蔡泓瀅,太敏瑞,李瑞,2*,宋兵兵,2,陳建平,2,劉曉菲,2,鐘賽意,2

1(廣東海洋大學(xué) 食品科技學(xué)院,廣東省海洋生物制品工程實(shí)驗(yàn)室,廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心,廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省亞熱帶果蔬加工科技創(chuàng)新中心,廣東 湛江,524088)2(海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心(大連工業(yè)大學(xué)),遼寧 大連,116034)

口服是攝入功能性物質(zhì)最便捷的方式,也是具有活性的蛋白質(zhì)和多肽最理想的吸收方式。雖然目前已經(jīng)證明,口服蛋白質(zhì)納米遞送載體可以被小腸吸收,但其較低的吸收率仍然是開(kāi)發(fā)口服納米載體的最大障礙。蛋白質(zhì)在口服過(guò)程中需要克服數(shù)重屏障[1],才能到達(dá)體循環(huán)被有效吸收。第一個(gè)屏障是胃酸屏障:胃部的pH為1.2,在該條件下大部分蛋白質(zhì)都會(huì)失活,且胃液中的蛋白質(zhì)酶會(huì)分解蛋白質(zhì)。第二個(gè)屏障是腸黏膜屏障:腸腔表面附著的黏液層,主要成分是高度糖基化的黏蛋白分子形成的凝膠網(wǎng)絡(luò),確保了腸黏膜屏障的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,也阻止了異物入侵;有效的口服納米粒子應(yīng)能夠穿透腸黏膜屏障,穿過(guò)腸上皮細(xì)胞,才能進(jìn)入體循環(huán)。在多重屏障的阻礙下,口服蛋白質(zhì)的生物利用度僅為1%～2%[2]。因此,構(gòu)建口服蛋白質(zhì)納米粒子最重要的挑戰(zhàn)是提高蛋白質(zhì)的口服利用度。近幾年,研究發(fā)現(xiàn)納米遞送載體如納米粒子[3]、水凝膠[4]、乳液[5]、微膠囊[6]等對(duì)蛋白質(zhì)具有保護(hù)作用,被用于蛋白質(zhì)類物質(zhì)的遞送,并能有效提高蛋白質(zhì)的生物利用度。

天然多糖是由糖苷鍵連接的單糖組成的碳水化合物,具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌、降血糖等多種生物活性[7],在食品和制藥行業(yè)中均得到了廣泛應(yīng)用。當(dāng)多糖作為納米粒子的壁材,它可以穿過(guò)內(nèi)皮系統(tǒng),在體循環(huán)中具有更高的穩(wěn)定性[8]。此外,多糖中的羧基、羥基和氨基可增加其與細(xì)胞和組織間的黏附性,提高芯材在口服過(guò)程中的生物利用度[9]。學(xué)者們廣泛探究了多糖作為納米載體的可行性及提高口服大分子蛋白質(zhì)生物利用度的效果[10],天然多糖因其無(wú)毒、化學(xué)結(jié)構(gòu)可修飾、良好的生物相容性和生物降解性等性質(zhì),并與活細(xì)胞之間相互作用廣泛,因此,其作為體循環(huán)和靶向治療生物材料的原料具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[11-12]。本文主要綜述了以天然多糖為基質(zhì)制備納米粒子的常用方法,影響口服蛋白質(zhì)納米載體穩(wěn)定性的主要因素,制備口服蛋白質(zhì)納米載體常用的天然多糖及其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

1 以天然多糖為基質(zhì)制備納米粒子的常用方法

制備納米粒子的方法有薄膜澆鑄、浸涂、自組裝、靜電紡絲、逐層組裝、聚電解質(zhì)絡(luò)合等[13],前2種方法常用于納米復(fù)合膜的制備。下文將詳細(xì)介紹制備口服納米粒子常用的方法:自組裝、逐層組裝和靜電紡絲等。

