(fā)育，也能抑制食用菌生長發(fā)育，其作用機(jī)理復(fù)雜，且易受到其他環(huán)境因子的影響[8-11]。有研究表明，綠光或藍(lán)綠光有利于草菇菌絲生長，藍(lán)綠光下草菇的子實(shí)體個數(shù)最多，產(chǎn)量最高[12]。白光和藍(lán)光有利于平菇子實(shí)體的生長和產(chǎn)量的增加，紅光可提高子實(shí)體多糖含量，黃色光可提高子實(shí)體粗蛋白含量[13]。該研究中不同光質(zhì)光源對羊肚菌菌絲生長有促進(jìn)作用，與上述試驗(yàn)吻合。然而，菌絲的生長速度并不能作為衡量菌株的唯一標(biāo)準(zhǔn)，還需結(jié)合菌絲生物量、菌絲形態(tài)等特征。該研究中羊肚菌菌核是菌絲培養(yǎng)到中后期的產(chǎn)物，也是菌株優(yōu)劣的一個衡量標(biāo)準(zhǔn)[15]。在黑暗無光的條件下，形成的致密型菌核數(shù)量最多，致密型菌核更穩(wěn)定。而在紅黃光培養(yǎng)下，致密型菌核的數(shù)量與黑暗無光條件相同，但形成的菌核更完整、菌核直徑更大，表明紅黃光照有助于菌核量的累積。該文還針對不同光源培養(yǎng)下的菌核形態(tài)進(jìn)行繼代培養(yǎng)和栽培種培養(yǎng)，觀察菌核的形成形態(tài)，其變化規(guī)律和形成機(jī)理將是進(jìn)一步研究的方向。