1.1 自組裝

自組裝是目前制備納米粒子最常見(jiàn)的方法,是指某些分子、大分子或復(fù)合材料能夠與自身結(jié)合形成三維網(wǎng)絡(luò)或其他結(jié)構(gòu)的形式,并通過(guò)相互作用力(如氫鍵、范德華力等)進(jìn)行交聯(lián),該過(guò)程可以在分子或超分子水平上進(jìn)行[14],常用的方法是化學(xué)交聯(lián)法和聚電解質(zhì)絡(luò)合法?；瘜W(xué)交聯(lián)法多用于殼聚糖改性,即將疏水基團(tuán)接枝到殼聚糖分子上,增加殼聚糖對(duì)親脂性藥物的獲取能力,DU等[15]用N-三甲基殼聚糖(N-trimethyl-chitosan, TMC)作為載體,顯著提高了山萘酚的血液滯留時(shí)間。聚電解質(zhì)絡(luò)合是將2種具有不同電荷的聚電解質(zhì)溶液,通過(guò)離子相互作用,可以使電解質(zhì)在不添加任何共價(jià)交聯(lián)劑的情況下形成聚電解質(zhì)化合物(polyelectrolyte complex,PEC),與化學(xué)交聯(lián)化合物相比,PEC通常無(wú)毒、耐受性良好且具有生物相容性[16]。

1.2 逐層組裝

逐層組裝是一種用于制備納米復(fù)合材料的獨(dú)特構(gòu)造方法。將2種不同的納米材料交替堆疊在一起,得到納米復(fù)合材料結(jié)構(gòu)[17],ZHANG等[18]用陰離子羧甲基淀粉和季銨型陽(yáng)離子淀粉作為載體,包載牛血清白蛋白制備納米膠囊,該納米膠囊能夠靶向到結(jié)腸釋放并有一定的作用效果。但逐層組裝技術(shù)用于口服蛋白質(zhì)納米粒子的研究仍處于起步階段,更常用于對(duì)脂質(zhì)體的包載,并且在毒性以及高分散性等方面仍存在一定挑戰(zhàn)。

1.3 離子凝膠法

離子凝膠法是利用聚陽(yáng)離子殼聚糖和帶負(fù)電離子之間的絡(luò)合作用誘導(dǎo)并形成凝膠,常應(yīng)用于單克隆抗體的遞送。VONGCHAN等[19]制備了負(fù)載抑制肝細(xì)胞癌的單克隆抗體的三甲基殼聚糖和蛋白質(zhì)形成納米粒子,該納米制劑可以進(jìn)入細(xì)胞,并在癌細(xì)胞中保留更長(zhǎng)的時(shí)間,能夠潛在延長(zhǎng)抗體的半衰期。

1.4 膠體組裝法、共沉淀法

多糖可以與某些合成聚合物形成穩(wěn)定的離子仿生納米復(fù)合物,用肝素-Pluroinc偶聯(lián)物包載聚丙交酯-乙交酯,改善了聚丙交酯-乙交酯的腫瘤靶向效率[20]。共沉淀是一種同時(shí)沉淀技術(shù),納米復(fù)合材料通過(guò)沉淀形成最終結(jié)構(gòu),在殼聚糖-賴氨酸體系中共沉淀伊曲康唑和殼聚糖,180 min時(shí),伊曲康唑在角膜上的累積滲透率達(dá)到(5.22±0.20)%,為商業(yè)懸浮液的1.7倍[21]。

1.5 其他方法

在制備天然多糖納米載體中,靜電紡絲[22]、薄膜澆鑄[23]、浸涂[24]也是常用的方法。靜電紡絲是在高壓場(chǎng)的作用,經(jīng)過(guò)注射器擠出納米材料復(fù)合溶液的過(guò)程[25], FARALLI等[26]制備了黃原殼聚糖納米纖維,封裝了姜黃素,證明該納米纖維可用于胃腸道中水溶性差的化合物的口服遞送應(yīng)用,當(dāng)黏液附著于靜電紡絲制備的納米纖維可以設(shè)計(jì)多種功能,如快速溶解特性、控釋等作用,在黏膜遞送存在較大優(yōu)勢(shì),但靜電紡絲用于遞送時(shí),存在技術(shù)規(guī)模小、載藥量不穩(wěn)定等限制。而薄膜澆鑄、浸涂通常用于制備柔性納米復(fù)合膜,以延長(zhǎng)食品貨架期,而在蛋白質(zhì)遞送方面的研究較少。

2 影響納米粒子遞送效果的因素

已知的口服蛋白質(zhì)納米粒子的吸收有3種途徑,分別是腸道淋巴途徑、跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞旁途徑。腸道淋巴途徑是讓多肽和蛋白質(zhì)物質(zhì)通過(guò)胃腸壁直接進(jìn)入淋巴管[27]?？诜鞍踪|(zhì)納米制劑通過(guò)該通路,直接將藥物輸送到腔靜脈,避免了首過(guò)效應(yīng),避免了在腸黏膜和肝臟中代謝的過(guò)程,能有效提高生物利用度[28]?？缂?xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)是指納米粒子被腸上皮層的腸細(xì)胞吸收,因此粒徑較大的口服藥物可以靶向到派伊爾結(jié)中,大于500 nm的口服藥物微球更容易被派伊爾結(jié)中的M細(xì)胞吸收,隨后通過(guò)跨膜運(yùn)輸進(jìn)入體循環(huán)中[29],有效提高藥物的生物利用度。細(xì)胞旁途徑即納米粒子從細(xì)胞間隙的緊密連接(tight junctions, TJs)穿過(guò)上皮細(xì)胞,進(jìn)入體循環(huán)的途徑,是被動(dòng)擴(kuò)散,也是親水分子被吸收的唯一途徑。因此,粒徑和電位是影響納米粒子穩(wěn)定性和遞送效果的2個(gè)重要因素。

2.1 粒徑

對(duì)于口服蛋白質(zhì)納米粒子而言,粒徑是非常重要的指標(biāo)之一,并且會(huì)影響蛋白質(zhì)的生物利用度,納米載體的大小會(huì)影響M細(xì)胞和腸細(xì)胞對(duì)其的攝取,當(dāng)納米粒子粒徑小于50 nm時(shí)可以通過(guò)腸細(xì)胞內(nèi)吞優(yōu)先轉(zhuǎn)移,而M細(xì)胞優(yōu)先在較小(20～100 nm)的粒徑范圍內(nèi)運(yùn)輸顆粒。DESAI等[30]以聚苯乙烯為載體制備了不同粒徑的牛血清白蛋白納米粒子,發(fā)現(xiàn)當(dāng)粒徑小于100 nm時(shí),吸收率較高,并且能夠穿越腸上皮細(xì)胞,而粒徑大于100 nm的主要位于小腸上皮層,不能被吸收,同時(shí),小于500 nm的能夠到達(dá)循環(huán)系統(tǒng)。SUN等[31]發(fā)現(xiàn)280 nm級(jí)別的環(huán)孢菌素A納米懸浮液比522、2 976 nm的納米懸液具有更高的生物利用度。但由于制備較小納米級(jí)別的納米懸浮液成本更高,在實(shí)際生產(chǎn)中,應(yīng)考慮成本、效率、能源的消耗,確定一個(gè)最佳粒徑范圍。

2.2 電位

帶正電的多糖(如殼聚糖)和帶負(fù)電的黏蛋白的靜電作用可導(dǎo)致強(qiáng)烈的黏膜吸附效果,能使納米粒子接近小腸上皮細(xì)胞,增加攝入,由于小腸黏液層中帶有負(fù)電荷,具備正電荷的納米粒子更可能黏附在小腸黏液層,并延長(zhǎng)納米粒子在腸道的滯留時(shí)間。但陽(yáng)離子納米粒子和黏液層的相互作用會(huì)阻礙納米粒子通過(guò)黏液層,從而影響納米粒子的吸收[32]。帶中性電荷的粒子最適合延長(zhǎng)納米粒子在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間[33]。目前,常用聚乙二醇修飾納米粒子的表面,提高其親水性,并且使納米粒子的表面電荷接近中性[34],SUSA等[35]發(fā)現(xiàn),納米粒子的電位絕對(duì)值大于10 mV時(shí),會(huì)有明顯的黏膜黏附性。

3 天然聚合物納米遞送載體的制備及應(yīng)用

3.1 殼聚糖及其衍生物

3.1.1 以殼聚糖為載體制備口服蛋白質(zhì)納米粒子

殼聚糖(chitosan, CS)是甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物,由葡萄糖胺和N-乙酰葡糖胺連接構(gòu)成的陽(yáng)離子多糖,具有抗菌、抗炎及抗腫瘤等生物活性,其理化性質(zhì)主要取決于甲殼素脫乙酰度、分子量和pH值,由于氨基葡萄糖單元的脫乙酰殼聚糖主鏈具有高密度的帶電酰胺,殼聚糖表面帶正電荷,能與在中性條件下攜帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)和基因發(fā)生強(qiáng)烈的靜電作用,同時(shí)也能與負(fù)電荷的黏蛋白層形成氫鍵和靜電離子鍵[36],使殼聚糖納米粒子能夠穩(wěn)定穿越腸道屏障[37]。SONAJE等[3]發(fā)現(xiàn),殼聚糖能夠誘導(dǎo)緊密連接蛋白中的閉合蛋白4(claudin-4)從細(xì)胞膜重新分布到胞質(zhì)溶膠,從而減弱緊密連接,并可在短時(shí)間內(nèi)增強(qiáng)細(xì)胞旁通透性。使用殼聚糖作為包載材料能夠延長(zhǎng)其在腸道的滯留時(shí)間,增加藥物對(duì)膜的通透性。YAO等[38]用果膠和殼聚糖修飾牛乳鐵蛋白,有效提高了口服牛乳鐵蛋白在大鼠血液內(nèi)的平均停留時(shí)間。體外釋放是評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)類藥物給藥納米制劑穩(wěn)定性的常用方法。首先,將納米粒子置于人工胃液(simulated gastric fluid, SGF)中孵育0～2 h,隨后將納米粒子轉(zhuǎn)移到人工腸液(simulated intestinal fluid, SIF)中孵育6～12 h,測(cè)游離蛋白質(zhì)含量,模擬納米粒子在胃腸道中的釋放情況,進(jìn)而推斷納米粒子在體內(nèi)的消化方式[39],得到的殼聚糖納米粒子具有pH響應(yīng)性,即酸性條件下穩(wěn)定,堿性條件下釋放。LING等[40]用海藻酸鹽、鈣離子和殼聚糖包裹綠色熒光蛋白形成的綠色熒光納米液滴,得到的綠色熒光蛋白保留效率為(59.9±1.1)%,交聯(lián)后的海藻酸鈉/殼聚糖多磺酸粘多糖包裹綠色熒光蛋白的納米粒子在模擬胃液中培養(yǎng)2 h后熒光能夠逐漸恢復(fù),在模擬腸液中2 h約70%納米粒子(nano particle, NPs)可被釋放,說(shuō)明使用海藻酸鹽、鈣離子、殼聚糖包載的綠色熒光蛋白保證了其在胃液中白的穩(wěn)定,通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白能夠在腸液中有效釋放。由于氨基的質(zhì)子化作用,殼聚糖在酸性條件會(huì)高度溶解,這說(shuō)明殼聚糖在胃液的條件下時(shí)常不穩(wěn)定。若以殼聚糖作為單純的載體,制備的CS-NPs在人工胃液中可能會(huì)發(fā)生嚴(yán)重腫脹和離解,導(dǎo)致內(nèi)部蛋白質(zhì)的突然釋放。但在小腸的堿性條件下,殼聚糖去質(zhì)子化,去質(zhì)子化后的CS變得不溶于水,會(huì)削弱聚合物網(wǎng)絡(luò)并導(dǎo)致納米顆粒的破損[41]。因此,單純的殼聚糖不適合作為口服蛋白質(zhì)的載體,為了克服殼聚糖載體的這個(gè)缺點(diǎn),目前常采用化學(xué)交聯(lián)或殼聚糖改性。

3.1.2 以殼聚糖衍生物為載體制備口服蛋白質(zhì)納米粒子

由于殼聚糖在堿性條件下溶解性差,會(huì)使納米粒子無(wú)法穩(wěn)定抵達(dá)目標(biāo)位點(diǎn),目前采用對(duì)殼聚糖改性的方法提高殼聚糖納米載體的穩(wěn)定性。N-三甲基殼聚糖(N-trimethyl-chitosan,TMC)是殼聚糖的伯胺基被碘代甲烷取代而成的產(chǎn)物,TMC有較好的溶解性,在pH 1～9內(nèi)均能溶解,TMC引入了三甲基,使殼聚糖帶有更多的正電荷,能顯著促進(jìn)其吸收,效果與其季氨化程度成正比。當(dāng)pH>6時(shí),殼聚糖的溶解性較差,多用于酸性環(huán)境納米粒子的構(gòu)建,而使用TMC構(gòu)建納米粒子能減少pH對(duì)其溶解性影響的問(wèn)題[42]。除了TMC,常見(jiàn)的殼聚糖衍生物還有鄰苯二甲酸殼聚糖、硫醇化殼聚糖、十二烷基琥珀酰殼聚糖等[42]。通過(guò)殼聚糖改性,HE等[43]開(kāi)發(fā)出一種由羧化殼聚糖接枝納米顆粒和雙層薄膜包裹鈣綠素的復(fù)合載體,該羧化殼聚糖接枝納米載體(carboxylated chitosan grafted nanoparticles, CCGN)具有海藻酸鹽-Ca2+黏附層和疏水背襯層。體外模擬釋放時(shí),CCGN在模擬胃液環(huán)境的酸性介質(zhì)中的釋放量受到限制,在模擬腸液環(huán)境的中性培養(yǎng)基中,在30 min內(nèi)達(dá)到了100%的釋放量,說(shuō)明CCGN或許能夠有效實(shí)現(xiàn)口服的有效遞送。LI等[44]合成了一種具有抗蛋白水解能力的口服細(xì)胞程序性死亡-配體1(programmed cell death 1 ligand 1, PD-L1)結(jié)合肽(oral pd-l1 binding peptide 1, OPBP-1),它可以阻斷免疫PD-1/PD-L1細(xì)胞蛋白的過(guò)表達(dá),從而抑制腫瘤生長(zhǎng),有作為癌癥免疫治療的潛在作用。用TMC負(fù)載OPBP-1形成水凝膠,該水凝膠呈現(xiàn)高度多孔結(jié)構(gòu),有利于OPBP-1在水凝膠內(nèi)封裝,能保護(hù)封裝的OPBP-1免受蛋白酶的降解,同時(shí),在緩沖液的作用下,多孔結(jié)構(gòu)能夠提高OPBP-1從水凝膠中釋放出來(lái)的效率。

3.2 以海藻酸鈉為載體制備口服蛋白質(zhì)納米粒子

海藻酸是一種天然多糖,由甘露糖醛酸(mannuronic acid, M)和古洛糖醛酸(guluronic acid, G)結(jié)合而成,高甘露糖醛酸海藻酸鹽纖維具有更好的膠凝能力,高古洛糖醛酸海藻酸鹽通過(guò)靜電紡絲形成的納米纖維膜具有纖維薄和高孔隙率的特點(diǎn),并且這2種單體的比例會(huì)對(duì)海藻酸與金屬離子的結(jié)合能力有一定的影響[45]。鈉離子是海藻酸鹽常結(jié)合的一種離子,古洛糖醛酸殘基通過(guò)鈉離子交換可與二價(jià)離子交聯(lián),形成凝膠,并將目標(biāo)物質(zhì)包裹在內(nèi)部,結(jié)合后的海藻酸鈉具有良好的生物降解性、生物相容性、低毒性和控釋效果良好等特點(diǎn),在制備營(yíng)養(yǎng)素或藥物釋放載體方面中應(yīng)用廣泛。通過(guò)離子凝膠法或聚電解質(zhì)絡(luò)合法制備了多種海藻酸鈉納米粒子,除了使用納米技術(shù)外,還探索了具有pH響應(yīng)性的復(fù)合水凝膠等微粒[46]。

海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)子化行為不同,它在堿性環(huán)境下可溶,在酸性環(huán)境中不溶解,酸性條件下形成多孔、不溶性酸基質(zhì),能夠保護(hù)藥物免收胃腸道的損傷,但是在中性、堿性條件下時(shí),海藻酸鈉基質(zhì)轉(zhuǎn)化為可溶性黏性層,導(dǎo)致聚合物分解和化合物的釋放[46-47]。因此,海藻酸鈉納米粒子在SIF中的釋放曲線更快,可能是因?yàn)橹行曰驂A性的條件下,海藻酸鈉網(wǎng)絡(luò)被侵蝕[47],PARK等[48]從蛋清中提取的溶酶體在胃中低pH條件的影響下,抗菌活性顯著降低,通過(guò)制備海藻酸鹽-溶酶體復(fù)合物,將水解時(shí)間延長(zhǎng)至2 h,有效提高了該復(fù)合物在酸性條件下的穩(wěn)定性。但海藻酸鈉納米粒子存在機(jī)械強(qiáng)度低、膜密度不均勻等問(wèn)題,使膜變性,導(dǎo)致藥物泄露。因此,目前采用制備PEC的方法制備海藻酸鈉-子蛋白質(zhì)納米制劑,以提高穩(wěn)定性、減少給藥后的快速破裂。CHEN等[49]開(kāi)發(fā)了一種新型pH敏感口服胰島素PEC,該P(yáng)EC由2種已經(jīng)負(fù)載胰島素的納米粒子,CS-NPs和海藻酸鈉NPs通過(guò)靜電相互作用制備而成。CS上游離的氨基(—NH3+)和海藻酸鈉上游離羧基(—COO-)之間靜電吸引是PEC形成的主要作用力,形成的PEC能夠提高胰島素的穩(wěn)定性,不受胃液和胃蛋白酶的影響[16]。用透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)觀察到PEC在不同pH條件下的形態(tài),在pH為1.2時(shí)PEC結(jié)構(gòu)破損,交聯(lián)結(jié)構(gòu)有明顯差異,在pH為6.8和7.4時(shí)呈現(xiàn)不規(guī)則圓形狀,該納米粒子有利于pH敏感性的納米載體的研制。

3.3 以淀粉為載體制備口服蛋白質(zhì)納米粒子

淀粉在自然界分布廣泛,并具有價(jià)格低廉、生物相容性好、易獲取、無(wú)毒、高穩(wěn)定性等特點(diǎn)。不管是直鏈淀粉還是支鏈淀粉,均含有大量羥基基團(tuán),具有強(qiáng)大的吸水性。但作為口服制劑,淀粉容易被上消化道中的如唾液淀粉酶等多種淀粉酶水解,若將其作為口服藥物載體,必須將大小為微米級(jí)別的淀粉顆粒改性成為納米級(jí)別的淀粉顆粒,提高穩(wěn)定性[50]。對(duì)比其他載體材料,淀粉納米顆粒最終降解產(chǎn)物為H2O和CO2,可以通過(guò)循環(huán)系統(tǒng)排出體外,在體內(nèi)無(wú)殘留,安全性較高。貝伐單抗是一種人源化單克隆抗體IgG1,能夠有效抑制腫瘤血管生長(zhǎng),但無(wú)法通過(guò)口服吸收。DE DLIVEIRA等[51]通過(guò)結(jié)冷膠和逆行淀粉包載了貝伐珠單抗,有效提高貝伐珠單抗的締合效率,并保證其穩(wěn)定性。姬娜[52]通過(guò)自組裝的方法,以短直鏈淀粉作為主要基材、玉米醇溶蛋白和殼聚糖作為輔助基材,包載胰島素。糖尿病大鼠口服實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)短直鏈淀粉-胰島素納米復(fù)合物劑量為100 IU/kg時(shí),生物利用度為4.59%,在8 h內(nèi)血糖無(wú)明顯波動(dòng),表明此載體具有長(zhǎng)時(shí)降血糖效果,但由于制備的淀粉顆粒為混合物,無(wú)法明確具體相互作用的方式。因此,淀粉作為納米載體的作用機(jī)制需進(jìn)一步探究。

3.4 以右旋糖酐為載體制備口服蛋白質(zhì)納米粒子

右旋糖酐是由葡萄糖為單糖組成,由糖苷鍵連接而成的同型多糖,具有較好的水溶性、生物相容性和生物降解性。在納米遞送系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,如,SONG等[53]用右旋糖酐-低分子量魚(yú)精蛋白-聚乳酸-羥基乙酸共聚物制備包封艾塞那肽的納米粒子,該納米粒子能夠促進(jìn)黏液屏障的滲透,通過(guò)蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域介導(dǎo)細(xì)胞易位,此外,口服艾塞那肽納米粒子的相對(duì)生物利用度為8.4%,對(duì)2型糖尿病小鼠有顯著降血糖作用。

3.5 以果膠為載體制備口服蛋白質(zhì)納米粒子

果膠是一種廣泛存在于植物細(xì)胞壁的多糖,果膠可分為2種類型,即低甲氧基果膠和高甲氧基果膠[54]。在納米粒子的運(yùn)輸中,果膠也得到了廣泛的關(guān)注。由于果膠屬于可溶性膳食纖維,直到結(jié)腸處才會(huì)被微生物降解,因此果膠也是結(jié)腸靶向給藥的理想載體[54]。β-乳球蛋白是一種乳清蛋白,有抵抗胃蛋白酶以及易與疏水配體結(jié)合等特點(diǎn),使其具有運(yùn)輸結(jié)腸癌藥物的潛力[55]。將β-乳球蛋白-果膠納米粒子設(shè)計(jì)用于將新合成的抗癌鉑絡(luò)合物轉(zhuǎn)移到結(jié)腸[56],模擬胃腸道條件下,該絡(luò)合物在酸性條件下穩(wěn)定,在pH 7下釋放其產(chǎn)物。

4 天然多糖作為口服蛋白質(zhì)遞送系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)

4.1 高黏附能力

多糖,如殼聚糖[15]、淀粉[57]、海藻酸鈉[48]等都具有黏膜黏附特性,黏附特性能有效延長(zhǎng)納米粒子在腸道的滯留時(shí)間,從而提高生物利用度。逆行淀粉形成的納米粒子在pH 1.2和6.8的表達(dá)中顯示了較弱的相互作用,說(shuō)明該多糖不會(huì)顯著影響?zhàn)ひ旱牧髯儗W(xué)和屏障特性,該納米粒子形成的弱相互作用,不會(huì)輕易受到吐溫20等阻滯劑的影響,可以成為黏膜黏附遞送系統(tǒng)發(fā)展方向[57]。

4.2 克服腸道屏障的能力

由于帶負(fù)電的黏蛋白和聚合物正電荷的相互作用,殼聚糖能夠提高腸上皮細(xì)胞通透性。此外,殼聚糖可以螯合TJs中的Ca2+,同時(shí)下調(diào)claudin-4蛋白[3]。然而,到目前為止,尚沒(méi)有證明完整的納米結(jié)構(gòu)在正常生理?xiàng)l件下能通過(guò)細(xì)胞旁途徑突破腸道屏障的研究。

4.3 用于結(jié)腸靶向用藥

殼聚糖[58]、果膠[59]、海藻酸鈉[60]、右旋糖酐[61]均有結(jié)腸靶向運(yùn)輸?shù)膱?bào)道,但對(duì)殼聚糖、果膠的研究較為深入。殼聚糖在酸性條件下的溶解性,保證了殼聚糖在胃部環(huán)境的穩(wěn)定性,并能夠被豐富的結(jié)腸微生物群降解[58],用殼聚糖膠囊和羧甲基纖維素分別包載5-氨基水楊酸治療患結(jié)腸炎的大鼠,通過(guò)盲腸內(nèi)容物分析,殼聚糖膠囊釋放的5-氨基水楊酸含量顯著上升,說(shuō)明該體系具有結(jié)腸靶向的潛力[62]。果膠在上消化道保持完整,并幾乎能夠完全被結(jié)腸菌群降解,因此能用于結(jié)腸特異性藥物輸送。姜黃素被證明具有抗癌作用的藥物,成功配制了柑橘果膠包載的姜黃素,在結(jié)腸培養(yǎng)基上顯示了高黏膜黏附性,在胃時(shí)黏附性最小,pH 1.2時(shí),約有18%姜黃素釋放,在24 h內(nèi)在盲腸培養(yǎng)基釋放高達(dá)68%,說(shuō)明該納米粒子具有作為口服靶向治療結(jié)腸癌制劑的應(yīng)用潛力[59]。

5 結(jié)語(yǔ)

本文主要概述了天然多糖類物質(zhì)用于制備口服大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)納米遞送載體及其應(yīng)用。天然多糖因其無(wú)毒和生物可降解性、化學(xué)結(jié)構(gòu)的可修飾性以及可形成具有不同機(jī)械性能和結(jié)構(gòu)的基質(zhì),并能在生物分子與基質(zhì)結(jié)合后保持生物活性的能力,因此在過(guò)去十幾年中被廣泛用來(lái)開(kāi)發(fā)生物療法給藥系統(tǒng),用于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的遞送。而在口服大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)遞送方面,使用單一多糖作為載體通常無(wú)法達(dá)到口服控釋的效果,需要對(duì)多糖進(jìn)行更精確的化學(xué)修飾,或?qū)⑵渑c其他天然或合成聚合物結(jié)合,以改善遞送載體的總體結(jié)構(gòu)行為,如機(jī)械性能或降解行為,并在分子和納米水平上調(diào)節(jié)與生物活性劑的相互作用,以進(jìn)一步提高大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)的口服生物利用度。同時(shí),到目前,大部分的口服蛋白質(zhì)納米制劑的研究主要仍處于實(shí)驗(yàn)室階段,未能夠進(jìn)行商業(yè)化,天然多糖主要缺點(diǎn)包括機(jī)械強(qiáng)度低、穩(wěn)定性差、水化速率不受控制以及存在雜質(zhì),因此,必須嚴(yán)格控制天然多糖的質(zhì)量穩(wěn)定性,為后續(xù)多糖載體商業(yè)化提供研究基礎(chǔ)。